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(外文翻译)聚丙烯酰胺凝胶上DNA银染法(译文) (外文翻译)聚丙烯酰胺凝胶上DNA银染法(译文)

格式:word 上传:2022-06-25 05:45:52

《(外文翻译)聚丙烯酰胺凝胶上DNA银染法(译文)》修改意见稿

1、“.....关键在准备之前,须估量容器是否足够盛放要染色凝胶数量和大小。仪器配置摇床摇床是最常用最专业化仪器。简单温和地摇动可使实验达到最优效果。这里并不推荐圆周运动,因为它不能将试剂均匀平整地分布到胶体表面。圆周运动会使试剂在凝胶周围旋转,导致中心区域相对停滞。步骤固定选取个干净,四周总面积比凝胶大塑料染色盒。向染色盒中倒入足量纯净固定液,至大约覆盖凝胶,并高出凝胶高度。小心地拆卸装置,把凝胶放入染色盒内。如果是聚酯底凝胶,凝胶面朝上。在摇床上不断地摇动染色盒。对于典型迷你胶来说,至少需要分钟固定时间,但固定分钟可获得较好对比度。如果使用更厚凝胶,则可能需要更长固定时间。这步骤可能需要分钟。关键步骤固定对于染色灵敏度来说至关重要。它主要功能是把分子固定在丙烯酰胺凝胶板上,避免弥散和后续图像处理时影像位移。它也能清除和中和化学杂质,如能干扰染色尿素和缓冲液。当凝胶在染色时......”

2、“.....然后,组装装置为下次制胶做准备。用乙醇清洗组装好装置来提高干燥度,再把装置放在无尘环境中以备后用。溶液配制当凝胶在固定时,准备充足显影液,至倒入染色盒时能覆盖并高出凝胶高度量。关键步骤本方法中为下步准备该溶液和其他溶液应在此时配制,这样不仅能确保溶液新鲜度,还能统筹俭省时间。硫代硫酸钠溶液和显影终止剂可之前配制,且可在此时使用在显影液中以比例添加硫代硫酸钠溶液。在冰箱中冷藏显影剂。配制足够甲醛溶液,至倒入染色盒时能覆盖并高出凝胶高度量。配制足够银溶液,至倒入染色盒时能覆盖并高出凝凝胶会变得卷曲,易碎。因此,我们建议将凝胶保存在带有拉链塑料袋里。问题与讨论时间步骤,固定核酸,配制溶液分钟同时操作步骤,清洗凝胶分钟步骤和,甲醛前处理分钟步骤,银溶液浸渍分钟步骤,图像形成,分钟步骤......”

3、“.....使甲醛液活性降低适当储存,现配溶液人为污染粘印在凝胶上指印,灰尘和其他生物材料或操作不当戴手套,防其他物体触碰凝胶表面,直到图像形成人为阴影去污剂残留在电泳玻璃板上用去离子水清洗电泳玻璃板,如必要,可用乙醇或盐酸清洗人为表面污染玻璃板上有污染物用电泳玻璃板同面进行实验,用标记该面胶内污点污点横穿胶体可能会阻止条带延伸。通常因为电泳缓冲溶液或溶液中有污染物使用洁净缓冲液或使用其他缓冲液胶内污点聚丙烯酰胺质量不高检查丙烯酰胺和是否现配表测试不同操作方法。检查不同操作方法中不同步骤。其他方法甲醛银浸渍单独进行甲醛前处理,分钟,分钟,分钟,分钟,分钟单独进行银浸渍显影液中加甲醛显影终止剂室温下图像形成和终止结果为了举例说明银染法些其他可能选择,将聚酯如描述中那样进行操作。凝胶上有条含有标记物泳道,条泳道中含有从实验得来扩增产物......”

4、“.....在同电泳仪中背对背同时电泳。将聚酯凝胶切成相同片状,然后各用不同方法进行处理。当图像达到最佳对比度时用眼观察,终止显影反应。所用种方法如表中所列,所得结果如数据所示。根据实验所用方法来分析新数据,要求核酸分离和显像。例如,就映像来说,是根据具有不同流动性或呈现性无毒条带来评价多态标记物,这些标记物可用来建立分离分子标记物和表型之间遗传连接。通过银染条带分离,再放大,克隆和后续处理,实现了主导标记方法向以为基础共同主导标记方法转变。银染法也可运用到标记法。或者使用大量分子标记指纹图谱可运用到些需要鉴定种属小生物样品鉴定是植物,动物,细菌还是真菌。可直接观看或处理后观看图像,然后依次进行定量关系测定。从干燥银染凝胶中重新分离,使得法医和证据档案建立成为可能。作为电子档案或打印图像与次级图像进行对比......”

