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浅析施氏鲟下丘脑神经肽基因的序列分析、克隆和表达特征(水产物论文) 浅析施氏鲟下丘脑神经肽基因的序列分析、克隆和表达特征(水产物论文)

格式:word 上传:2023-05-08 06:16:00

《浅析施氏鲟下丘脑神经肽基因的序列分析、克隆和表达特征(水产物论文)》修改意见稿

1、“.....取按照,的说明进行反转录实验,合成的均稀释倍后于保存备用。图施氏鲟氨基酸序列与其他物种氨基酸对比相同的氨基酸高度保守的氨基酸和比较保守的氨基酸分别以黑色深灰色和浅灰色底色表示末端核心十肽即用黑色粗下划线表示和基因在不同发育时期的表达特征分析以为内参基因,通过实时荧光定量技术分析施氏鲟孵化后不同发育时期和基因相欢迎。此外,施氏鲟个体大,寿命长,性成熟晚,且不具有副性征,外表难以区分雌雄。因此,有关鲟生殖发育调控机制的研究对促进鲟产业的健康发展具有重要的实践意义。本研究旨在克隆得到在施氏鲟生殖发育调控中发挥重要功能的基因,分析其序列特征和系统进化关系,研究其时空表达特征,为实现这养殖鱼类的生殖调控提供理论依据。材料与方法实验材料实验用施氏鲟取自中国水产科学研究院鲟鱼工程繁育中心。选取同时期出膜的仔鱼。养殖条件为水温,溶解氧大于。水蚯蚓作为开口饵料,后投喂混合饲料......”

2、“.....材料与方法实验材料实验用施氏鲟取自中国水产科学研究院鲟鱼工程繁育中心。选取同时期出膜的仔鱼。养殖条件为水温,溶解氧大于。水蚯蚓作为开口饵料,后投喂混合饲料。浅析施氏鲟下丘脑神经肽基因的序列分析克隆和表达特征水产物论文。实时荧光定量检测基因的表达根据已得序列设计定量引物表,以不同组织及不同发育时期脑组织中的总逆转录得到的作为荧光定量模板,以施氏鲟基因为内参,荧光定量仪使用,荧光试剂使用脑合并,作为个重复,设个平行,装入冻存管后用液氮迅速冷冻样品,冰箱保存备用。另取体重的施氏鲟,取其心脏肾脾肠鳃脑及性腺等组织,臵于冰箱保存备用。实验方法总的提取和合成采用总提取试剂盒提取总,按照说明书操作。用琼脂糖凝胶电泳和超微量核酸蛋白测定仪,美国检测完整性和浓度,于保存备用。以总为模板......”

3、“.....的说明进行反转录实验,合罗罗非鱼日本比目鱼塞内加尔鳎以及红鲷等鱼类中只鉴定出了基因。本研究利用技术首次克隆得到施氏鲟的两种基因,和具有高度保守区域,且与达氏鲟和基因序列致性最高,亲缘关系最近。研究证实,和基因的核心序列在不同物种中均非常保守,如斑马鱼青鳉和日本鲭基因编码蛋白的末端核心十肽为,基因编码蛋白的核心十肽为。本研究中,施氏鲟的与蛋白预测的末端核心十肽分图施氏鲟氨基酸序列与其他物种氨基酸对比相同的氨基酸高度保守的氨基酸和比较保守的氨基酸分别以黑色深灰色和浅灰色底色表示末端核心十肽即用黑色粗下划线表示和基因在不同发育时期的表达特征分析以为内参基因,通过实时荧光定量技术分析施氏鲟孵化后不同发育时期和基因相对表达情况,发现与的表达变化规律不同。非参数检验结果显示表明施氏鲟受精卵孵化后内,其体内的的表达量整体存在差异。进步两两比较发现,在第天表达量最高......”

