1、“.....由于抗菌肽具有 疏水和亲水的两亲性特征，通过其双亲性正电荷与细胞膜磷脂分 子上的负电荷形成静电吸附而结合在细胞的磷脂膜上，随后抗菌 肽分子的疏水端插入细菌细胞膜的脂质膜中,进而造成细胞膜穿 孔，使细胞质外溢而达到杀菌的目的。由于抗菌肽与细菌细胞膜 的结合不需要膜上特定的受体，因此不会诱导产生抗药菌株和交 叉抗性，有望给临床医学药学食品加工动物和植物转基因 技术等领域带来广阔的开发应用前景。 鱼类生活在水环境中。由于环境的破坏，自然水体和养殖水体污染日益严重，水体中病源微生物种类和含量在不断增加。面 对复杂的生存环境，鱼类在生存过程中需要不断地同大量的病原 微生物作斗争。但是，由于鱼类没有或淋巴细胞，体液因子 中也没有免疫球蛋白的存在，在消灭入侵的微生物时，抗菌肽就 起到了至关重要的作用。因此......”。

2、“..... 月动物实验。 月课题总结鉴定。 项目经费预算情况项目投资总额项目已完成投资 项目须新增投资及投资构成和投资预算申请科技三项经费的 使用预构建抗菌肽基因 酵母表达系统。 月筛选高效表达抗菌肽的酵母系统。 月酵母发酵条件的优化。 年 月采用发酵法生产抗菌肽。 月抗菌肽的分离和纯化。 月抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定 抗菌肽的抗菌活性高，抗菌谱广。 分阶段描述项目执行过程中各阶段目标 年 月将抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体 连接，构建重组表达载体。月将重组载体转入解脂耶氏酵母，项目达到的目标 构建出抗菌肽酵母高效表达体系，大量表达抗菌肽。 研制出具有自主知识产权的高效广谱的抗菌肽制剂。 考核指标 该酵母表达体系对抗菌肽的表达稳定，表达量的重复性 效果,测定抑菌圈直径，了解抗菌肽的抗菌谱......”。

3、“..... 项目技术质量指标项目产品达到的主要技术性能指 标执行的质量标准通过的国家相关行业许可认证等 化脓链状球菌流感病毒疱疹病毒为受抑菌。将大 肠杆菌等受抑菌培养后分别加入到平皿中,用玻璃刮铲将菌液涂布 均匀,再将浸透被测样品液的滤纸片放在培养基的表面,标记后置 于恒温箱中培养，观察抑菌定。 采用琼脂扩散纸片法。以大肠杆菌沙门氏菌,肠球菌链球菌 分枝杆菌巴氏杆菌布鲁氏菌弧菌痢疾杆菌绿脓杆菌梭 状芽孢杆菌李氏杆菌巨大芽孢杆菌醋酸钙不动杆菌金黄 色葡萄球菌析，收集各个洗脱峰,用的分析鉴定目的多肽 所在的峰。将含有目的多肽的洗脱液用透析,冻干浓缩。多肽于 保存,用于分析鉴定及生物功能试验。 抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测 平上筛选抗菌肽高效表达酵母。 抗菌肽的大量表达。 利用筛选到的高效表达酵母菌发酵产生抗菌肽。 抗菌肽的分离纯化......”。

4、“.....采用硫酸铵沉淀抗菌肽。经 层肽基因酵母表达体系的构建及高效表达系统的筛选 采用醋酸锂法将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因 酵母表达系统。采用法和法从转录和翻译两个水 菌肽的抗菌活性和抗菌谱测 定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验 重组表达载体的构建 将我们从淡水鱼中诱导表达的抗菌肽基因与具有高效表达启动 子的表达载体连接，构建重组表达载体。 抗菌细胞，体液因子 中也没有免疫球蛋 参数 将采用技术从鱼类克隆的抗菌肽全长基因与表达载 体连接构建重组载体重组载体转入酵母筛选抗菌肽高效 表达酵母体系大量表达抗菌肽抗境中。由于环境的破坏，自然水体和养殖水体污染日益严重，水体中病源微生物种类和含量在不断增加。面 对复杂的生存环境，鱼类在生存过程中需要不断地同大量的病原 微生物作斗争。但是，由于鱼类没有或淋巴......”。

