1、“.....扩增的过程是目的基因受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环多次。上述过程可以在扩增仪中自动完成。人工合成目的基因人工合成目的基因的方法主要有两种。反转录法主要用于相对分子质量较大而又不知其序列的基因，它是以目的基因的为模板，借助反转录酶合成碱基互补的单链，然后在聚合酶的作用下合成双链。化学合成法即依照蛋白质的氨基酸序列，通过密码子推算出其基因序列，然后直接合成目的基因。知识贴士由于真核细胞的基因含有不表达的片段，不能直接用于基因的扩增和表达，因此，在获取真核细胞中的目的基因时，般是用人工合成目的基因的方法。目的基因的分离是基因工程研究中的主要方面和操作关键。下面甲乙图表示从真核生物细胞中获取目的基因的两种方法，请回答下列问题。在甲图中，过程是在酶的作用下完成的。如果用该类酶中的种，不定能获取目的基因，其原因是。在乙图中，过程在遗传学上称为，过程称为，过程需以为模板，为原料，还需要的条件是聚合酶等......”。

2、“.....请你再写出种方法。解析获取目的基因的方法较多，甲是通过限制酶获取目的基因，但由于切割位点可能在基因内部，故可能得不到想要的目的基因乙是通过信使逆转录形成目的基因的过程此外，还可通过蛋白质中氨基酸的排列顺序推测基因的脱氧核苷酸序列，再进行化学合成。答案限制性核酸内切种限制性核酸内切酶只能对特定的碱基序列进行切割，此序列若在目的基因内部，则不能得到目的基因转录逆转录脱氧核苷酸逆转录酶根据已知蛋白质中的氨基酸序列，可以推知基因的脱氧核苷酸序列，再进行化学合成下列获取目的基因的方法中需要模板链的是从基因文库中获取目的基因利用技术扩增目的基因反转录法通过合成仪利用化学方法人工合成答案解析利用的是双链复制原理。即将双链之间的氢键打开，变成单链，作为聚合反应的模板。反转录法则是以目的基因转录成的信使为模板，在逆转录酶的作用下，先反转录形成互补的单链，再合成双链的。则均不需要模板。二基因表达载体的构建基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心......”。

3、“.....并且可以遗传给下代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。表达载体的组成启动子目的基因终止子标记基因。目的基因外源分子的有效片段。启动子段有特殊结构的片段，位于基因的首端，它是聚合酶的识别和结合部位，有了它才能驱动基因转录出，最终获得所需的蛋白质。终止子位于基因的尾端，也是段有特殊结构的短片段。终止子相当于盏红色信号灯，使转录到此终止。标记基因鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来，如抗生素抗性基因就可以作为这种基因。目的基因与载体的结合将目的基因与载体结合的过程，实际上是不同来源的重新组合的过程。如果以质粒为载体，将目的基因与质粒结合的步骤是用定的限制酶切割质粒，使其出现个有黏性末端的切口。用同种限制酶切断目的基因，产生相同的黏性末端。将切下的基因片段，插入到质粒的切口处，再加入适量连接酶，使质粒与目的基因结合成重组质粒。差异性由于受体细胞有动物植物微生物之分，加之目的基因导入受体细胞的方法不同，所以表达载体的构建也会有差异性......”。

4、“.....需使用启动子和终止子才能比较有利于基因的表达。如通过文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中，此目的基因无法进行转录。目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记。为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加些其他调控元件，如增强子等。有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标记存在部位的基因或做成目的基因与标记基因的融合基因，如绿色荧光蛋白基因等。下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图图中箭头表示相关限制酶的酶切点。请回答下列问题个图所示的质粒分子经Ⅰ切割前后，分别含有个游离的磷酸基团。若对图中质粒进行改造，插入的Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性标记基因等部分目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因构建的基因表达载体都是相同的答案解析基因表达载体的构建是基因工程的第二步，也是基因工程的核心个基因表达载体的组成除目的基因外还必须具有启动子终止子标记基因等部分目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因由于受体细胞不同......”。

