1、“.....也是国家科技部科技支撑计划生物技术产品中试与规模化生产配套技术与工艺研究与示范重点支持项目。基因重组纤维素酶项目对相关产业发展作用与影响提升酶制剂行业整体水平由于该项目是我国酶制剂行业第个采用具有自主知识产权工程菌株进行产业化生产项目,因此,对提高我国酶制剂行业和国外企业竞争能力,提升行业整体水平具有积极意义。提高用户产品质量降低生产成本采用该项目产品,对提高我国纺织行业饲料行业中药行业产品质量,降低生产成本,增强产品市场竞争能力具有重要作用。该项目对关联产业影响促进非粮燃料酒精尽快实现产业化,化解能源危机,保障粮食安全近年来,由于能源紧缺和技术手段缺乏,我国不得不以粮食作为原料生产燃料酒精,但是由于保障粮食安全需要,发展非粮燃料酒精是现阶段解决能源短缺必由之路。秸秆燃料酒精产业化生产,必须使用纤维素酶,因此,该项目产业化是非粮燃料酒精产业化生产关键因素之......”。
2、“.....推动农业产业结构调整该项目生产主要原材料是秸秆,由于原料在产地必须进行初发酵,因此,在农村将产生新初发酵行业,同时,基因重组纤维素酶面市后,在农村还将产生以纤维素酶作为催化剂,生产秸秆糖化饲料发酵企业。因此,该项目对地方农业产业结构调整,加快社会主义新农村建设,拉动农民致富,加快农村小康社会进程具有积极意义。推动地方经济发展吉林市地处边疆近海省,自然环境优越,是我国最具魅力城市之,是福布斯排行榜评价最适合发展工业城市,是吉林省玉米,水稻主要产区之。但是,吉林市经济发展不平衡,缺少生物工程高新技术项目。引进生物工程高新技术企业,扶持地方农业产业化龙头项目是吉林市经济发展重大举措之,因此,该项目成为吉林市政府和吉林高新技术产业开发区重点招商引资项目。有利于资源再利用发展循环经济提高资源经济价值玉米及其它粮食秸秆多年以来直作为废弃物或燃料,其经济价值几乎趋于零。基因重组纤维素酶项目采用主要原料是玉米秸秆。这资源是可再生资源,经过粗加工,每吨玉米秸秆价格可以达到元......”。
3、“.....以粗加工秸秆为基数,每吨秸秆产生价值可提升十倍左右,提片段,将其用酶补平后回收纯化。将质粒载体在多克隆位点用限制性内切酶消化,产生粘性突出末端用酶补平并将其回收纯化,将上述两个片段以合适比例建立反应体系,转化大肠杆菌,获得重组质粒载体。对筛选到重组质粒用内切酶和进行鉴定分析,所扩增片段含有完整序列。重组质粒载体构建将质粒载体在用限制性内切酶消化,产生粘性突出末端用酶补平并将其回收纯化,与片段以合适比例建立反应体系,转化大肠杆菌,获得具有启动子重组质粒载体。重组质粒转化及重组菌筛选将构建重组质粒电转化宿主菌,利用显性标记进行初筛而后进步采用液体摇瓶培养检测发酵液复筛,获得株表达量较高重组菌,命名为。液体培养基深层发酵在通气机械搅拌发酵林农业大学完成了中试,中试结果与实验室试验结果致详见吉林农业大学生化实验室检测报告。中试及小规模生产样品已交付用户使用,用户已出具使用报告详见宁夏夏盛果汁果酒酶有限公司传真函......”。
4、“.....此外,公司技术专家有十年以上纤维素酶生产经验,已经掌握了成熟纤维素酶生产工艺,因此,可以实现产业化生产。公司专家已经设计了纤维素酶系列产品生产线,主体设备及内部构件和管路连接已经完成。配套设备及装饰工程完工后即可投入生产。必要说明。纤维素酶工程菌株构建采用是国际前沿生物工程技术及基因打靶技术,但是,酶制剂生产工艺是公知技术。此外,生产过程发酵条件优于实验室条件,因此,只要中试设定条件与生产工艺条件致,那么,所生产出来产品性能将优于中试。技术或工艺特点以及与现有技术或工艺比较所具有优势技术原理纤维素酶自然界中纤维素降解需要内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶共同作用。纤维素降解过程首先被外切纤维素酶吸附到不溶性纤维素表面,使结晶结构纤维素长分子链开裂,聚集结构解聚,长链分子末端部分发生游离从而为纤维素水解酶类作用提高了可及性和反应性,从而使纤维素易于水化之后内切酶作用于经外切活化纤维素,分解其,键,产生纤维二糖三糖等短链低聚糖......”。
5、“.....葡萄糖苷酶协同作用下,纤维素,糖苷键逐步水解,形成纤维寡糖和葡萄糖。其催化机理与溶菌酶相似,糖苷配基脱去涉及个保守羧基氨基酸分别作为质子供体和亲核试剂执行酸碱催化双置换反应谷氨酸位于细菌和真菌,及葡萄糖苷酶活性位点。协同作用其作用顺序不是绝对按各酶功能也不是简单固定。和都能引起纤维素分散和脱纤化,因此纤维素结晶结构被打乱导致变形,使纤维素酶能深入纤维素分子界面之间,从而使纤维素孔壁腔壁和微裂隙壁压力增大,水分子介入又使纤维素分子之间氢键被破坏,产生部分可溶性纤维微结晶,利于进步降解。基因同源重组技术基因同源重组技术,又称基因打靶,指外源与受体细胞染色体上同源序列之间发生重组并整合在预定位点上,从而改变细胞遗传特性方法。根据重组后靶基因特征可以分为两种类型由于外源序列引入或部分取代,靶基因原有结构被破坏,此即为基因破坏或剔除靶基因全部序列为新基因所取代。这新兴技术已被证明为目前能精确修饰基因组最有效方法......”。