5、“.....因此不会诱导产生抗药菌株和交 叉抗性，有望给临床医学药学食品加工动物和植物转基因 技术等领域带来广阔的开发应用前景。 鱼类生活在水环两亲性特征，通过其双亲性正电荷与细胞膜磷脂分 子上的负电荷形成静电吸附而结合在细胞的磷脂膜上，随后抗菌 肽分子的疏水端插入细菌细胞膜的脂质膜中,进而造成细胞膜穿 孔，使细胞质外溢而达到杀菌的目的的靶 位点发生改变时，抗生素就会失去其抗菌作用，病原微生物往往 通过基因突变改变抗生素靶位点而产生对抗生素有抗性的耐药菌 株抗菌肽对病原体的作用则完全是物理作用。由于抗菌肽具有 疏水和亲水的际学术研究的活跃领域之。 抗菌肽的抗菌机制与传统抗生素不同，传统抗生素是与病原 体特定部位的受体结合从而使病原体的正常结构遭到破坏或使 些生物合成受阻，以达到抑菌或杀菌的作用，当抗生素作用的际学术研究的活跃领域之。 抗菌肽的抗菌机制与传统抗生素不同......”。

6、“.....以达到抑菌或杀菌的作用，当抗生素作用的靶 位点发生改变时，抗生素就会失去其抗菌作用，病原微生物往往 通过基因突变改变抗生素靶位点而产生对抗生素有抗性的耐药菌 株抗菌肽对病原体的作用则完全是物理作用。由于抗菌肽具有 疏水和亲水的两亲性特征，通过其双亲性正电荷与细胞膜磷脂分 子上的负电荷形成静电吸附而结合在细胞的磷脂膜上，随后抗菌 肽分子的疏水端插入细菌细胞膜的脂质膜中,进而造成细胞膜穿 孔，使细胞质外溢而达到杀菌的目的。由于抗菌肽与细菌细胞膜 的结合不需要膜上特定的受体，因此不会诱导产生抗药菌株和交 叉抗性，有望给临床医学药学食品加工动物和植物转基因 技术等领域带来广阔的开发应用前景。 鱼类生活在水环境中。由于环境的破坏，自然水体和养殖水体污染日益严重......”。

7、“.....面 对复杂的生存环境，鱼类在生存过程中需要不断地同大量的病原 微生物作斗争。但是，由于鱼类没有或淋巴细胞，体液因子 中也没有免疫球蛋 参数 将采用技术从鱼类克隆的抗菌肽全长基因与表达载 体连接构建重组载体重组载体转入酵母筛选抗菌肽高效 表达酵母体系大量表达抗菌肽抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测 定抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验 重组表达载体的构建 将我们从淡水鱼中诱导表达的抗菌肽基因与具有高效表达启动 子的表达载体连接，构建重组表达载体。 抗菌肽基因酵母表达体系的构建及高效表达系统的筛选 采用醋酸锂法将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因 酵母表达系统。采用法和法从转录和翻译两个水 平上筛选抗菌肽高效表达酵母。 抗菌肽的大量表达。 利用筛选到的高效表达酵母菌发酵产生抗菌肽。 抗菌肽的分离纯化。 离心收集表达上清液......”。

8、“.....收集各个洗脱峰,用的分析鉴定目的多肽 所在的峰。将含有目的多肽的洗脱液用透析,冻干浓缩。多肽于 保存,用于分析鉴定及生物功能试验。 抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定。 采用琼脂扩散纸片法。以大肠杆菌沙门氏菌,肠球菌链球菌 分枝杆菌巴氏杆菌布鲁氏菌弧菌痢疾杆菌绿脓杆菌梭 状芽孢杆菌李氏杆菌巨大芽孢杆菌醋酸钙不动杆菌金黄 色葡萄球菌化脓链状球菌流感病毒疱疹病毒为受抑菌。将大 肠杆菌等受抑菌培养后分别加入到平皿中,用玻璃刮铲将菌液涂布 均匀,再将浸透被测样品液的滤纸片放在培养基的表面,标记后置 于恒温箱中培养，观察抑菌效果,测定抑菌圈直径，了解抗菌肽的抗菌谱。 将抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验。 项目技术质量指标项目产品达到的主要技术性能指 标执行的质量标准通过的国家相关行业许可认证等 项目达到的目标 构建出抗菌肽酵母高效表达体系，大量表达抗菌肽......”。

9、“..... 考核指标 该酵母表达体系对抗菌肽的表达稳定，表达量的重复性 。 抗菌肽的抗菌活性高，抗菌谱广。 分阶段描述项目执行过程中各阶段目标 年 月将抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体 连接，构建重组表达载体。月将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因 酵母表达系统。 月筛选高效表达抗菌肽的酵母系统。 月酵母发酵条件的优化。 年 月采用发酵法生产抗菌肽。 月抗菌肽的分离和纯化。 月抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定。 年 月含抗菌肽饲料的配制。 月动物实验。 月课题总结鉴定。 项目经费预算情况项目投资总额项目已完成投资 项目须新增投资及投资构成和投资预算申请科技三项经费的 使用预算见附表。 申请经费总额万元......”。