入质粒上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞上表达将含有目基因表达载体提纯取卵受精卵显微注射受精卵发育获得具有新性状动物处理细胞感受态细胞重组表达载体分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收分子目基因检测与鉴定类型检测内容方法结果显示分子检测导入检测目基因是否进入受体细胞分子杂交和之间杂交带转录检测目基因是否转录出分子杂交和之间杂交带翻译检测目基因是否翻译成蛋白质抗原抗体杂交杂交带个体水平检测包括做抗虫抗病接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度对基因工程产品与天然产品功能进行活性比较，以确定功能活性是否相同等易混易错基因工程操作个易错点目基因插入位点不是随意基因表达需要启动子与终止子调控，所以目基因应插入到启动子与终止子之间部位。基因工程操作过程中只有第三步将目基因导入受体细胞没有碱基互补配对现象第步存在逆转录法获得，第二步存在黏性末端连接现象，第四步检测存在分子水平杂交方法。原核生物作为受体细胞优点繁殖快多为单细胞遗传物质相对较少。般情况下，用同种限制酶切割质粒和含有目基因片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目基因，这样可避免质粒和质粒之间目基因和目基因之间连接。目基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达过程，称为转化。转化实质是目基因整合到受体细胞染色体基因组中。不熟悉标记基因种类和作用标记基因作用筛选检测目基因是否导入受体细胞，常见有抗生素抗性基因发光基因表达产物为带颜色物质等。对受体细胞模糊不清受体细胞常用植物受精卵或体细胞经组织培养动物受精卵般不用体细胞微生物大肠杆菌酵母菌等。要合成糖蛋白有生物活性胰岛素则必须用真核生物酵母菌需内质网高尔基体加工分泌般不用支原体，原因是它营寄生生活定不能用哺乳动物成熟红细胞，原因是它无细胞核，不能合成蛋白质。还应注意问题有基因表达载体中，启动子片段起始密码子终止子片段终止密码子。基因表达载体构建是最核心最关键步，在体外进行。命题预测基因工程基本操作程序是近几年高考高频考点，分值比重较大，与其他工程结合考查情况较常见，考查形式既有非选择题又有选择题。考向预测基因工程基本操作技术广东卷利用基因工程技术生产羧酸酯酶制剂流程如图所示，下列叙述正确是多选过程需使用逆转录酶过程需使用解旋酶和获取目基因过程使用感受态细胞可用溶液制备过程可利用分子杂交鉴定目基因是否已导入受体细胞解析过程是以为模板合成过程，即逆转录过程，需要逆转录酶催化，故正确过程表示利用扩增目基因，在过程中，不需要解旋酶，是通过控制温度来达到解旋目，故错利用氯化钙处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，故错检测目基因是否成功导入受体细胞染色体中，可以采用分子杂交技术，故正确。答案考向预测二基因工程与其他工程联系山东卷人组织纤溶酶原激活物是种重要药用蛋白，可在转基因母羊羊乳中获得。流程如下基因与载体用切割后，通过连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目基因是否已插入受体细胞，可采用技术。为获取更多卵母细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其。采集精子需要经过，才具备受精能力。将重组表达载体导入受精卵常用方法是。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目基因胚胎进行。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞。若在转基因母羊羊乳中检测到，说明目基因成功表达。解析用同种限制酶切割质粒和含有基因片段可产生相同黏性末端，便于构建基因表达载体通常采用分子杂交技术来检测目基因是否已插入受体细胞。为获得更多卵母细胞，通常对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵采集精子需要经过获能处理才具备受精能力。通常用显微注射法将重组表达载体导入动物受精卵为了获得母羊，移植前需要对已成功转入目基因胚胎进行性别鉴定早期胚胎细胞具有全能性，可利用胚胎分割和胚胎移植技术获得多个转基因个体。基因表达产物为人组织纤溶酶原激活物，若在转基因母羊羊乳中检测到人组织纤溶酶原激活物，说明目基因成功表达。答案同种限制性核酸内切酶或同种限制酶分子杂交或核酸探针超数排卵获能处理显微注射法性别鉴定全能性或人组织纤溶酶原激活物考点三基因工程应用和蛋白质工程乳腺生物反应器与工程菌生产药物比较核心突破比较项目乳腺生物反应器工程菌基因结构动物基因结构与人类基因结构基本相同细菌或酵母菌等生物基因结构与人类基因结构有较大差异基因表达合成药物蛋白与天然蛋白质相同细菌细胞内没有内质网高尔基体等，产生药物蛋白可能没有活性受体细胞哺乳动物受精卵微生物细胞生产条件不需严格灭菌，温度等条件对其影响不大需严格灭菌，需严格控制工程菌所需外界条件药物提取从动物乳汁中提取从微生物细胞中提取基因治疗与基因诊断原理操作过程进展基因治疗基因表达把正常基因导入有基因缺陷细胞中，以表达出正常性状来治疗临床实验基因诊断碱基互补配对制作特定探针与病人样品混合，分析杂交带情况临床应用基因工程与蛋白质工程比较项目区别与联系蛋白质工程基因工程区别过程预期蛋白质功能设计预期蛋白质结构推测应有氨基酸序列找到相对应脱氧核苷酸序列获取目基因构建基因表达载体将目基因导入受体细胞目基因检测与鉴定实质定向改造或生产人类所需蛋白质定向改造生物遗传特性，以获得人类所需生物类型或生物产品结果可生产自然界没有蛋白质只能生产自然界已有蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程基础上，延伸出来第二代基因工程基因工程中所利用些酶需要通过蛋白质工程进行修饰改造易考明示有关基因工程应用易错点动物基因工程主要是为了改善畜产品品质，而不是为了产生体型巨大个体白质进行，或制造种新蛋白质，以满足人类生产和生活需要。