1、“.....均由吉林大学动物医学学院人兽共患病研究所病毒实验室保存。检测单克隆抗体的特异性将纯化的重组泳道和泳道蛋白进行分离后，进行检测。以获得的单克隆阳性杂交瘤细胞培养上清为抗，标记的山羊抗小鼠作为抗进行检测，并以蛋白作为阴性对照，结果显示，株单克隆抗体均与蛋白结合，在左右出现特异性条带，而蛋白泳道未出现条带图。免疫荧光法验证单克隆抗体的特异性将生的特异性荧光腹水的制备及纯化已经鉴定的杂交瘤细胞经小鼠腹腔制备腹水，收集的腹水采用层析柱纯化，经纯化透析的单克隆抗体通过电泳检测，制备的腹水中含有大量，且浓度很高，可以满足后续试验的需求。在感染过程中，能刺激宿主产生针对结构蛋白和和非结构蛋白的抗体，只有针对的抗体能有效中和病毒。抗蛋白的抗体是针对型流感病毒感染产生的特异性抗体......”。

2、“.....基金吉林省科学技术厅自然科学基金项目。探讨如何鉴定及制备亚型禽流感病毒特异性单克隆抗体病毒学论文。检测单克隆抗体的特异性将纯化的重组泳道和泳道蛋白进行分离后，进行检测。以获得的单克隆阳性杂交瘤细胞培养上清为抗，标记的山羊抗小鼠作为抗进行检测，并以蛋白作为阴性对照，结果显示，株单克隆抗体均与蛋白结合，在左右出现特值阳性，且蛋白值为阴性的即为抗的单克隆抗体。经此方法保证筛选到针对的特异性单克隆抗体。本研究经间接试验筛选获得株单克隆特异性细胞株，分别为和株，通过，证实抗体均能识别结合重组蛋白，而且表明本研究制备的蛋白具有较强的免疫原性和抗原性进步用间接免疫荧光试验分析抗体的特异性，结果表明株单克隆抗体均能与细胞表达的蛋白产生特异性反应，显示特异性荧光......”。

3、“.....存在于多种流感病毒毒株中，其存在及表达水平的高低与的毒力及致病性密切相关。作为个重要的毒力相关因子，具有多种重要的生物学功能，但其功能通常呈现出细胞及宿主类型的特异性，所以其分子作用机制较为复杂且目前尚未被阐明。蛋白的末端具有两亲性螺旋，能够相互作用，从而产生寡聚体。其末端通过结合线粒体内膜蛋白和外膜蛋白，引起线粒体通透性增强和膜电位下降，最终导致细胞凋亡。近年来研究证实在感染的小以阳性对照读值最接近于，且大于的抗原和血清稀释度作为最佳工作浓度。细胞融合单克隆抗体的筛选及亚型鉴定小鼠骨髓瘤细胞个与加强免疫后小鼠脾细胞个按照∶的比例融合，用含有培养基连续培养，融合后的杂交瘤细胞换成培养基培养，逐渐更换为无完全培养基。待融合细胞生长到孔底面积的时，用间接试验进行阳性孔杂交瘤细胞筛选。选取值较高的细胞孔通过有限稀释法进行次次克隆纯化，直至细胞孔阳性率达......”。

4、“.....分析重组蛋白的表达情况与表达形式。采用凝胶亲和层析柱纯化重组蛋白后，用还原型谷胱甘肽室温洗脱目的蛋白洗脱下来的重组蛋白用超滤离心管进行浓缩，采用蛋白定量试剂盒进行定量分析，臵保存备用。动物免疫以纯化的重组蛋白为免疫原，按照每只免疫周龄周龄的小鼠。将抗原与等体积佐剂混合乳化后背部皮下多点注射，阴性对照组注射等体积的生理盐水共进行次免疫接种，每次免疫接理盐水共进行次免疫接种，每次免疫接种间隔周，次免疫周后采血，分离血清检测抗体效价，血清分装后臵于保存。次免疫后周腹腔注射加强免疫首次免疫接种使用弗氏佐剂，以后免疫接种使用弗氏不完全佐剂。表引物序列重组蛋白间接方法的建立利用方阵滴定法进行，确定抗原最佳包被浓度与血清最佳稀释度。重组蛋白纯化后浓度为，用包被液对其进行∶∶∶∶及∶倍稀释，以确定最佳抗原稀释度同时......”。

5、“.....以未免疫小鼠血清作为阴性对照。按照阳性血清鉴定单克隆抗体特异性用纯化的重组蛋白与蛋白分别包被酶标板。加入待检融合细胞培养上清，孵育，洗板次次，加入∶稀释的标记的山羊抗鼠抗孔，孵育后，清洗遍遍，加入孔显色液，避光作用，加孔终止反应，读取各检测孔数值。蛋白的表达纯化及鉴定将测序正确的重组质粒转化至大肠埃希菌感受态细胞，接种于液体培养基，培养过夜将培养物转接培养至医学院，于洪敏型流感病毒与相互作用及对信号通路的调控吉林长春吉林大学动物医学学院，徐国双，刘恩华，张茂林，段铭，关振宏禽流感病毒特异性单克隆抗体的制备与鉴定动物医学进展，基金吉林省科学技术厅自然科学基金项目。探讨如何鉴定及制备亚型禽流感病毒特异性单克隆抗体病毒学论文。以阳性对照读值最接近于，且大于的抗原和血清稀释度作为最佳工作浓度......”。

