...DNA提取所制备污泥样品悬浮于体积(体积/重量)SL缓冲液(蔗糖,.M氯化钠mM乙二胺四乙酸二钠,mMTris-HCl,pH.)其中含有mg/ml溶菌酶,然后进行超声波处理秒。
后在rpm离心分离分钟回收水相。
如上所述,回收水相重复三次。
所回收水相,在.体积(重量/体积)蛋白酶K,用.体积(重量/体积)dodecylsufate钠,随后用.体积(重量/体积)HTMAB,每次分钟,在℃培养。
在,rpm下离心分钟后,被转移到一个新管水相中DNA用一个相同体积PCI溶液(酚-氯仿-异戊醇=::,体积/体积/体积)和CIA溶液(氯仿-异戊醇=:,体积/体积)提取,然后沉淀在.体积M醋酸钠(pH值.)和.倍体积无水乙醇中。
DNA沉淀通过用(体积/体积)乙醇洗涤并在干燥干燥器方式获得。
最后,将干燥沉淀重新悬浮于TE缓冲液中,并储存在℃。
...PCR扩增大肠埃希氏菌SrDNA和位置相对应区域PCR扩增使用正向引物EUBf(’-CCTACGGGAGGCAGCAG-’)与GC夹(’-CGCCCGCCGCGCGGCGGCGGGCGGGGCGGCACGGGGGG–’)在’端部建立稳定DNA片段熔化行为和反向引物UNIVr(’-CCCCGTCAATTCCTTTGAGTTT-’)。
PCR扩增以自动热循环仪(基因扩增PCR系统,应用生物系