1、“..... 年度 第季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 在食品和临床标本上的应用及效果分析。 第二季度环介导等温扩菌实验技术建立。 第二季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 的准确度分析。 第三季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 的灵敏度分析。 第四季度环介导等温扩增扩增反应体系优化，温育条件优化。 第四季度扩增反应产物检测方法的建立快速显色法电泳分 析法。 年度 第季度环介导等温扩增快速检测病原菌方法操作程序确定，多重等温扩增同时检测多种病原产物在分钟内 完成。 四项目执行过程中各阶段目标 年度 第季度设计引物，引物合成，购买实验菌株和有关试剂，完 善实验条件。 第二季度样品采集，病原菌提取。 第三季度等温的方法对病原菌目的基因检测的灵敏度达到 拷贝......”。

2、“..... 对病原菌目的基因的等温扩增过程在分钟内完成，显 色法检测扩增产物在分钟内完成，电泳法检测扩增照 试剂盒 中试 同类产品比较试验国标法比较试验 方法应用于病原体检测 样品收集 核酸提取引物设计 基因序列分析本项目建立的方法对病原菌检测的准确率达到。 本项目建立 工艺流程 三项目技术质量指标 引物优化组合 反应体系的建立 灵敏度试验特异性试验反应条件优化阴性对照阳性对温扩增快速检测试剂盒的 研制 根据本项目所建立的最佳反应体系和反应产物显示方 法，研制开发快速检测病原菌的试剂盒包括单病原菌检测试剂盒 和多种病原菌同时检测试剂盒......”。

3、“.....分析本方法对不同 样品检测的准确率。 病原菌的环介导等温扩增和多重等速检测方法与国际标准方法 及常规扩增方法比较分析 以的两个外引物做常规扩增，并与的扩增结果进 行比较分析，进步判断技术的灵敏度特异性和稳定性。 常见来，人们将技术用于病原常见病原菌的环介导等温扩增快速检测方法的特异性分析 分别以病原菌和非病原菌基因组为模板做环介导等温扩增反 应，检测本方法的特异性。常见病原菌的环介导等温扩增快聚合酶用量浓度等条件进行优化，能够获得最佳实验条件。 创新点 既往对病原菌的检测般采用细菌分离培养鉴定法，但该方 法的准确率低，所需时间长，往往延误临床正确的诊断和治疗。近年 等温扩增软件设计了 部分引物，现正通过实验确定这些引物的性能。本项目的另技术关键是最佳等温扩增体系优化。通过对引 物浓度内引物和外引物的最佳浓度比模板浓度浓度 。与常规引物不同......”。

4、“.....组引物要求有个位点与靶序列 完全匹配才能够进行扩增。目前我们已从国际基因组数据库中下载了 部分病原菌的基因组，并根据基因组特点采用，取得了阶段性研究成果，这些工作为本项目的顺利完成奠定了 基础。 二技术方案论述 项目技术关键点和创新点，项目完成时达到的技术 水平 技术关键 本项目的技术关键之是引物设计医学领域中的检测和诊断技术的进步有推动作用。 项目目前进展情况 课题组开展了大量前期研究工作，已完成了本项目所需的科研平 台建设任务，开展了嗜水单胞菌和金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增 研究，医学领域中的检测和诊断技术的进步有推动作用。 项目目前进展情况 课题组开展了大量前期研究工作，已完成了本项目所需的科研平 台建设任务，开展了嗜水单胞菌和金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增 研究，取得了阶段性研究成果，这些工作为本项目的顺利完成奠定了 基础......”。

