1、“.....制备个的细胞悬液。取周龄雌鼠，腹腔注射液体石蜡，每只，周后向腹腔注射细胞悬液。后小鼠腹部明显胀大，收集腹水。离心，取上清液，即为含抗非洲猪瘟病毒蛋白单克隆抗体的腹水溶液，磷酸氢钠磷酸氢钠氯化钾调至加蒸馏水至高压灭菌，保存备用。包被液碳酸盐缓冲液或水溶解后置于冰箱，周内使用。洗涤液，水溶解后置于冰箱备用。稀释液明胶或鸡血清洗涤液明胶或洗涤液鸡血清溶解或混均后置于冰箱备用。底物液柠檬酸缓冲液乙酸钠液乙酸钠水溶解后置于。异丙基硫代半乳糖苷。聚乙醇。十烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳。阻断百分率。辣根过氧化物酶。非洲猪瘟病毒抗体检测阻断酶联免疫吸附法。加底物液每孔加底物液，作用。加终止液取出反应板，每孔快速加入终止液，在内测其吸光值值。结果读取用酶标仪在波长下，测定其值。结果判定样品血清平均值阴性血清对照平均值当标准阳性血清非洲猪瘟病毒抗体检测阻断酶联免疫吸附法......”。

2、“.....标记的单克隆抗体的制备杂交瘤细胞分泌抗非洲猪瘟病毒蛋白的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，由中国典型培养物保藏中心武汉保藏细胞株保藏号，由深圳市检验检疫科学研究院动植检研究所构建鉴定和供应。单克隆抗体的制备和纯化，制备个的细胞悬液。取周龄雌鼠，腹腔注射液体石蜡，每只，周后向腹腔注射细胞悬液。后小鼠腹部明显胀大，收集腹水。离心，水溶解后置于冰箱备用。稀释液明胶或鸡血清洗涤液明胶或洗涤液鸡血清溶解或混均后置于冰箱备用。底物液柠檬酸缓冲液乙酸钠液乙酸钠水溶解后置于冰箱备用。柠檬酸液柠檬酸水溶解后置于冰箱备用。配制取液约至液中调值至，置于冰箱备用。溶液甲醇加温溶解后于暗盒中存室温。工作底物液配制临用前配制。柠檬言范围规范性引用文件原理缩略语试剂和材料主要器械和设备非洲猪瘟病毒抗原的制备标记的单克隆抗体的制备阻断试验结果判定附录错误！未定义书签。附录错误！未定义书签......”。

3、“.....本标准的附录为规范性附录，附录为资料性附录。本标准由深圳市检验检疫科学研究院提出。本标准起草单位深圳市检验检疫科学研究院深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心。本标准主要起草人曹琛福花群义吕建强杨俊兴宗卉林庆奕优黄超华。加底物液每孔加底物液，作用。加终止液取出反应板，每孔快速加入终止液，在内测其吸光值值。结果读取用酶标仪在波长下，测定其值。结果判定样品血清平均值阴性血清对照平均值当标准阳性血清值，而标准阴性血清值，试验成立。则待检样品可按下表判定，可疑样品需重复实验，结果仍为可疑则判为阳性。阻断百分率结果阳性﹤﹤可疑阴性附录规范性附录溶液配方培养基胰蛋记抗体稀释，值读数应大于。非洲猪瘟病毒抗体检测阻断酶联免疫吸附法......”。

4、“.....则再加入琼脂。反应母液缓冲液混合液酶上下游引物各模板灭菌蒸馏水共磷酸盐缓冲溶液，磷酸氢钠磷酸氢钠氯化钾调至加蒸馏水至高压灭菌，保存备用。包被液碳酸盐缓冲液或水溶解后置于冰箱，周内使用。洗涤液标记的单克隆抗体的制备杂交瘤细胞分泌抗非洲猪瘟病毒蛋白的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，由中国典型培养物保藏中心武汉保藏细胞株保藏号，由深圳市检验检疫科学研究院动植检研究所构建鉴定和供应。单克隆抗体的制备和纯化，制备个的细胞悬液。取周龄雌鼠，腹腔注射液体石蜡，每只，周后向腹腔注射细胞悬液。后小鼠腹部明显胀大，收集腹水。离心，取上清液，即为含抗非洲猪瘟病毒蛋白单克隆抗体的腹水去液体，每孔加洗液，洗板，共次。最后次倒置拍干。非洲猪瘟病毒抗体检测阻断酶联免疫吸附法。蛋白抗原的纯化将菌液在离心，去上清，收集菌体。用重悬沉淀，离心，去上清。用细菌细胞蛋白裂解液重悬菌体......”。

5、“.....离心，收集上清液。采用柱亲和层析方法纯化超声破碎上清液，获得表达抗原，测定蛋白质浓度，加入抗原保护剂，分装每瓶，真空冻干保存。，包被板进行间接试验，标记抗体稀释，值读数应大于。蛋白抗原的纯化将菌液在离心，去上清，收集菌体。用重悬沉淀，离心，去上清。用细菌细胞蛋白裂解液重悬菌体，冰上超声破碎，离心，收集上清液。采用柱亲和层析方法纯化超声破碎上清液，获得表达抗原，测定蛋白质浓度，加入抗原保护剂，分装每瓶，真空冻干保存。蛋白抗原的检验及贮藏性状真空冻干保存的非酸缓冲液溶液终止液浓硫酸水封闭液明胶或灭能鸡血清。附录资料性附录非洲猪瘟病毒蛋白核苷酸参考序列胨酵母提取物氯化钠若配置固体培养基，则再加入琼脂。反应母液缓冲液混合液酶上下游引物各模板灭菌蒸馏水共磷酸盐缓冲溶液，磷酸氢钠磷酸氢钠氯化钾调至加蒸馏水至高压灭菌，保存备用。包被液碳酸盐缓冲液或水溶解后置于冰箱，周内使用......”。

