1、“.....不需要实验中的昂贵仪器，因而易于在基层食品 质量检测部门和医院推广使用。 目前，国外已有将环介导等温扩增技术应用于病毒和 检测的报道，但将其应用于病原菌检测的文献报道极少，国内基本 上还未开展环介导的等温扩增研究工作。本项目首次提出将环介导的等温扩增技术应用于食品和临床标本中病原菌的检测，并对目前的等 温扩增方法提出改进策略，发展可同时检测多种病原菌的多重等温扩 增技术，以克服当前个等温扩增反应只能检测种或的缺 点。因此，本项目的实施，将开发出具有自主知识产权的病原菌检测 试剂盒。 项目完成时达到的技术水平 项目完成时，开发的多重环介导等温扩增快速检测病原菌技术及 其配套试剂盒达到国际先进水平......”。

2、“.....根据数据库公布 的常见病原菌序列，采用专用引物设计软件设计特异性 引物包括每类致病菌的两个外引物两个内引物和两个环引物，其 中每个内引物均具有两段能够识别靶分子上特定位点的序列，以保证 靶序列的特异性扩增。常见病原菌基因组的提取。采用本实验室建立的基因组 快速提取技术提取致病菌。 扩增反应体系的优化对引物浓度内引物和外引物的最 佳浓度比模板浓度浓度聚合酶用量浓度等条 件进行优化。 ④温育条件的优化在之间优化等温扩增温度。 扩增产物的检测建立快速显色法和电泳分析法两种检测扩增 产物的方法。 以上述研究结果为基础......”。

3、“..... 拷贝。 本项目建立的方法不产生非特异性扩增产物。 对病原菌目的基因的等温扩增过程在分钟内完成，显 色法检测扩增产物在分钟内完成，电泳法检测扩增产物在分钟内 完成。 四项目执行过程中各阶段目标 年度 第季度设计引物，引物合成，购买实验菌株和有关试剂，完 善实验条件。 第二季度样品采集，病原菌提取。 第三季度等温扩增反应体系优化，温育条件优化。 第四季度扩增反应产物检测方法的建立快速显色法电泳分 析法。 年度 第季度环介导等温扩增快速检测病原菌方法操作程序确定，多重等温扩增同时检测多种病原菌实验技术建立。 第二季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 的准确度分析......”。

4、“..... 第四季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 与常规扩增方法比较分析。 年度 第季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 在食品和临床标本上的应用及效果分析。 第二季度环介导等温扩增快速检测病原菌试剂盒和多重等温扩 增试剂盒研制。 第三季度试剂盒的应用及技术推广。 第四季度课题总结，鉴定。 五项目经费预算情况 本项目申请科研经费万元。其中设备仪器购置费万元材 料样品加工费万元土建安装费万元资料调研费万元实验检测费万元鉴定费万元。 三项目实施支撑条件 项目技术来源 本项目的技术由项目申请人建立......”。

5、“.....这些重点学科和重点实验室设施完善先进，具有进行本项目 研究的实验条件和实验场地，为本项目的完成提供了保障。 项目申请人所在的江西省生物化学与分子生物学重点实验室实验 条件先进，具有型仪，全自动测序仪 型高速冷冻离心机超速冷冻离心机超低温冰箱超纯 水系统各种规格的电泳仪紫外分光光度计设施先进的细菌培养 室等仪器设备。现已完成了本项目所需的科研平台建设工作。 项目申请人长期从事分子生物学研究工作，熟练掌握了分子生物 学研究技术。课题组已开展了本项目的前期研究工作，目前正在进行 嗜水单胞菌和金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增研究，基本掌握了等温扩增专用引物设计软件的使用和等温扩增的操作要点，这为本项目 的顺利完成奠定了技术基础......”。

6、“.....人才资源丰富，科研力量雄厚。生命科学学院有专任教 师人，其中正副教授人，讲师人，中高级技术人员比例。 项目组人员专业结构职称结构 项目组科研人员人，主要由生物化学与分子生物学专业微生 物学专业人员组成，专业结构合理。科研人员中，教授人副教授 人研究生人。其中具有博士学位的教师人。 项目新增投资筹集情况 本项目申请科研经费万元。 四项目预期经济效益 预期市场需求 病原菌的检测是食品检测和临床诊断中的常规项目，食品检测部 门和医疗机构对检测试剂的需求量巨大。等温扩增技术在病原菌的检 测工作中有很大潜力。然而......”。

7、“.....是国家重点支持的研究领域，项目主 要针对严重影响人类健康的主要病原菌的检测与诊断需要进行检测技 术的研究与试剂盒的开发，本项目的实施可产生具有自主知识产权的 科研成果。本项目技术含量高，市场竞争力强，项目完成后能够产生 较好的经济效益和社会效益，项目符合国家产业技术政策。 项目所处技术领域技术发展现状 目前的病原菌检测方法费时费力准确性低，开发快速准确 低成本的检测技术和配套试剂是病原菌检测工作中亟待攻克的难题。 本项目针对病原菌检测中存在的问题，采用高灵敏度高特异性的环 介导等温扩增技术开发出简便快速经济的检测试剂。 项目技术先进性......”。

8、“.....在恒温条件下特异高效快速地扩增的新技术。该 技术在内能扩增出靶序列拷贝。技术以其特异性强灵敏度高快速准确和操作简便等优点在核酸的科学研究疾病的诊断 和转基因食品检测等领域得到了日益广泛的应用。该技术的推广对生 物学食品科学及医学领域中的检测和诊断技术的进步有推动作用。 项目目前进展情况 课题组开展了大量前期研究工作，已完成了本项目所需的科研平 台建设任务，开展了嗜水单胞菌和金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增 研究，取得了阶段性研究成果，这些工作为本项目的顺利完成奠定了 基础。 二技术方案论述 项目技术关键点和创新点，项目完成时达到的技术 水平 技术关键 本项目的技术关键之是引物设计。与常规引物不同， 环介导等温扩增引物设计难度大......”。

9、“.....目前我们已从国际基因组数据库中下载了 部分病原菌的基因组，并根据基因组特点采用等温扩增软件设计了 部分引物，现正通过实验确定这些引物的性能。本项目的另技术关键是最佳等温扩增体系优化。通过对引 物浓度内引物和外引物的最佳浓度比模板浓度浓度 聚合酶用量浓度等条件进行优化，能够获得最佳实验条件。 创新点 既往对病原菌的检测般采用细菌分离培养鉴定法，但该方 法的准确率低，所需时间长，往往延误临床正确的诊断和治疗。近年 来，人们将技术用于病原菌的检测。技术虽然较传统方法灵敏 快速，但需要较昂贵的仪器设备。更为重要的是，方法容易产生非 特异性扩增产物，造成假阳性和假阴性结果，影响对样品的正确判断......”。