1、“.....参考文献，上游引物，下游引物。扩增片段大小为，引物由上海生物工程技术公司合成。方法剖检取材剖检后取病变明显的心脏肺脏肝脏肾脏脾脏淋巴结等组织。立即投入盛有中性福尔马林的标本瓶中，贴上标签，注明固定日期，固定。石蜡切片的制作将病料从固定液中取出，水洗，置于酒精脱水，之后顺序放入乙醇乙醇乙醇中，各。将病料从乙醇取出后置于二甲苯透明。将透明好的组织从二甲苯中取出，放入Ⅰ蜡杯Ⅱ蜡杯内透蜡，各。用温热吸管吸热石蜡注入蜡模，用温热镊子夹取组织块放入蜡中，放平。将蜡模全部浸入冷水中，待石蜡全部凝结变硬即可取出蜡块。把包埋好的蜡块用刀片修切成正方形或长方形......”。

2、“.....取洁净的载玻片涂以甘油蛋白，在涂有甘油蛋白的载玻片上滴两滴蒸馏水，将蜡带切成适当长度的片段，以小镊子夹取蜡带，使浮在玻片的水上。然后把玻片放在展片台上，蜡带受热即自动展开，也可用解剖针轻轻拉开。待蜡片完全展平后，用吸水纸吸去多余水分，蜡片在载玻片上展开后，即取下放在切片框上，置入温箱内干燥。染色石蜡切片后，放入烘箱中烘片至蜡融为止。然后放入二甲苯，取出再放入二甲苯，取出，放入酒精分钟两次。然后水洗，在进行苏木素染色，水洗，用盐酸酒精分化浸提次，水洗至蓝化为止，然后用伊红酒精染色，水洗，再放入酒精，取出，放入纯酒精，取出，放入二甲苯至透明，然后用树胶封片，贴标签......”。

3、“.....细菌分离培养取病变明显的新鲜病料，包括心脏肝脏肺脏以及有脓肿的肺脏，将剪刀放在酒精灯上燃烧灭菌，然后轻烫病料周，进行无菌处理，剪下处理后的部分，保持切面平整，分别均匀涂在血琼脂平板培养基和麦康凯培养基上的相应位置。对于肺脓病料，需要用铂耳环挑取脓汁划线于血琼脂平板培养基上的相应位置上。的恒温箱中培养过夜观察结果。细菌染色镜检取洁净载玻片块，毛面向上，依次从上向下标记心肝肺肺脓，并在载玻片的背面画圆，要求两个圆之间有以上距离。首先用酒精灯将铂耳环烧红灭菌，然后用铂耳环蘸取滴分别滴在个载玻片的每个圆中。用铂耳环挑取血琼脂平板上生长的单菌落均匀涂在载玻片的相应圆内。将涂片后的载玻片放在酒精灯火焰上固定......”。

4、“.....染色。用清水冲洗初染后的涂片，加碘液覆盖涂面，用清水再次冲洗媒染后的涂扩增结果阳性对照号病鸡肝脏脾脏由图可见，阳性对照和号病鸡肝脾样品均扩增出条明显的约大小的条带，与目的条带大小相符。小结与讨论本病例中，病鸡的大体病变疑似马立克氏病胸膜肺炎或副猪嗜血杆菌感染等。根据临床症状剖检病变组织学观察以及细菌的分离培养染色镜检和检测，最终综合诊断为马立克氏病。剖检病理变化与组织学病理变化结果表明，剖检可见内脏器官有灰白色的淋巴细胞性肿瘤。常见于性腺尤其是卵巢，其次是肾脾心肝肺胰肠系膜腺胃肠道肌肉等器官组织。本研究中，采用菌落方法进行细菌定性检测。根据徐丽的研究报道......”。