6、“.....标记的单克隆抗体的制备杂交瘤细胞分泌抗非洲猪瘟病毒蛋白的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，由中国典型培养物保藏中心武汉保藏细胞株保藏号，由深圳市检验检疫科学研究院动植检研究所构建鉴定和供应。单克隆抗体的制备和纯化，制备个的细胞悬液。取周龄雌鼠，腹腔注射液体石蜡，每只，周后向腹腔注射细胞悬液。后小鼠腹部明显胀大，收集腹水。离心。深圳市标准化指导性技术文件非洲猪瘟病毒抗体检测阻断酶联免疫吸附法发布实施发布深圳市市场监督管理局目次非洲猪瘟病毒抗体检测阻断酶联免疫吸附法.蛋白抗原的检验及贮藏性状真空冻干保存的非洲猪瘟病毒重组蛋白呈白色固体，无臭无味。浓度测定复溶后蛋白质浓度应不低于。纯度测定采用对表达产物进行考马斯亮蓝染色，结果只在大小处出现条带。特异性检验将收取的蛋白抗原用电泳，经考马斯亮蓝染色，结果应在大小处出现诱导表达条带......”。

7、“.....应只在大小处出现特异性的杂交条带。贮藏与有效期置贮藏，有效期为个阮周曦张彩虹刘建利孙洁陶虹廖立珊唐金明陈书琨叶奕优黄超华。标记的单克隆抗体的制备杂交瘤细胞分泌抗非洲猪瘟病毒蛋白的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株，由中国典型培养物保藏中心武汉保藏细胞株保藏号，由深圳市检验检疫科学研究院动植检研究所构建鉴定和供应。单克隆抗体的制备和纯化，制备个的细胞悬液。取周龄雌鼠，腹腔注射液体石蜡，每只，周后向腹腔注射细胞悬液。后小鼠腹部明显胀大，收集腹水。离心透明液体。无菌检验按现行中国兽药典第部附录进行检验，应无菌生长。效价检验国际参考试剂盒试验检测值小于。贮藏与有效期贮藏，有效期为个月。待检血清样品的准备采集血液，室温放置，以离心，分离得到血清。血液采集血清样品保存等操作可按出入境动物检疫实验样品采集运输和保存规范进行。阻断试验操作包被将中所制备的抗原用包被液稀释至，加入到板中，每孔......”。

8、“.....洗板取出酶标板猪瘟病毒重组蛋白呈白色固体，无臭无味。浓度测定复溶后蛋白质浓度应不低于。纯度测定采用对表达产物进行考马斯亮蓝染色，结果只在大小处出现条带。特异性检验将收取的蛋白抗原用电泳，经考马斯亮蓝染色，结果应在大小处出现诱导表达条带。采用非洲猪瘟标准阳性血清对表达产物进行免疫印迹分析，应只在大小处出现特异性的杂交条带。贮藏与有效期置贮藏，有效期为个月。非洲猪瘟阴性血清的检验及贮藏性状橙黄或淡黄色胨酵母提取物氯化钠若配置固体培养基，则再加入琼脂。反应母液缓冲液混合液酶上下游引物各模板灭菌蒸馏水共磷酸盐缓冲溶液，磷酸氢钠磷酸氢钠氯化钾调至加蒸馏水至高压灭菌，保存备用。包被液碳酸盐缓冲液或水溶解后置于冰箱，周内使用。洗涤液，取上清液，即为含抗非洲猪瘟病毒蛋白单克隆抗体的腹水。利用柱进行纯化，纯化后用紫外分光光度计测定蛋白浓度，用将其稀释成，加入硫柳汞......”。

9、“.....分装冷冻保存。标记抗体的检验及贮藏性状冷冻保存的标记抗体呈无色透明液体，无臭无味。浓度测定蛋白含量应不低于。效价测定用中制备的蛋白抗原言范围规范性引用文件原理缩略语试剂和材料主要器械和设备非洲猪瘟病毒抗原的制备标记的单克隆抗体的制备阻断试验结果判定附录错误！未定义书签。附录错误！未定义书签。前言本标准按照给出的规则起草。本标准的附录为规范性附录，附录为资料性附录。本标准由深圳市检验检疫科学研究院提出。本标准起草单位深圳市检验检疫科学研究院深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心。本标准主要起草人曹琛福花群义吕建强杨俊兴宗卉林庆水。利用柱进行纯化，纯化后用紫外分光光度计测定蛋白浓度，用将其稀释成，加入硫柳汞。单克隆抗体的标记与检验单克隆抗体的标记采用商业辣根过氧化物酶标记试剂盒对单克隆抗体进行酶标记，分装冷冻保存......”。