1、“.....做好安全工作。 突变菌株的筛选 包括琼脂块透明圈法初筛。 方法倒入选择培养基皿，取其中较厚的皿，用打孔器或玻璃打制圆形 培养基平移琼脂块至个选择平板上，再用接种针挑取单菌落的少量菌体分别 接种于琼脂块中心并与琼脂块接入出发菌株作为对照正置于培养小 时于培养好的选择平板中滴加几滴淀粉天青，观察到透明圈的直径选择透明 圈大的菌落接入斜面备复筛用。 摇瓶发酵复筛将经初筛处的菌株分别接入增殖培养基中，培养小时 分别接种于锥形瓶发酵培养基中置摇床上发酵小时选出酶活力较高 者进步复筛直至选出中性淀粉酶高产突变株。 菌种的保藏 菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务是使菌 种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转 化。 菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件......”。

2、“.....以减少其变异。般可通过保持培养基营养成分在最低 水平缺氧状态干燥和低温，使菌种处于休眠状态，抑制其繁殖能力。常用 的菌种宝藏方法有斜面冰箱宝藏法沙土管宝藏法菌丝速冻法石蜡油封存 法真空冷冻干燥保藏法液氮超低温保藏法。 在这里我们采用沙土保藏法。方法将需保藏的菌种经斜面培养后用无菌水 制成孢子悬液，加入经灭菌处理的沙和土的混合物或纯沙亦可作为载体，减 压抽去水分，这些吸附有孢子的干燥沙土载体，在低温下保存。 操作步骤斜面孢子先加灭菌蒸馏水，沿斜面轻刮孢子后，再吸 到灭菌备用的沙土管中，在真空度以下进行干燥，直至沙土 管外貌呈松散状态，然后低温保存。经真空干燥后的沙土管，最好放在 密闭容器内，容器内可放入吸潮剂或硅胶等，保藏期间整个容器置于冰箱年产吨中性淀粉酶发酵工艺设计 第页 内。般保存期为年左右......”。

3、“.....可以根据组成状态和用途等进行分类，按照用途可以 分成孢子培养基，种子培养基和发酵培养基。微生物大规模发酵设计主要用到孢 子,种子和发酵培养基这三种类型。 孢子培养基 孢子培养基配制的目的是供菌体繁殖孢子的，常采用的是固体培养基，对这 类培养基的要求是能使菌体生长快速，产生数量多而优质的孢子，并且不会引起 菌体变异。对孢子培养基的要求营养不株的选择 由于野生型菌株生产性能较差，通常采用经历过生产条件考验的菌株，即经 过液体培养的摇瓶种子，这类菌株定的生产性状，对生产环境有较好的适应性， 正突变的可能性也很大。 菌悬液的制备 细菌般要求处于对数生长中期的菌，用玻璃珠振荡，使细胞均分 散，然后用灭菌脱脂棉过滤，得到分散菌株。菌悬液的细胞浓度不宜过高，本课 题中的枯草芽胞杆菌，宜将其浓度控制在个。菌悬液介质般用生理盐 水......”。

4、“.....在微生物诱变育种中，可用物理化学复 合诱变因素处理菌种，这样可以扩大培养幅度，提高诱变效果获得中性淀粉酶高 产突变株。方法及步骤如下 吸取制备好的枯草芽孢杆菌悬液于直径为㎝的无菌培养皿中，然后用 的二乙酯处理，处理时采用的磷酸缓冲液，再将磁力搅 拌器于紫外灯下距离，接着在红灯下吸取经处理的菌液， 稀释至，取稀释液滴滴于个平板中，依次涂布均匀，年产吨中性淀粉酶发酵工艺设计 第页 再置暗箱内与培养。 注意般化学诱变剂均有毒性，多数还具有致癌作用，故操作时切忌用口 吸取并勿与皮肤直接接触，做好安全工作。 突变菌株的筛选 包括琼脂块透明圈法初筛。 方法倒入选择培养基皿，取其中较厚的皿，用打孔器或玻璃打制圆形 培养基平移琼脂块至个选择平板上......”。

