1、“..... ④温育条件的优化在之间优化等温扩增温度。 扩增产物的检测建立快速显色法和电物的最 佳浓度比模板浓度浓度聚合酶用量浓度等条 件进行优化。两个外引物两个内引物和两个环引物，其 中每个内引物均具有两段能够识别靶分子上特定位点的序列，以保证 靶序列的特异性扩增。常见病原菌基因组的提取。采用本实验室建立的基因组 快速提取技术提取致病菌。 扩增反应体系的优化对引物浓度内引物和外引物的最 佳浓度比模板浓度浓度聚合酶用量浓度等条 件进行优化。根据本项目所建立的最佳反应体系和反应产物显示方 法，研制开发快速检测病原菌的试剂盒包括单病原菌检测试剂盒 和多种病原菌同时检测试剂盒......”。

2、“..... 本项目建立的方法对病原菌目的基因 样品检测的准确率。 病原菌的环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测试剂盒的 研制 快速提取技术提取致病菌。 扩增反应体系的优化对引物浓度内引物和外引常见病原菌基因组的提取。两个外引物两个内引物和两个环引物，其 中每个内引物均具有两段能够识别靶分子上特定位点的序列，以保证 靶序列的特异性扩增。根据数据库公布 二项目技术方案 技术方案 环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测常见病原 菌方法的建立 常见病原菌特异性引物的设计......”。

3、“.....部分内容简介环介导等温扩增快速检测病原菌技术及 其配套试剂盒达到国际先进水平。 二项目技术方案 技术方案 环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测常见病原 菌方法的建立 常见病原菌特异性引物的设计。根据数据库公布 的常见病原菌序列，采用专用引物设计软件设计特异性 引物包括每类致病菌的两个外引物两个内引物和两个环引物，其 中每个内引物均具有两段能够识别靶分子上特定位点的序列，以保证 靶序列的特异性扩增。常见病原菌基因组的提取。采用本实验室建立的基因组 快速提取技术提取致病菌。 扩增反应体系的优化对引物浓度内引物和外引物的最 佳浓度比模板浓度浓度聚合酶用量浓度等条 件进行优化。 ④温育条件的优化在之间优化等温扩增温度。 扩增产物的检测建立快速显色法和电泳分析法两种检测扩增 产物的方法。 以上述研究结果为基础......”。

4、“..... 常见病原菌的环介导等温扩增快速检测方法的灵敏度分析 将常见病原菌目标基因克隆至载体，转化后提取质粒， 倍比稀释成含目的基因拷贝数为，以其为模板 做环介导等温扩增反应，检测本方法的灵敏度。 常见病原菌的环介导等温扩增快速检测方法的特异性分析 分别以病原菌和非病原菌基因组为模板做环介导等温扩增反 应，检测本方法的特异性。常见病原菌的环介导等温扩增快速检测方法与国际标准方法 及常规扩增方法比较分析 以的两个外引物做常规扩增，并与的扩增结果进 行比较分析，进步判断技术的灵敏度特异性和稳定性。 常见病原菌的环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测方法 在食品检测和临床诊断中的应用研究 将本方法应用于食品检测和临床诊断中，分析本方法对不同 样品检测的准确率......”。

5、“.....研制开发快速检测病原菌的试剂盒包括单病原菌检测试剂盒 和多种病原菌同时检测试剂盒。 工艺流程 三项目技术质量指标 引物优化组合 反应体系的建立 灵敏度试验特异性试验反应条件优化阴性对照阳性对照 试剂盒 中试 同类产品比较试验国标法比较试验 方法应用于病原体检测 样品收集 核酸提取引物设计 基因序列分析本项目建立的方法对病原菌检测的准确率达到。 本项目建立的方法对病原菌目的基因检测的灵敏度达到 拷贝。 本项目建立的方法不产生非特异性扩增产物。 对病原菌目的基因的等温扩增过程在分钟内完成，显 色法检测扩增产物在分钟内完成，电泳法检测扩增产物在分钟内 完成。 四项目执行过程中各阶段目标 年度 第季度设计引物，引物合成，购买实验菌株和有关试剂......”。