6、“.....从而定向改变细胞遗传结构和特征。同源重组技术特点为同源重组技术能把外源基因引入染色体特定片段上,在设计合理情况下,同源重组技术可对宿主细胞染色体基因进行精细改造同源重组后被击中基因或新引入基因随染色体复制而稳定复制。技术特点或创新点本项目由于在上游加入不受葡萄糖抑制真核启动子,使不再受到培养基中葡萄糖影响,获得高效表达,从而促进其他纤维素酶基因协同表达,较大幅度提高菌株在发酵过程中产纤维素酶能力。几乎所有已克隆纤维素酶基因都已在大肠杆菌中得到表达。但是这体系表达率低,产生酶多数不能分泌到胞外。本项目成果使纤维素酶在原木霉宿主菌中获得稳定高效表达,可以用于大规模培养及工业化生产。本项目对基因工程菌株培养及产酶条件进行了摸索,尝试进行液体培养基深层发酵,通过分段控制值温度和溶解氧进行发酵,发酵小时左右酶活达到最高,为工业化大规模生产纤维素酶提供了参考。技术研制报告纤维素酶属诱导型酶类其多个酶组分表达调控是个非常复杂过程,其中具有关键作用。据报道......”。
7、“.....会影响纤维素酶系其它酶表达,而缺失,等基因时,只影响自身表达。另有研究表明是木霉纤维素酶系统中最先表达酶,其产物进步诱导纤维素酶其他酶如,等酶基因表达。而基因表达又受到葡萄糖抑制因此要提高木霉纤维素酶产酶能力就可以通过木霉基因克隆,将其构建在不受葡萄糖抑制真核启动子下游如,等启动子,使不再受到培养基中葡萄糖影响而得到高效表达,从而促进其他纤维素酶基因协同表达,较大幅度提高菌株在发酵过程中产纤维素酶能力。由于木霉菌属于半知菌,缺乏有性阶段,对其杂交育种有构和特征。同源重组技术特点为同源重组技术能把外源基因引入染色体特定片段上,在设计合理情况下,同源重组技术可对宿主细胞染色体基因进行精细改造同源重组后被击中基因或新引入基因随染色体复制而稳定复制。技术特点或创新点本项目由于在上游加入不受葡萄糖抑制真核启动子,使不再受到培养基中葡萄糖影响,获得高效表达,从而促进其他纤维素酶基因协同表达,较大幅度提高菌株在发酵过程中产纤维素酶能力......”。
8、“.....但是这体系表达率低,产生酶多数不能分泌到胞外。本项目成果使纤维素酶在原木霉宿主菌中获得稳定高效表达,可以用于大规模培养及工业化生产。本项目对基因工程菌株培养及产酶条件进行了摸索,尝试进行液体培养基深层发酵,通过分段控制值温度和溶解氧进行发酵,发酵小时左右酶活达到最高,为工业化大规模生产纤维素酶提供了参考。技术研制报告纤维素酶属诱导型酶类其多个酶组分表达调控是个非常复杂过程,其中具有关键作用。据报道,当基因缺失时,会影响纤维素酶系其它酶表达,而缺失,等基因时,只影响自身表达。另有研究表明是木霉纤维素酶系统中最先表达酶,其产物进步诱导纤维素酶其他酶如,等酶基因表达。而基因表达又受到葡萄糖抑制因此要提高木霉纤维素酶产酶能力就可以通过木霉基因克隆,将其构建在不受葡萄糖抑制真核启动子下游如,等启动子,使不再受到培养基中葡萄糖影响而得到高效表达,从而促进其他纤维素酶基因协同表达......”。
9、“.....市场这只看不见的手使传统的工业文明达到了鼎盛时期。工业化在创造传统工业文明的同时,也对现代经济社会发展的生态基础造成了根本性的破坏,资源环境和生态危机日益严重,其直接原因是世纪以来造与自然尖锐对立的非持续的工业生产技术,其本质在于单纯的市场调节已无力减少技术发展的边际外部费用递增趋势。了资源利用率,提升了资源经济价值。市场分析该项目产品主要应用领域为饲料麻棉纺织制药生物发酵等行业,该项目产品是上述行业产品生产过程中不可或缺添加剂。据不完全统计,国内市场纤维素酶年需求大约万吨以上,年至年该类产品年需求增幅为国际市场年需求大约万吨,主要集中在欧美地区,占国际市场总消耗量,而且需求量正在以每年速度增长。此外,除燃料酒精行业外,用户直接使用是复合酶,纤维素酶在复合酶中添加比例般为左右,因此,纤维素酶市场需求量统计般以复合酶用量为依据。复合酶年用量统计如下详见附件饲料行业我国年产饲料亿吨左右,按每吨饲料添加公斤复合酶计算,年复合酶用量约为万吨左右......”。
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