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《饲料及饲料原料中黄曲霉毒素B1的快速筛查 胶体金免疫层析法》编制说明 《饲料及饲料原料中黄曲霉毒素B1的快速筛查 胶体金免疫层析法》编制说明

格式:word 上传:2022-06-26 19:40:59

《《饲料及饲料原料中黄曲霉毒素B1的快速筛查 胶体金免疫层析法》编制说明》修改意见稿

1、“.....易溶于甲醇乙醇氯仿甲基甲酰胺等有机溶剂。在中性溶液中较稳定,在强酸性溶液中稍有分解,易被碱或强氧化剂破坏,在值的强碱溶液中会迅速分解成无毒的盐。纯品为无色结晶,耐高温,分解温度为,紫外线对低浓度黄曲霉毒素有很强稳定作用。现已分离出等种之多,其中以的毒性和致癌性最强。黄曲霉毒素的产毒菌广泛存在于花生玉米麦类稻谷等粮食作物的籽粒及核桃杏仁等干果禽蛋肉甘薯大豆粕奶及奶制品中。对动物有剧烈急性毒性和明显慢性毒性,具有很强致突变致畸和致癌作用。是迄今为止人类所知的毒性和致癌性最强的物质之,其急性毒性约为氧化砷的倍氰化钾的倍。其损害肝脏,容易引发肝炎肝硬化肝坏死等病症。亚洲和非洲的疾病研饲养家禽猪牛羊的花生谷物等制品中黄曲霉毒素总量不得超过,饲养幼年产奶动物的饲料中黄曲霉毒素的总量不超过两年后,美国联邦政府再次规范了黄曲霉毒素食品相关的安全法律......”

2、“.....它规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒素总含量必须低于,人类消费的牛奶中含量要低于,其他动物饲料中黄曲霉毒素的含量要低于。最为严格的规定为欧盟国家,国家要求人类生活的食品消费品中的含量均不能超过。我国目前对的限量为特殊性膳食食品中为,其他食品和饲料中的限量依据不同来源而有所不同,饲料详细标准见表。表我国饲料中的限量标准产品名称限量玉米花生饼粕棉籽饼粕菜籽饼粕豆粕仔猪配合饲料及浓缩饲料生长肥育猪种猪配合饲料及浓缩饲料肉用仔鸡前期雏鸡配合饲料及浓缩饲料肉用仔鸡后期生长鸡产蛋鸡配合饲料及浓缩饲料肉用仔鸭前期雏鸭配合饲料及浓缩饲料肉用仔鸭后期生长鸭产蛋鸭配合剂量的黄曲霉毒素能够大大增加患肝癌的几率。此外,黄曲霉毒素与其他致病因素如肝炎病毒等对人类疾病的诱发具有叠加效应,其细胞毒作用可干扰信息和的合成,进而干扰细胞蛋白质的合成,导致动物全身性损害。背景据联合国粮农组织统计......”

3、“.....随着饲料工业的快速发展,近年来,中国的饲料也受到霉菌污染的严重挑战。自年以来,玉米等饲料原料价格普遍上涨,致使很多饲料企业及养殖户使用低质饲料原料,加上近年来气候的变化,华北东北地区降雨量增加,进步加重了饲料原料中真菌毒素的污染。而由于饲料原料和配合饲料中多种真菌毒素同时存在,在食用油等产品及牛奶中真菌毒素污染也比较严重。在世界许多地方,目前真菌毒素已构成重要的食品安全问题。真菌毒素对人类和动物健康可产生严重的影响,这认识导致了许多国家在近几十年来制定了诸多有关食品和饲料中真菌毒素的法规,以保护人类的健康,并保障生产者和贸易商的经济利益。随着全球经济体化的进程,类似真菌毒素等细胞培养板,每孔,置培养箱中。上清检测待细胞长至孔底的时,采用间接竞争法测定细胞上清液,筛选阳性孔。将阳性细胞在检测后天内采用有限稀释法进行亚克隆。天后,再取细胞上清检测......”

4、“.....将此细胞株进行扩大培养和传代。老鼠致敏液体石蜡致敏小鼠,周,注射体积只。天后可制备腹水。注射细胞收集杂交瘤细胞并用洗细胞两遍,取到万细胞注射于老鼠腹腔,周后可见老鼠状态不活跃并且老鼠的腹腔肿大。腹水采集注射细胞周后对腹腔肿大的老鼠用无菌注射器于老鼠腹腔采集腹水,每隔到两天采集次,这样多次反复采集直到老鼠自然死亡。单抗纯化采集到的腹水,用辛酸饱和硫酸铵法进行纯化,纯化后的腹水放入环境保存,腹水在使用前经过环境下透析,中间每隔换液次。饲料及饲料原料中黄曲霉毒素的快速筛查胶体金免疫层析法江西省地方标准编制说明标准制定意义介绍黄曲霉毒素属于呋喃氧杂萘邻酮的衍生物,其分子结构中含有个呋喃环和个氧杂萘邻酮香豆素环。饲料及饲料原料中黄曲霉毒素的快速筛查 胶体金免疫层析法编制说明素膜为载体,利用了微孔膜的毛细管作用,滴加在膜条端的液体慢慢向另端渗移。在移动的过程中......”