5、“.....具有同样的效果，均能扩增目的片段。常规扩增前需制备纯化模板，其方法主要有酸酚法碱酚法碱性裂解法溴化乙锭密度梯度离心法和煮沸裂解法等。它们各有优缺点，有的操作繁琐，难度大有的则成本较高，同时在反复的操作中量损失也较大，产率较低。而菌落方法最早见于和的文章。他们提到用无菌牙签挑取单个菌落到缓冲液中，煮沸，漩涡振荡后短暂离心，用裂解液作为模板，省去抽提模板这步，有效节省大量时间和实验成本。本实验中，采用菌落方法，将样品跳过抽提这步，而直接以菌体热冻解后暴露的为模板进行扩增，不仅节约了时间，增加了设备利用率，同时降低了研究成本。针对本例病鸡的病程情况，分析鸡场发生此例幼龄鸡感染马立克氏病毒的原因......”。

6、“.....可能是此猪场发生本病的原因之。而若在接种疫苗的情况下依旧发生感染，可能是免疫失败或是病毒产生耐药性，应选择本地区适用的新型抗病毒药物。同时加强饲养管理，注意通风换气和防暑防寒，避免过度拥挤，定期进行动物舍及运动场消毒。坚持全进全出饲养制度。发生本病时，应立即隔离患病猪并严格消毒其污染的场所，在严格隔离的条件下对患病鸡进行治疗。参考文献徐丽，蔡俊鹏菌落方法的建立及其与常规方法的比较华南理工大学学报，致谢对于本论文的完成，我要衷心感谢我的指导老师王小波老师对我的热心帮助和指导。在我撰写论文的时候王老师帮我进行论文的选题，材料的收集和实验的指导。不厌其烦对我论文的指导修改，最后定稿......”。

7、“.....在此表示真诚地感谢和深深的谢意。他对科研工作的严谨态度与敬业作风，以及对待他人耐心真诚的品质令我受益匪浅，是我学习的典范。同时也感谢在我写论文期间帮助我，给予我建议，协助实验的同学们。感谢所有关心支持帮助过我的良师益友。最后，向在百忙中抽出时间对本文进行评审并提出宝贵意见的各位专家表示衷心地感谢，加的酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，后水洗，滴加沙黄染液数滴，染色后用清水再次冲洗，并用吸水纸吸去水分，干燥。制备好的涂片上滴加两滴美蓝染液，后水洗，用吸水纸吸干，干燥，镜检。检测模板制备将从血琼脂平板肺组织培养的细菌菌落上刮取的细菌放入管中，加入超纯水，沸腾......”。

8、“.....放入离心机中转离心。上清液即为模板。反应体系及扩增反应体系总体积，内含，，，上下游引物各，模板，聚合酶，补充去离子水至。反应条件为，个循环保存。电泳制胶使用天平称取琼脂糖，加入缓冲液。置于微波炉上加热，至琼脂糖颗粒完全融化后，倒入胶板内，加上滴溴化乙锭，加上梳子，待冷却后，取出梳子。加样用加样枪吸取溴酚蓝充分混合后，再吸取于加到各加样空，然后再加入的，用作指示条带。将凝胶放入电泳槽内，设置电压，后置于凝胶成像系统内观察结果并拍照。结果临床症状主要表现为步态不稳共济失调。特征症状是肢或多肢麻痹或瘫痪，形成腿伸向前方腿伸向后方，翅膀麻痹下垂。颈部麻痹致使头颈歪斜......”。

9、“.....见图。剖检病变病鸡胸下皮肤可见肿瘤硬块，剖检可见肝脏腺胃肾脏脾脏肺上存在肿瘤硬块和结节图图图图病理组织学变化各内脏器官的组织学变化均以淋巴组织增生和形成肿瘤性病变为主要特征。各脏器的肿瘤病变基本相同，主要表现为淋巴样细胞的弥漫性或局灶性增生与浸润。增生与浸润的肿瘤细胞均由多形态的淋巴样细胞所组成，瘤细胞分裂象多见，受侵害的组织还伴有出血细胞变性或坏死等变化心脏变化心肌内肿瘤组织沿心肌纤维间呈浸润性生长，或在局部形成肿瘤结节，使原有结构遭受不同程度的破坏。残存的心肌纤维着色不匀，纵横纹紊乱，轻度颗粒变性。毛细血管扩张充血，以心外膜处更为明显......”。