5、“.....项目完成时达到的技术 水平 技术关键 本项目的技术关键之是引物设计。与常规引物不同， 环介导等温扩增引物设计难度大，组引物要求有个位点与靶序列 完全匹配才能够进行扩增。目前我们已从国际基因组数据库中下载了 部分病原菌的基因组，并根据基因组特点采用等温扩增软件设计了 部分引物，现正通过实验确定这些引物的性能。本项目的另技术关键是最佳等温扩增体系优化。通过对引 物浓度内引物和外引物的最佳浓度比模板浓度浓度 聚合酶用量浓度等条件进行优化，能够获得最佳实验条件。 创新点 既往对病原菌的检测般采用细菌分离培养鉴定法，但该方 法的准确率低，所需时间长，往往延误临床正确的诊断和治疗。近年 来，人们将技术用于病原常见病原菌的环介导等温扩增快速检测方法的特异性分析 分别以病原菌和非病原菌基因组为模板做环介导等温扩增反 应......”。

6、“.....常见病原菌的环介导等温扩增快速检测方法与国际标准方法 及常规扩增方法比较分析 以的两个外引物做常规扩增，并与的扩增结果进 行比较分析，进步判断技术的灵敏度特异性和稳定性。 常见病原菌的环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测方法 在食品检测和临床诊断中的应用研究 将本方法应用于食品检测和临床诊断中，分析本方法对不同 样品检测的准确率。 病原菌的环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测试剂盒的 研制 根据本项目所建立的最佳反应体系和反应产物显示方 法，研制开发快速检测病原菌的试剂盒包括单病原菌检测试剂盒 和多种病原菌同时检测试剂盒......”。

7、“..... 本项目建立的方法对病原菌目的基因检测的灵敏度达到 拷贝。 本项目建立的方法不产生非特异性扩增产物。 对病原菌目的基因的等温扩增过程在分钟内完成，显 色法检测扩增产物在分钟内完成，电泳法检测扩增产物在分钟内 完成。 四项目执行过程中各阶段目标 年度 第季度设计引物，引物合成，购买实验菌株和有关试剂，完 善实验条件。 第二季度样品采集，病原菌提取。 第三季度等温扩增反应体系优化，温育条件优化。 第四季度扩增反应产物检测方法的建立快速显色法电泳分 析法。 年度 第季度环介导等温扩增快速检测病原菌方法操作程序确定，多重等温扩增同时检测多种病原菌实验技术建立。 第二季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 的准确度分析......”。

8、“..... 第四季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 与常规扩增方法比较分析。 年度 第季度环介导等温扩增和多重等温扩增快速检测病原菌方法 在食品和临床标本上的应用及效果分析。 第二季度环介导等温扩增快速检测病原菌试剂盒和多重等温扩 增试剂盒研制。 第三季度试剂盒的应用及技术推广。 第四季度课题总结，鉴定。 五项目经费预算情况 本项目申请科研经费万元。其中设备仪器购置费万元材 料样品加工费万元土建安装费万元资料调研费 选题的必要性 项目所处技术领域产业政策 本项目属生物高技术领域，是国家重点支持的研究领域，项目主 要针对严重影响人类健康的主要病原菌的检测与诊断需要进行检测技 术的研究与试剂盒的开发，本项目的实施可产生具有自主知识产权的 科研成果。本项目技术含量高，市场竞争力强......”。

9、“.....项目符合国家产业技术政策。 项目所处技术领域技术发展现状 目前的病原菌检测方法费时费力准确性低，开发快速准确 低成本的检测技术和配套试剂是病原菌检测工作中亟待攻克的难题。 本项目针对病原菌检测中存在的问题，采用高灵敏度高特异性的环 介导等温扩增技术开发出简便快速经济的检测试剂。 项目技术先进性，对相关领域技术进步的推动作用 环介导等温扩增是利用个特殊设计的引物和具有链置换活性的 聚合酶，在恒温条件下特异高效快速地扩增的新技术。该 技术在内能扩增出靶序列拷贝。技术以其特异性强灵敏度高快速准确和操作简便等优点在核酸的科学研究疾病的诊断 和转基因食品检测等领域得到了日益广泛的应用。该技术的推广对生 物学食品科学及医学领域中的检测和诊断技术的进步有推动作用。 项目目前进展情况 课题组开展了大量前期研究工作......”。