1、“.....由于抗菌肽具有 疏水和亲水的两亲性特征，通过其双亲性正电荷与细胞膜磷脂分 子上的负电荷形成静电吸附而结合在细胞的磷脂膜上，随后抗菌 肽分子的疏水端插入细菌细胞膜的脂质膜中,进而造成细胞膜穿 孔，使细胞质外溢而达到杀菌的目的。由于抗菌肽与细菌细胞膜 的结合不需要膜上特定的受体，因此不会诱导产生抗药菌株和交 叉抗性，有望给临床医学药学食品加工动物和植物转基因 技术等领域带来广阔的开发应用前景。 鱼类生活在水环境中。由于环境的破坏，自然水体和养殖水体污染日益严重，水体中病源微生物种类和含量在不断增加。面 对复杂的生存环境，鱼类在生存过程中需要不断地同大量的病原 微生物作斗争。但是，由于鱼类没有或淋巴细胞，体液因子 中也没有免疫球蛋白的存在，在消灭入侵的微生物时，抗菌肽就 起到了至关重要的作用。因此，鱼类先天免疫系统中极有化。 年 月采用发酵法生产抗菌肽。 月抗菌肽的分离和纯化。 月抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定......”。

2、“..... 月动物实验。 与具有高效表达启动子的表达载体 连接，构建重组表达载体。月将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因 酵母表达系统。 月筛选高效表达抗菌肽的酵母系统。 月酵母发酵条件的优考核指标 该酵母表达体系对抗菌肽的表达稳定，表达量的重复性 。 抗菌肽的抗菌活性高，抗菌谱广。 分阶段描述项目执行过程中各阶段目标 年 月将抗菌肽基因技术性能指 标执行的质量标准通过的国家相关行业许可认证等 项目达到的目标 构建出抗菌肽酵母高效表达体系，大量表达抗菌肽。 研制出具有自主知识产权的高效广谱的抗菌肽制剂。 液的滤纸片放在培养基的表面,标记后置 于恒温箱中培养，观察抑菌效果,测定抑菌圈直径，了解抗菌肽的抗菌谱。 将抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验。 项目技术质量指标项目产品达到的主要杆菌李氏杆菌巨大芽孢杆菌醋酸钙不动杆菌金黄 色葡萄球菌化脓链状球菌流感病毒疱疹病毒为受抑菌......”。

3、“.....用玻璃刮铲将菌液涂布 均匀,再将浸透被测样品该方法只能在不同生物中试验。 抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定。 采用琼脂扩散纸片法。以大肠杆菌沙门氏菌,肠球菌链球菌 分枝杆菌巴氏杆菌布鲁氏菌弧菌痢疾杆菌绿脓杆菌梭 状芽孢 目前,人们主要以两种方法获得抗菌肽。其是直接从生物体 内分离抗菌肽，用这种方法不能获得大量的抗菌肽。其二是根据 已发现的抗菌肽基因的序列设计引物在不同的生物中通过技 术克隆抗菌肽基因，技术克隆了它们的全长基因。 这些工作为本项目的实施奠定了基础。 二技术方案论述 项目技术关键点或创新点论述，项目完成时达到的技 术水平 。 我们已进行了前期工作，用引起人畜共患病的多种微生物诱导 鱼，继而采用差异显示技术从经微生物诱导的鱼的肝脏中分 离到了三个特异表达的分子，并使用 子转入解脂耶氏酵母中，筛选高效表达抗菌肽的工程菌，以工程 菌工业化发酵生产抗菌肽，进而开发出高效广谱的新型抗菌剂。 该项目的实施对相关领域技术进步有定的推动作用......”。

4、“.....用基因克隆技 术将我们从鱼肝脏中分离的抗菌肽基因与具有高效表达启动子的 表达载体连接，构建重组分子。然后用醋酸锂法将重组分 起步较晚，仅有少量报道。大量结果显示不同的抗菌肽其抗菌活 性和抗菌谱存在很大的差异，因此继续寻找高效广谱的生物抗菌 肽，是广大生命科学工作者努力的方向。 项目技术先进性，对相关领域技研究已经取得了 许多进展。法国科学家蒂马克先生于年月创建了 公司，目的是尽可能得到不同类型的抗菌肽分子。迄今国外科学家已在不同生物中发现了多种抗菌肽，我国在抗菌肽的研究方面的抗菌机制，广谱的杀菌作用，高效的 抗菌活性以及靶菌株难以产生抗性等优点，因此有着广阔的开发 应用前景，是目前国际学术研究的活跃领域之。计算机检索表 明，国外的科学家作了大量的工作，对抗菌肽的效广谱的 鱼类抗菌肽基因，本项目拟通过酵母表达获得抗菌肽，并将抗菌 肽添加到饲料中......”。