5、“.....并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的黄曲霉毒素在流动的过程中与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上黄曲霉毒素偶联物的结合,使检测线不显颜色,结果为阳牲反之,检测线显红色,结果为阴性。胶体金免疫方法主要材料的制备半抗原的合成及鉴定为小分子物质,不具备免疫原性,只有反应原性,因此需要与大分子共价结合后才能使动物免疫系统识别,产生相应的抗体,本实验首先需要合成小分子半抗原与蛋白质偶联的人工抗原。小分子半抗原的制备既要保留其基本结构特征,同时又要很好地与大分子蛋白结合。本项目通过小分子结构改造获得具有氨基官能团的半抗原,与牛血清白蛋白偶联合成免疫原,与卵清蛋白偶联合成包被原。向洁净的酶标板孔中加入的金标抗体,再将阴性豆粕样品加入其中,与孔内金标抗体混合均匀,分别取昂贵的缺点,黄曲霉毒素快速检测技术的研究及制订相应的检测方法标准是非常必要的。实现以人为本......”

6、“.....可通过污染谷物和那些来源于被黄曲霉毒素污染了的饲料喂饲的动物性食物如牛奶肉和蛋而进入食物链,危害人类健康。其具有致突变致癌性,还具有免疫毒性,其作用的靶器官主要为肝脏,可引起人类和动物的肝脏病变和致癌。表动物免疫过程免疫过程免疫原免疫剂量只间隔时间首免半抗原免半抗原天免半抗原天加强免融合前天半抗原天单克隆抗体的制备饲养细胞制备断颈处死周龄小鼠,浸泡在酒精中,随即放入超净工作台内,腹部朝上放于平皿内或固定于解剖板上。用眼科镊子夹起小鼠腹部皮肤,用剪刀剪小口,注意切勿剪破腹膜,以免腹腔液外流和污染。然后用剪刀向上下两侧做钝性分离,充分暴露腹膜。用酒精棉球擦拭腹膜消毒。用注射器吸取基础培养液,注入小鼠腹腔,轻。不同样品用同种方法进行试验和验证,确保本检测方法能够灵敏特异准确地检测出饲料原料中的含量。如方法的灵敏度......”

7、“.....确定检测限方法的准确率,通过对经验证的阴阳性样品进行检测,得到本检测方法的假阴性率和假阳性率,盲样测定与仪器方法的结果进行比对,确保本方法的检测结果可靠方法的特异性,运用本方法对饲料原料中常见的其他真菌毒素进行检测,确保本方法能特异性地检测饲料原料中残留。在技术指标完成试验工作之后,严格按照标准的格式,起草编写标准文本内容和编制说明内容。标准制定依据本标准是根据标准化工作导则第部分标准的结构和编写标准编写规则第部分试验方法标准的要求而进行编写的。有关技术内容是在参考国外有关标准及文献的基础上经研究改进和验证后制定的。标准技术内容和技术指标的论证技术原理本方法应用了竞争抑制免疫层析原理。将氯金酸用还原法制成定直径的金溶胶颗粒,标记抗体......”

8、“.....是将色谱技术作为基础的物理化学检测方法,包括高效液相色谱法和气相色谱法等,而薄层层析法由于操作过程太复杂,国际上近些年使用这种方法检测真菌毒素的情况越来越少是免疫化学检测法,主要指免疫亲和柱法以及酶联免疫吸附法等。可同时检测多种真菌毒素且检测限较低,但仍存在标准曲线线性关系不理想测定时需要进行衍生化上次进样待测物品滞留重复进样变异系数大使得重现性较差等系列问题。法虽可精确进行定性定量测定,但是样品前处理较为繁琐仪器昂贵而成本高,同时需要专门的技术操作人员,因而般用于大型企业科研院校和专业检测机构的定量分析。可产生严重的影响,这认识导致了许多国家在近几十年来制定了诸多有关食品和饲料中真菌毒素的法规,以保护人类的健康,并保障生产者和贸易商的经济利益......”

9、“.....类似真菌毒素等涉及安全卫生项目的限量标准,越来越多地被利用为贸易保护主义中非关税壁垒的重要手段。因此,为了保证食品安全,保障消费者的健康,为了打破国外的技术壁垒,同时在合理有利的前提下,更多地树立我国的技术性壁垒,开展饲料中真菌毒素的检测并建立标准方法是有效的方法之。目前国内应用标准检测方法大多为仪器方法,所需仪器设备昂贵,不利于进行广泛推广,并且限制了很多检测单位高效广泛地开展检测工作。建立符合中国国情的快速检测方法标准,具有检测快速简便灵敏成本低等优点,为打开市场并占领市场提供了先决条件。限量标准检测方法及研究现状限量标准国际上,在年率先规定了世界贸易流通食品中的最高允许量,其中明确规定国际贸易的谷类作物中的含量必须在以下,超过此标准含量的产品将不能投放于检测黄曲霉毒素,样品前处理步骤简单且可实现定量化,但这种生物学方法,受环境因素影响大,所用抗体和酶特别容易发生变质......”

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