1、“.....连接产物转化感受态，挑取单克隆，用载体上游引物与目基因下游引物进行鉴定，扩增后提取质粒质粒小抽试剂盒酶切鉴定，并测序证实重组质粒手足口病，是婴幼儿常见传染病，该病传染性强，死亡率高，易引起暴发或流行，近年来，该病感染和流行在亚太地区呈上升趋势，非常值得人们密切关注。目前尚无疫苗可供预防。肠道病毒，是引起手足口病主要病原体，该病毒属于小病毒科肠道病毒属，有四个衣壳蛋白和，其中包含个氨基酸，具有良好免疫原性。目前，国内对于疫苗研究刚刚起步......”。

2、“.....研究较多是灭活疫苗，已在小鼠模型中证实对病毒攻击具有定保护效果，据报道，有几个候选疫苗可能在今年进入临床试验。但是目前病毒在细胞中产量较低，难以达到商品化所需产量，且其安全性还有待长期考察。已发表数据显示，与灭活疫苗蛋白重组疫苗以及表达疫苗相比，病毒样颗粒诱导中和抗体水平和保护效果是最好。目前只有台湾个实验室报道用昆虫杆状病毒系统共表达和蛋白来生产病毒样颗粒，但表达量低，难以达到大规模疫苗接种所需剂量要求。综上所述，如何获得较高候选疫苗产量是疫苗研发上个需要解决问题。另外，由于包含个亚型......”。

3、“.....因此需要个广谱疫苗，才能够抵御不同株系和不同亚型感染，才能有效预防将来未知变异株。最近，上两个高度保守线性表位和被鉴定出来，它们能诱导机体产生高滴度广谱中和抗体，但效价较低，分别为和。因此，需要找到更好策略来增强其免疫原性。病毒样颗粒，是由病毒结构蛋白组装而成，不含病毒核酸空壳结构。它不含核酸，因而没有感染性其结构与全病毒结构相似，因此具有良好免疫原性。另外，表面能够重复且高密度展示外源性表位从而引发强有力免疫应答，因此它对于多种疾病来说都是种可开发理想疫苗形式。可在多种原核和真核表达系统中表达......”。

4、“.....其中植物表达系统中农杆菌介导瞬时表达体系成本低，表达效果好，表达量可观，是种理想表达系统。重组乙肝表面抗原，目前被广泛应用于乙肝疫苗生产中。除用于乙肝疫苗以外，还可与异源表位融合表达，作为种展示异源表位有效载体。研究表明，可容纳并展示多种新型异源表位，可容纳多达个氨基酸融合片段仍保持病毒样颗粒组装能力，。本课题将，与融合表达，利用农杆菌介导瞬时表达系统，高效表达出具有，病毒样颗粒，该病毒样颗粒高密度重复展示，从而极大增强免疫原性和广谱保护性。另外，用该融合进行免疫后，机体同时产生针对和免疫应答......”。

5、“.....因此可为手足口病乙肝二联疫苗开发提供新思路。该疫苗成本低，免疫原性强，安全性好，具有广阔应用前景。材料与方法重组质粒构建根据经过植物密码子优化过基因序列设计上游引物和下游引物上海生工合成，下游引物中，在终止密码子之前插入酶切位点。以质粒为模版，扩增聚合酶，产物经过纯化普通纯化试剂盒后，利用和双酶切，同时将载体质粒图用和进行双酶切，回收酶切产物胶回收试剂盒。将目基因与载体连接，连接产物转化感受态，挑取单克隆，用载体上游引物与目基因下游引物进行鉴定，扩增后提取质粒质粒小抽试剂盒酶切鉴定......”。

6、“.....本科生毕业论文设计题目基于乙肝表面抗原与肠道病毒型中和表位病毒样颗粒在植物中表达与鉴定姓名李大鹏学院动物医学院专业动物医学班级动医学号指导教师黄忠孙钦伟职称研究员讲师年月日南京农业大学教务处制目录摘要关键词引言材料与方法重组质粒构建在烟草中农杆菌介导表达蛋白提取与定量免疫印迹蔗糖密度梯度离心结果重组农杆菌构建与转染重组融合蛋白表达检测融合蛋白表达量检测免疫印迹病毒样颗粒组装检测讨论基于外源性表位呈递模型建立农杆菌介导瞬时表达系统与融合蛋白表达量基于重组抗原性分析致谢参考文献图植物重组表达载体构建图......”。

7、“.....与表达图蔗糖密度梯度离心夹心检测结果图，与亲水性，抗原性与表面可能性分析基于乙肝表面抗原与肠道病毒型中和表位病毒样颗粒在植物中表达与鉴定动物医学专业学生李大鹏指导教师黄忠孙钦伟摘要肠道病毒型，是引起手足口病主要病原体，目前尚未有商品化疫苗上市，如何研制出廉价，规模化，且能诱导出广谱中和抗体疫苗是目前需要解决问题。和是衣壳蛋白上两个高度保守线性中和表位。我们将和融合在乙肝表面抗原，端或端，将作为呈递外源表位载体，组装成病毒样颗粒从而将和展示在表面......”。

8、“.....同时，自身仍具有抗原性和免疫原性。利用农杆菌介导瞬时表达系统，在缩短周期同时提高产量。该病毒样颗粒表达，为广谱疫苗研制，以及乙肝病毒，二联疫苗研制提供了可能。关键词肠道病毒型乙肝表面抗原病毒样颗粒植物瞬时表达系统手足口病，是婴幼儿常见传染病，该病传染性强，死亡率高，易引起暴发或流行，近年来，该病感染和流行在亚太地区呈上升趋势，非常值得人们密切关注。目前尚无疫苗可供预防。肠道病毒，是引起手足口病主要病原体，该病毒属于小病毒科肠道病毒属，有四个衣壳蛋白和，其中包含个氨基酸，具有良好免疫原性。目前......”。

9、“.....目前主要疫苗策略包括灭活疫苗弱毒疫苗疫苗活载体疫苗亚单位疫苗多肽疫苗以及病毒样颗粒疫苗。研究较多是灭活疫苗，已在小鼠模型中证实对病毒攻击具有定保护效果，据报道，有几个候选疫苗可能在今年进入临床试验。但是目前病毒在细胞中产量较低，难以达到商品化所需产量，且其安全性还有待长期考察。已发表数据显示，与灭活疫苗蛋白重组疫苗以及表达疫苗相比，病毒样颗粒诱导中和抗体水平和保护效果是最好。目前只有台湾个实验室报道用昆虫杆状病毒系统共表达和蛋白来生产病毒样颗粒，但表达量低，难以达到大规模疫苗接种所需剂量要求。综上所述......”。