5、“..... 项目所处技术领域技术发展现状 由于抗菌肽具有独特有或淋巴细胞，体液因子 中也没有免疫球蛋白的存在，在消灭入侵的微生物时，抗菌肽就 起到了至关重要的作用。因此，鱼类先天免疫系统中极有可能存 在高效广谱的生物抗菌肽。我们在前期工作中克隆了高效有或淋巴细胞，体液因子 中也没有免疫球蛋白的存在，在消灭入侵的微生物时，抗菌肽就 起到了至关重要的作用。因此，鱼类先天免疫系统中极有可能存 在高效广谱的生物抗菌肽。我们在前期工作中克隆了高效广谱的 鱼类抗菌肽基因，本项目拟通过酵母表达获得抗菌肽，并将抗菌 肽添加到饲料中，为日益严重的鱼类和畜禽病害防治开辟新的途 径。 项目所处技术领域技术发展现状 由于抗菌肽具有独特的抗菌机制，广谱的杀菌作用，高效的 抗菌活性以及靶菌株难以产生抗性等优点，因此有着广阔的开发 应用前景，是目前国际学术研究的活跃领域之。计算机检索表 明，国外的科学家作了大量的工作，对抗菌肽的研究已经取得了 许多进展......”。

6、“.....目的是尽可能得到不同类型的抗菌肽分子。迄今国外科学家已在不同生物中发现了多种抗菌肽，我国在抗菌肽的研究方面 起步较晚，仅有少量报道。大量结果显示不同的抗菌肽其抗菌活 性和抗菌谱存在很大的差异，因此继续寻找高效广谱的生物抗菌 肽，是广大生命科学工作者努力的方向。 项目技术先进性，对相关领域技术进步的推动作用 本项目采用的是先进的分子生物学研究技术。用基因克隆技 术将我们从鱼肝脏中分离的抗菌肽基因与具有高效表达启动子的 表达载体连接，构建重组分子。然后用醋酸锂法将重组分 子转入解脂耶氏酵母中，筛选高效表达抗菌肽的工程菌，以工程 菌工业化发酵生产抗菌肽，进而开发出高效广谱的新型抗菌剂。 该项目的实施对相关领域技术进步有定的推动作用。 项目目前进展情况。 我们已进行了前期工作，用引起人畜共患病的多种微生物诱导 鱼，继而采用差异显示技术从经微生物诱导的鱼的肝脏中分 离到了三个特异表达的分子，并使用技术克隆了它们的全长基因......”。

7、“..... 二技术方案论述 项目技术关键点或创新点论述，项目完成时达到的技 术水平 目前,人们主要以两种方法获得抗菌肽。其是直接从生物体 内分离抗菌肽，用这种方法不能获得大量的抗菌肽。其二是根据 已发现的抗菌肽基因的序列设计引物在不同的生物中通过技 术克隆抗菌肽基因，该方法只能在不同生物中试验。 抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定。 采用琼脂扩散纸片法。以大肠杆菌沙门氏菌,肠球菌链球菌 分枝杆菌巴氏杆菌布鲁氏菌弧菌痢疾杆菌绿脓杆菌梭 状芽孢杆菌李氏杆菌巨大芽孢杆菌醋酸钙不动杆菌金黄 色葡萄球菌化脓链状球菌流感病毒疱疹病毒为受抑菌。将大 肠杆菌等受抑菌培养后分别加入到平皿中,用玻璃刮铲将菌液涂布 均匀,再将浸透被测样品液的滤纸片放在培养基的表面,标记后置 于恒温箱中培养，观察抑菌效果,测定抑菌圈直径，了解抗菌肽的抗菌谱。 将抗菌肽作为饲料添加剂进行动物实验......”。

8、“.....大量表达抗菌肽。 研制出具有自主知识产权的高效广谱的抗菌肽制剂。 考核指标 该酵母表达体系对抗菌肽的表达稳定，表达量的重复性 。 抗菌肽的抗菌活性高，抗菌谱广。 分阶段描述项目执行过程中各阶段目标 年 月将抗菌肽基因与具有高效表达启动子的表达载体 连接，构建重组表达载体。月将重组载体转入解脂耶氏酵母，构建抗菌肽基因 酵母表达系统。 月筛选高效表达抗菌肽的酵母系统。 月酵母发酵条件的优化。 年 月采用发酵法生产抗菌肽。 月抗菌肽的分离和纯化。 月抗菌肽的抗菌活性和抗菌谱测定。 年 月含抗菌肽饲料的配制。 月动物实验。 月课题总结鉴定。 项目经费预算情况项目投资总额项目已完成投资 项目须新增投资及投资构成和投资预算申请科技三项经费的 使用预算见附表。 申请经费总额万元。其中仪器设备购置费万元材料样品费万元试验费检测费万元资料调研费 万元鉴定费万元......”。

9、“.....参加了欧盟资助的有关微生物抗菌肽在解脂耶氏酵母中表达 的研究课题，掌握了抗菌肽研究的相关技术，为本课题的顺利完成 奠定了技术基础。 项目实验检测条件 申请人所在实验室为江西省生物化学与分子生物学重点实验 室，具有全自动测序仪型 型电转仪高速冷冻离心机超速冷冻离心机超低温 冰箱仪，超纯水系统各种规格的电泳仪杂交仪 紫外分光光度计设施先进的细菌培养室等仪器设备。 上述仪器设备基本上可满足本项目的研究需要。 项目申请单位人才资源情况技术人员总数中高级 技术人员比例 项目申请单位南昌大学是我省唯所省部共建的工程重 点建设大学，人才资源丰富，科研力量雄厚。生命科学学院有专任教 师人，其中正副教授人，讲师人，中高级技术人员比例。 项目组人员专业结构职称结构 项目组科研人员人，主要由生物化学与分子生物学专业微生 物学专业人员组成，专业结构合理。科研人员中......”。