6、“.....次免疫周后采血，分离血清检测抗体效价，血清分装后臵于保存。次免疫后周腹腔注射加强免疫首次免疫接种使用弗氏佐剂，以后免疫接种使用弗氏不完全佐剂。表引物序列重组蛋白间接方法的建立利用方阵滴定法进行，确定抗原最佳包被浓度与血清最佳稀释度。重组蛋白纯化后浓度为，用包被液对其进行∶∶∶∶及∶倍稀释，以确定最佳抗原稀释度同时，将小鼠阳性血清进行倍比稀释，以未免疫小鼠血清作为阴性对照。按照阳性血清值阴性血清值，求出且值相对最大时对应的抗原抗体稀释度为最佳稀释度。经筛选，抗原最佳稀释浓度为，阳性血清的最佳稀释倍数为∶。最佳反应时间，最佳孵育温度为，羊抗鼠最佳稀释度为∶时阳性孔值最接近于。探讨如何鉴定及制备亚型禽流感病毒特异性单克隆抗体病毒学论文。蛋白的表达纯化及鉴定将测序正确的重组质粒转化至大肠埃希菌感受态细胞......”。

7、“.....培养过夜将培养物转接培养至值为，以终浓度为诱导过夜免疫原，进行间接筛选试验时，将纯化的重组蛋白和蛋白分别包被酶标板，以蛋白做抗原进行平行筛选，选取重组蛋白值阳性，且蛋白值为阴性的即为抗的单克隆抗体。经此方法保证筛选到针对的特异性单克隆抗体。本研究经间接试验筛选获得株单克隆特异性细胞株，分别为和株，通过，证实抗体均能识别结合重组蛋白，而且表明本研究制备的蛋白具有较强的免疫原性和抗原性进步用间接免值阴性血清值，求出值。离心，收集上清，利用亲合层析柱进行纯化，分装后臵于冻存备用。结果重组蛋白的原核表达及鉴定将重组质粒转化大肠埃希菌菌，经白表达，检测结果显示，在分子质量约附近出现特异性条带图，与预期表达产物分子质量相符，且重组蛋白以可溶性形式表达。阳性杂交瘤细胞筛选方法建立以梯度稀释的重组蛋白包被酶标板，加入倍比稀释的抗体进行矩阵试验，选择阳性血清值约为......”。

8、“.....以终浓度为诱导过夜收集菌体超声破碎，分析重组蛋白的表达情况与表达形式。采用凝胶亲和层析柱纯化重组蛋白后，用还原型谷胱甘肽室温洗脱目的蛋白洗脱下来的重组蛋白用超滤离心管进行浓缩，采用蛋白定量试剂盒进行定量分析，臵保存备用。动物免疫以纯化的重组蛋白为免疫原，按照每只免疫周龄周龄的小鼠。将抗原与等体积佐剂混合乳化后背部皮下多点注射，阴性对照组注射等体积的生小鼠脾细胞个按照∶的比例融合，用含有培养基连续培养，融合后的杂交瘤细胞换成培养基培养，逐渐更换为无完全培养基。待融合细胞生长到孔底面积的时，用间接试验进行阳性孔杂交瘤细胞筛选。选取值较高的细胞孔通过有限稀释法进行次次克隆纯化，直至细胞孔阳性率达。使用抗体亚类鉴定试剂盒对单克隆抗体亚型进行鉴定，取阳性细胞株上清作为抗，分别以抗和的抗体作为抗，使用间接对获得的单克隆抗体进行亚类鉴定。间接疫荧光试验分析抗体的特异性......”。

9、“.....显示特异性荧光，表明获得的单克隆抗体特异性和反应性较强。综上所述，本研究成功制备了特异性识别流感病毒蛋白末端肽段的小鼠单克隆抗体，为流感病毒感染的预防与病毒致病机制的研究积累了材料。参考文献黄金凤枯草芽孢杆菌作为细菌活载体递呈蛋白和蛋白及其免疫效果的研究江苏南京南京农业大学，颜文娟甲型流感分子特征及与人基因关联性的研究江苏南京东南大学探讨如何鉴定及制备亚型禽流感病毒特异性单克隆抗体病毒学论文体。其末端通过结合线粒体内膜蛋白和外膜蛋白，引起线粒体通透性增强和膜电位下降，最终导致细胞凋亡。近年来研究证实在感染的小鼠和人体中表达的数量足够引起抗体反应，而且其末端特异性抗体在病毒感染中的生物学意义尚需深入探索。本研究构建了表达流感病毒的羧基末端的重组载体，诱导目的蛋白表达并以纯化的重组蛋白为免疫原免疫小鼠后细胞进行融合......”。