蛋白质工程实施难度很大，原因是蛋白质具有十分复杂结构。解析基因工程遵循中心法则，从基因表达转录和翻译形成氨基酸序列多肽链形成具有高级结构蛋白质行使生物功能，基本上是生产出自然界已有蛋白质。蛋白质工程是按照以下思路进行预期蛋白质功能设计预期蛋白质三维结构推测应有氨基酸序列找到相对应脱氧核苷酸序列，蛋白质工程可以创造出自然界不存在蛋白质。答案预期蛋白质功能蛋白质三维结构应有氨基酸序列相应脱氧核苷酸序列基因自然界已存在人类生产和生活基因修饰基因合成改造空间或高级真题集训限时检测高考体验天津卷为达到相应目，必须通过分子检测是携带链霉素抗性基因受体菌筛选产生抗人白细胞介素抗体杂交瘤细胞筛选转基因抗虫棉植株抗虫效果鉴定三体综合征诊断解析可通过将受体菌接种在含链霉素培养基中筛选携带链霉素抗性基因受体菌，错误抗人白细胞介素杂交瘤细胞应通过抗原抗体杂交技术筛选产生，正确在棉花田中人工放入害虫可检验转基因抗虫棉抗虫效果，错误可利用显微镜检测三体综合征，错误。答案浙江卷天然玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成基因，而开蓝色花矮牵牛中存在序列已知基因。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确是提取矮牵牛蓝色花，经逆转录获得互补，再扩增基因利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛基因文库中获取基因利用聚合酶将基因与质粒连接后导入玫瑰细胞将基因直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞解析获取目基因，可先提取矮牵牛蓝色花，经逆转录获得互补，再经技术扩增，正确基因文库构建时是将目基因与载体连接起来，形成重组载体，再导入受体菌中储存和扩增，提取目基因时不需使用限制酶，错误连接目基因与质粒酶是连接酶，错误将目基因导入植物细胞，常用农杆菌转化法，不使用大肠杆菌，错误。答案江苏单科小鼠杂交瘤细胞表达单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体可变区基因目基因后再重组表达。下列相关叙述正确是多选设计扩增目基因引物时不必考虑表达载体序列用方法扩增目基因时不必知道基因全部序列体系中定要添加从受体细胞中提取聚合酶定要根据目基因编码产物特性选择合适受体细胞解析设计引物时应当与表达载体两端序列进行互补配对，错误法扩增目基因只需要知道基因两端序列设计合适引物即可，而不必知道其全部序列，正确中应用耐高温聚合酶，错误根据目基因编码产物选择合适受体细胞，以有利于基因表达，正确，因此答案为。答案海南卷下面是将细菌基因导入大肠杆菌内，制备“工程菌”示意图。请据图回答获得有两条途径是以为模板，在酶催化下，合成互补单链，然后在作用下合成双链，从而获得所需基因二是根据目标蛋白质序列，推测出相应序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其序列，再通过化学方法合成所需基因。利用技术扩增时，需要在反应体系中添加有机物质有种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性聚合酶，扩增过程可以在扩增仪中完成。由和载体拼接形成通常称为。在基因工程中，常用处理，其目是。解析利用逆转录法合成目基因过程是以为模板，在逆转录酶催化作用下合成单链，然后在聚合酶作用下，合成双链分子根据蛋白质工程合成目基因过程是根据目标蛋白质氨基酸序列，推测相应序列，然后按照碱基互补配对原则，推测中脱氧核苷酸排列顺序，通过化学方法合成。过程中需要酶底物模板引物和能量等条件。目基因和运载体结合，形成基因表达载体。有利用大肠杆菌做受体细胞时，需要先用处理，使之成为感受态细胞，有利于吸收重组分子答案逆转录酶聚合酶氨基酸脱氧核苷酸引物目基因或基因模板基因表达载体使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组分子新课标Ⅱ植物甲具有极强耐旱性，其耐旱性与个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低植物乙中，有可能提高后者耐旱性。回答下列问题理论上，基因组文库含有生物基因而文库中含有生物基因。若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物基因组文库，再从中出所需耐旱基因。将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物体细胞中，经过系列过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株是否得到提高。假如用得到二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株数量比为∶时，则可推测该耐旱基因整合到了填“同源染色体条上”或“同源染色体两条上”。解析基因文库包括基因组文库和文库，基因组文库包含生物基因组所全部基因，文库是以反转录后构建，只含有已经表达基因并不是所有基因都会表达，即部分基因。从基因文库中获取目基因需要进行筛选。要提高植物乙耐旱性，需要利用农杆菌转化法将耐旱基因导入植物乙体细胞中。要检测目基因耐旱基因是否表达应该用抗原抗体杂交检测目基因耐旱基因表达产物即耐旱相关蛋白质个体水平检测可以通过田间实验，观察检测其耐旱性情况。如果耐旱基因整合到同源染色体两条上，则子代将全部表现耐旱，不会出现性状分离。或”如果耐旱基因整合到同源染色体条上，则转基因植株基因型可以用表示表示耐旱基因，表示另条染色体上没有相应基因，自交后代基因型为∶∶∶∶，所以耐旱∶不耐旱∶，与题意相符。答案全部部分筛选乙表达产物耐旱性同源染色体条上选修三现代生物科技专题专题基因工程与蛋白质工程考纲引领基因工程诞生Ⅰ。基因工程原理及技术Ⅱ。基因工程应用Ⅱ。蛋白质工程Ⅰ。基因工程