6、“..... 第二季度样品采集，病原菌提取。 第三季度等温扩增反应体系优化，温育条件优化。 第四季度扩增反应产物检测方法的建立快速显色法电泳分 析法。 年度 第季度环介导等温扩增快速检测病原菌方法操作程序确定，多重等温扩增同时检测多种病原菌实验技术建立。 第二季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 的准和多重等温扩增快速检测病原菌方法 的灵敏度分析。 第四季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 与常规扩增方法比较分析。 年度 第季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 在食品和临床标本上的应用及效果分析。 第二季度环介导等温扩增快速检测病原菌试剂盒和多重等温扩 增试剂盒研制。 第三季度试剂盒的应用及技术推广。 第四季度课题总结，鉴定。 五项目经费预算情况 本项目申请科研经费万元......”。

7、“..... 三项目实施支撑条件 项目技术来源 本项目的技术由项目申请人建立。 项目实验检测条件 项目申请人所在学院生命科学学院拥有食品科学国家重点建设 学科生物化学与分子生物学省级重点学科和食品科学教育部重点实 验室。这些重点学科和重点实验室设施完善先进，具有进行本项目 研究的实验条件和实验场地，为本项目的完成提供了保障。 项目申请人所在的江西省生物化学与分子生物学重点实验室实验 条件先进，具有型仪，全自动测序仪 型高速冷冻离心机超速冷冻离心机超低温冰箱超纯 水系统各种规格的电泳仪紫外分光光度计设施先进的细菌培养 室等仪器设备。现已完成了本项目所需的科研平台建设工作。 项目申请人长期从事分子生物学研究工作，熟练掌握了分子生物 学研究技术。课题组已开展了本项目的前期研究工作......”。

8、“.....基本掌握了等温扩增专用引物设计软件的使用和等温扩增的操作要点，这为本项目 的顺利完成奠定了技术基础。 项目申请单位人才资源情况 项目申请单位南昌大学是我省唯所省部共建的工程重 点建设大学，人才资源丰富，科研力量雄厚。生命科学学院有专任教 师人，其中正副教授人，讲师人，中高级技术人员比例。 项目组人员专业结构职称结构 项目组科研人员人，主要由生物化学与分子生物学专业微生 物学专业人员组成，专业结构合理。科研人员中，教授人副教授 人研究生人。其中具有博士学位的教师人。 项目新增投资筹集情况 本项目申请科研经费万元。 四项目预期经济效益 预期市场需求 病原菌的检测是食品检测和临床诊断中的常规项目，食品检测部 门和医疗机构对检测试剂的需求量巨大。等温扩增技术在病原菌的检 测工作中有很大潜力。然而，目前国外仅有将其用于病毒和检测的研究报道......”。

9、“..... 国内也未见这方面的研究开发报道。因此，开发病原菌的环介导的等 温扩增试剂具有广阔的前景。 预期盈利水平 目前以传统方法检测个样品中的种致病菌的收费约元。本 项目建立的检测技术检测个样品的试剂成本约元，如果以元销 售，可获利润元。个小型试剂生产企业年至少可生产检测 万个样品的试剂，每年获利万元。因此，该技术的推广可产生明 显的经济效益。 预期产业化前景 本项目是针对严重影响人类健康的病原菌的检测问题提出的，研 究成果的实用性强，易于转化。在产品的研制工作中采用了现代分子 生物学新技术，产品的科技含量高，生产成本低，利润空间大。本产 品的生产不需特殊大型设备，产品定型后可向中小型生化试剂生产企 业转让，因此，本项目的产业化前景广阔。我省具有定生产能力的 试剂生产企业经技术培训后可生产本产品......”。