5、“.....在表中进行描述。种不同任意样品被装载进入横穿块凝胶通道,同时在中电泳移动。为了使不同银染法能够直接进行比较成为现实,在染色和电泳之后将凝胶切成相同部分。在同时间段内,用相同设置索尼数码相机对图像进行拍照。用截取图像,调节色彩平衡和亮度,尽量与实物相近。保存颜色信息显示染色所产生不同色彩。不能进行其他图像处理。不能进行污染和损伤有价值地运用该方法主要在于核实小分子核酸个核苷酸。例如,我们已经按该方法用浓度凝胶检测了商业供应引物。随着对其他小分子核酸关注,如微小抑制剂和微型,相信在未来时间里该方法将会被运用更加广泛。本文所更新和优化银染法与之前文章所述方法相比具有明显优势。参考文献略原文中文字出处,译文聚丙烯酰胺凝胶上银染法本文描述了种简单但更优越的银染法,应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳之后的片段以及其他有机分子显像......”

6、“.....能准确检测单位量范围内的。 要,包括纯净水。材料试剂冰醋酸,关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。硝酸银晶体,关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。甲醛溶液,关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。硫代硫酸钠关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。碳酸钠粉末试剂关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。乙醇聚丙烯酰胺凝胶定影液显影液显影终止剂设备带龙头塑料盛酸容器普通实验室供给普通实验室手套,关键无粉手套摇床或轨迹震荡仪普通实验室供给盛放银溶液容器向沉淀银中加入普通实验室供给垃圾清理工具,普通实验室供给可选为了把最初凝胶完好地保存,我们用聚酯聚丙烯酰胺凝胶进行,描述种最新方法。循环水泵第二代微型蛋白初产物仪索尼数码相机试剂制备定影液用去离子水将冰醋酸稀释至,室温保中文字出处,译文聚丙烯酰胺凝胶上银染法本文描述了种简单但更优越银染法......”

7、“.....其灵敏度与同位素放射方法相当,能准确检测单位量范围内。该方法具有快速优点,而且运用时主要是使用容易获得化学物质和材料。为了达到预期灵敏度和清晰度,高质量试剂和洁净操作显得尤为重要。虽然本文所描述最新方法是基于方法广泛使用,但是可提供更高对比度图像,且可降低人为污染染色风险。介绍用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离复杂样品和其他生物分子具有较高分辨率,且该方法已被运用非常广泛。然而,为了实现潜在优点,我们还需要有种能够提供更高清晰度和灵敏度染色方法。基于这点,本文描述银染法符合这个要求。作为种染色方法,最初发展银染法目是为了检测分离后蛋白质。之后,该方法被进步优化,并应用于其他生物分子检测,如核酸,脂多糖类,糖蛋白类和多糖类。但是这些早期方法操作相对繁琐,且灵敏度有限。对于指纹谱图放大技术发展要求种更好方法来充分地辨析和显像复杂图谱......”

8、“.....单独地描述了为而发展银染法,该方法已经被广泛地接受,包括在商业领域如系统,美国公司银后续产品。其他生物样品银染法有如下优点第,在正常环境光度下可进行图像形成和显像。因此,该过程可以在实验室工作台上进行操作,不用暗室或紫外照明设备。第二,由凝胶板上银离子和生物分子直接结合所致高灵敏度和高清晰度可使图像进行更容易辨析。因此图形显像主要是从该基色原而来,不会褪色和移位,这就能够用其他方法对凝胶进行二次处理,如荧光染色,放射自显影,激光,做成胶片或进行数码图像处理。第三,银染法灵敏度与放射自显影法相当,但可以避免辐射操作,减少图像成形时间和实验步骤。第四,作为种更好选择,凝胶可放在半硬塑料薄膜衬垫上进行干燥,如薄膜,这样可对最初材料进行永久记录是种修改后方法。空气干燥凝胶具有弹性,能保存高染色度和高对比度图像。这样凝胶可长期保存不变形......”

9、“.....此外,保存凝胶就如分子档案,因为染色条带是可以被提取出来,放大,克隆以及能进行后续操作真正。虽然本文所描述方法是关于显像,但是该方法也可以不做修改地用于其它生物分子显像,如,多糖类,脂多糖类,蛋白质和多肽类。就其所试用范围来说该方法具有范围广优点,因此该方法在应用时须给予足够重视。凝胶板上杂散污染指纹就如其它生物杂质掺合进入凝胶板样。因此,使用高质量高纯度试剂显得尤为重要,包括纯净水。材料试剂冰醋酸,关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。硝酸银晶体,关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。甲醛溶液,关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。硫代硫酸钠关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。碳酸钠粉末试剂关键要获得高质量结果,须用高纯度试剂。乙醇聚丙烯酰胺凝胶定影液显影液显影终止剂设备带龙头塑料盛酸容器普通实验室供给普通实验室手套......”

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