1、“.....固定弃上清,每管加入多聚甲醛,室温下放置,然后用洗遍,离心。打孔弃上清,每管加入,室温放置,洗遍,离心。孵育抗兔抗人抗体用稀释倍,每管,放置使抗原抗体充分孵育。洗遍,离心。孵育二抗羊抗兔抗体用稀释倍,每管,避光放置使二抗与抗充分结合。洗遍,离心。上机检测将细胞浓度调整为个,用流式细胞仪进行检测。检测胞浆蛋白细胞收集将单核细胞以个的浓度接种于六孔板中,置于的细胞培养箱中过夜。收集细胞,用洗遍,离心。固定弃上清,每管加入多聚甲醛,室温下放置,然后用洗遍......”。
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4、“.....根据蛋白浓度计算上样体积和蛋白电泳标准品用微量加样枪或注射器迅速加入上样孔中,如果没有足够数目的样本,可以用代替样本与上样缓冲液混匀后加入剩余孔中。电泳。电压,时间左右,电泳至分离胶时改电压为,直至溴酚蓝到达电泳槽底部。切胶。取下凝胶板,将内槽玻璃板轻轻撬开,按照上相应的蛋白大小切下需要的凝胶部分,浸泡在转膜液中。转膜。剪取张与凝胶大小相似的纤维素膜膜,浸泡在转膜液中......”。
5、“.....夹子黑色面铺单层海绵,两张如凝胶大小也可如海绵大小的滤纸,凝胶,膜,两张如凝胶大小也可如海绵大小的滤纸,单层海绵。注意每层物品铺之前都先要用转膜液,铺完后再用转膜液充分浸透,不要留下气泡,否则会留下空斑。将转移装置放入电转移槽中,盖上盖子,注意凝胶面位于负极,膜位于正极即夹子的黑面与槽的黑面相对,电泳槽中加入升电转移液,另边放冰块降温,将电转移槽放入装有冰块的容器中利于散热。设置电压,电流,后开盖取出夹子。封闭。转膜时间结束后......”。
6、“.....作为标记,浸泡在中。用封闭液即脱脂牛奶室温摇床封闭。万方数据三峡大学硕士学位论文抗孵育。封闭液加抗,摇床震荡过夜。二抗孵育。次日用分别洗膜次,每次。羊抗兔用按照倍稀释,室温摇床孵育。再用分别洗膜次,每次。显影。取显色剂液各加入离心管中充分混匀。将膜的背面吸水纸轻轻的吸干,将膜平放在显影仪的托盘中,正面朝上,接触面上尽量不要有气泡。用加样枪加混合液于膜上,曝光显影,保存图像,记录结果。流式细胞术检测膜蛋白细胞收集将单核细胞以个浓度接种......”。
7、“.....收集细胞于离心管中洗遍,室温下离心。孵育抗山羊抗人抗体用稀释倍,每管,下放置使抗原抗体充分孵育。洗遍,离心。孵育二抗兔抗山羊抗体用稀释倍,每管,避光孵育。洗遍,离心。上机检测将细胞浓度调整为个,用流式细胞仪进行检测。检测胞浆蛋白细胞收集将单核细胞以个的浓度接种于六孔板中,置于的细胞培养箱中过夜。收集细胞,用洗遍,离心。固定弃上清,每管加入多聚甲醛,室温下放置,然后用洗遍,离心。打孔弃上清,每管加入,室温放置,洗遍,离心......”。
8、“.....每管,放置使抗原抗体充分孵育。洗遍,离心。孵育二抗羊抗兔抗体用稀释倍,每管,避光放置使二抗与抗充分结合。洗遍,离心。上机检测将细胞浓度调整为个,用流式细胞仪进行检测。检测胞浆蛋白细胞收集将单核细胞以个的浓度接种于六孔板中,置于的细胞培养箱中过夜。收集细胞,用洗遍,离心。固定弃上清,每管加入多聚甲醛,室温下放置,然后用洗遍,离心。万方数据三峡大学硕士学位论文打孔弃上清,每管加入,室温放置,洗遍,离心。孵育抗兔抗人抗体用稀释倍,每管......”。
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