5、“.....不可能都是相同的。三将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为转化。将目的基因导入受体细胞的方法很多，应具体情况具体分析。不同受体细胞导入方法不同。生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射法处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程目的基因插入质粒的上农杆菌导入植物细胞融合到受体细胞的表达目的基因表达载体提纯取卵受精卵显微注射受精卵发育获得具有新性状的动物处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收分子知识贴士农杆菌是种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染力。此外，将目的基因导入植物细胞还可采用基因枪法和花粉管通道法。以上介绍的几种方法，在导入受体细胞之前，都必须进行目的基因表达载体的构建，也就是说导入受体细胞的必须是重组分子，而不能直接导入目的基因。采用基因工程的方法培育抗虫棉......”。

6、“.....注射到棉受精卵中将编码毒素蛋白的序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养将编码毒素蛋白的序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵解析考查基因工程的操作步骤。基因工程的操作步骤是目的基因的获取基因表达载体的构建目的基因导入受体细胞目的基因的检测和鉴定。本题着重考查基因工程步骤中的第三步目的基因必须与细菌质粒重组，形成目的基因表达载体，方可导入棉受精卵中。答案潍坊检测下列关于目的基因导入微生物细胞的叙述中，不正确的是常用原核生物作为受体细胞，是因为原核生物繁殖快，且多为单细胞遗传物质相对较少受体细胞所处的种能吸收周围环境中分子的生理状态称为感受态感受态细胞吸收分子需要适宜的温度和酸碱度感受态细胞吸收重组表达载体分子的液体只要调节为适宜的即可，没必要用缓冲液答案解析由于原核生物繁殖快，且多为单细胞遗传物质相对较少等特点，所以早期的基因工程通常用原核生物作为受体细胞受体细胞经处理后......”。

7、“.....称为感受态感受态细胞吸收分子需要在适宜的温度和酸碱度的缓冲液中完成。四目的基因的检测与鉴定目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其中遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作，也是检查基因工程是否做成功的步。目的基因的检测内容和方法的比较如下表类型步骤检测内容方法结果显示分子检测第步目的基因是否进入受体细胞分子杂交和之间是否成功显示出杂交带第二步目的基因是否转录出分子杂交技术和之间同上第三步目的基因是否翻译出蛋白质抗原抗体杂交同上个体水平鉴定包括做抗虫抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能是否相同知识贴士目的基因在受体细胞中的存在与表达是有区别的。目的基因被受体细胞摄取是表达的前提，但是被摄取并不意味着被表达。由于各种因素的影响，有时还需要采取定的措施去促使目的基因的表达。探针的应用所依据的原理是分子杂交。分子杂交是指片段在适合的条件下能和与之互补的另个片段结合......”。

8、“.....即成为探针。目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是检测受体细胞是否有目的基因检测受体细胞是否有致病基因检测目的基因是否转录检测目的基因是否翻译成蛋白质解析本题考查目的基因的检测与鉴定。目的基因的检测首先要检测转基因生物染色体的上是否插入了目的基因，方法是用分子杂交技术，使探针与基因组杂交其次检测目的基因是否转录出了，方法是用基因探针与杂交最后检测目的基因是否翻译成了蛋白质，方法是用抗原抗体杂交。答案利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品......”。

9、“.....是控制性状的遗传物质的基本结构和功能单位，基因的脱氧核苷酸序列代表遗传信息。基因文库是将含有种生物不同基因的许多片段，导入受体菌的群体中通过克隆而储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，叫做基因文库。建立基因文库的目的就是为获得大量的目的基因作准备。如果基因文库中含有种生物的所有基因，这个基因文库就叫做基因组文库。如果基因文库中含有种生物的部分基因，这个基因文库就叫做文库。基因文库就相当于种生物的基因仓库，储备着大量的同种基因。目的基因是基因工程操作中需要的外源基因，它是编码种蛋白质的结构基因，如生物的抗逆性基因抗虫基因等。复制技术与基因克隆复制与技术的比较复制技术场所细胞核内生物体外原理碱基互补配对碱基互补配对酶聚合酶解旋酶热稳定聚合酶酶条件模板引物链常温模板引物链温度变化原料四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸特点形成的是整个分子，个细胞周期只复制次短时间内形成大量目的基因片段克隆用多种限制性核酸内切酶或者机械的方法，将种生物细胞中的切成不同片段......”。