5、“.....观察到透明圈的直径选择透明 圈大的菌落接入斜面备复筛用。 摇瓶发酵复筛将经初筛处的菌株分别接入增殖培养基中，培养小时 分别接种于锥形瓶发酵培养基中置摇床上发酵小时选出酶活力较高 者进步复筛直至选出中性淀粉酶高产突变株。 菌种的保藏 菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务是使菌 种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转 化。 菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的 生长代谢活通常采用经历过生产条件考验的菌株，即经 过液体培养的摇瓶种子，这类菌株定的生产性状，对生产环境有较好的适应性， 正突变的可能性也很大。 菌悬液的制备 细菌般要求处于对数生长中期的菌，用玻璃珠振荡，使细胞均分 散，然后用灭菌脱脂棉过滤，得到分散菌株。菌悬液的细胞浓度不宜过高......”。

6、“.....宜将其浓度控制在个。菌悬液介质般用生理盐 水。 诱变剂的处理 诱变剂包括物理化学生物诱变，在微生物诱变育种中，可用物理化学复 合诱变因素处理菌种，这样可以扩大培养幅度，提高诱变效果获得中性淀粉酶高 产突变株。方法及步骤如下 吸取制备好的枯草芽孢杆菌悬液于直径为㎝的无菌培养皿中，然后用 的二乙酯处理，处理时采用的磷酸缓冲液，再将磁力搅 拌器于紫外灯下距离，接着在红灯下吸取经处理的菌液， 稀释至，取稀释液滴滴于个平板中，依次涂布均匀，年产吨中性淀粉酶发酵工艺设计 第页 再置暗箱内与培养。 注意般化学诱变剂均有毒性，多数还具有致癌作用，故操作时切忌用口 吸取并勿与皮肤直接接触，做好安全工作。 突变菌株的筛选 包括琼脂块透明圈法初筛。 方法倒入选择培养基皿，取其中较厚的皿，用打孔器或玻璃打制圆形 培养基平移琼脂块至个选择平板上......”。

7、“.....观察到透明圈的直径选择透明 圈大的菌落接入斜面备复筛用。 摇瓶发酵复筛将经初筛处的菌株分别接入增殖培养基中，培养小时 分别接种于锥形瓶发酵培养基中置摇床上发酵小时选出酶活力较高 者进步复筛直至选出中性淀粉酶高产突变株。 菌种的保藏 菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务是使菌 种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转 化。 菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的 生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。般可通过保持培养基营养成分在最低诱变剂的处理 诱变剂包括物理化学生物诱变，在微生物诱变育种中，可用物理化学复 合诱变因素处理菌种，这样可以扩大培养幅度......”。

8、“.....方法及步骤如下 吸取制备好的枯草芽孢杆菌悬液于直径为㎝的无菌培养皿中，然后用 的二乙酯处理，处理时采用的磷酸缓冲液，再将磁力搅 拌器于紫外灯下距离，接着在红灯下吸取经处理的菌液， 稀释至，取稀释液滴滴于个平板中，依次涂布均匀，年产吨中性淀粉酶发酵工艺设计 第页 再置暗箱内与培养。 注意般化学诱变剂均有毒性，多数还具有致癌作用，故操作时切忌用口 吸取并勿与皮肤直接接触，做好安全工作。 突变菌株的筛选 包括琼脂块透明圈法初筛。 方法倒入选择培养基皿，取其中较厚的皿，用打孔器或玻璃打制圆形 培养基平移琼脂块至个选择平板上，再用接种针挑取单菌落的少量菌体分别 接种于琼脂块中心并与琼脂块接入出发菌株作为对照正置于培养小 时于培养好的选择平板中滴加几滴淀粉天青，观察到透明圈的直径选择透明 圈大的菌落接入斜面备复筛用......”。

9、“.....培养小时 分别接种于锥形瓶发酵培养基中置摇床上发酵小时选出酶活力较高 者进步复筛直至选出中性淀粉酶高产突变株。 菌种的保藏 菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务是使菌 种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转 化。 菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的 生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。般可通过保持培养基营养成分在最低 水平缺氧状态干燥和低温，使菌种处于休眠状态，抑制其繁殖能力。常用 的菌种宝藏方法有斜面冰箱宝藏法沙土管宝藏法菌丝速冻法石蜡油封存 法真空冷冻干燥保藏法液氮超低温保藏法。 在这里我们采用沙土保藏法。方法将需保藏的菌种经斜面培养后用无菌水 制成孢子悬液，加入经灭菌处理的沙和土的混合物或纯沙亦可作为载体，减 压抽去水分......”。