4、“.....构建系统进化树,重复次数设为次。和系统进化树分析发现,进化树可分为两大支,其中施氏鲟与达氏鲟聚为支且支持率为,其次与爬行类聚为支,然后与哺乳类如猕猴鼠牛熊等聚为支图。从图可以看出,施氏鲟与达氏鲟的氨基酸序列相似度最高,但与已报道的其他鱼类在进化过程中则可能发生了定程度的分化,以上表明施氏鲟和均与达氏鲟亲缘关系最近。施氏鲟和,探讨基因的表达量。施氏鲟在孵化后早期性腺发育过程中即性腺原基形成之前,其体内表达量逐渐升高,在第天达到峰值与的表达模式不同,表达量较低,与检测临界值无显著性差异,表明在施氏鲟性别分化早期基因不表达。随着性腺的发育孵化后,施氏鲟脑内的基因开始表达,在达到最高水平。该结果与些硬骨鱼类基因在性腺发育早期的表达趋势大体致。例如,在雄性斑马鱼脑中,表达在孵化后周达到峰值......”

5、“.....雌性斑马鱼脑中在孵化后的周的表达水平,也促进了欧洲鲈和条纹鲈垂体细胞中及卵泡刺激素的分泌,。此外,已有研究证实鱼类基因的时空表达模式与其发育阶段有关,且具有种属特异性。如在鲐中,雄鱼脑中和表达量随精巢发育逐渐降低,且在排精后达最小值雌鱼脑表达量在卵巢发育过程中保持不变,除在卵黄生成早期略增加外,其表达随卵巢发育逐渐降低。在黄鳍结鱼中,雌鱼脑的表达水平在卵巢发育初期明显高于排卵期,且从卵黄期到排卵期脑组织中有表达,但在表达量上有明显差异图。在性腺中的表达量最高,在脑肾肠心和肌肉中微量表达,与其他组织相比,在性腺中的表达差异最显著在脑和性腺中的表达量与心脏脾肠肌肉等组织相比存在显著性差异,而在心脏鳃和肌肉之间的表达差异不显著。基因被认为是和生殖相关的基因,斑马鱼基因主要在脑中表达,性腺中表达相对较少。与之相反,施氏鲟的基因在性腺中高水平表达......”

6、“.....这与塞内加尔鳎南亚浅析施氏鲟下丘脑神经肽基因的序列分析克隆和表达特征水产物论文基因的时空表达分析和基因组织表达特征分析利用荧光定量方法检测和基因在施氏鲟心脾肾肌肉等种组织中的表达情况,结果显示,和在检测的种组织中均有表达,但在表达量上有明显差异图。在性腺中的表达量最高,在脑肾肠心和肌肉中微量表达,与其他组织相比,在性腺中的表达差异最显著在脑和性腺中的表达量与心脏脾肠肌肉等组织相比存在显著性差异,而在心脏鳃和肌肉之间的表达差异不显著。浅析施氏鲟下丘脑神经肽基因的序列分析克隆和表达特征水产物论文施氏鲟的性腺分化及养殖水温对其性腺分化的影响中国水产科学,王镜岩,朱圣庚,徐长法生物化学下册北京高等教育出版社,高雪,吕伟华,王红伟,张颖施氏鲟下丘脑神经肽基因的克隆序列分析及表达特征中国水产科学......”

7、“.....图和蛋白跨膜区分析图和蛋白信号肽预测表氨基酸序列的同源性比对表氨基酸序列的同源性比对图施氏鲟氨基酸序列与其他物种氨基酸对比相同的氨基酸高度保守的氨基酸和比较保守的氨基酸分别以黑色深灰色和浅灰色底色表和基因均比较保守,推测施氏鲟和两栖动物如中华鳖等拥有共同的祖先。图和蛋白跨膜区分析图和蛋白信号肽预测表氨基酸序列的同源性比对表氨基酸序列的同源性比对图施氏鲟氨基酸序列与其他物种氨基酸对比相同的氨基酸高度保守的氨基酸和比较保守的氨基酸分别以黑色深灰色和浅灰色底色表示末端核心十肽即用黑色粗下划线表示利用软件对各个物种蛋白的氨基酸序列进行比对,构建系统进化树,重复次数设为次。和,表达逐渐增加,时达到峰值。等研究发现,斑马鱼和表达水平从孵化后开始升高,且在日龄时显著升高。在尼罗罗非鱼脑中,基因的表达在未成熟阶段显著高于成熟阶段或产卵后阶段。综合以上结果推测......”

8、“.....暗示基因在鱼类早期性腺发育和性别分化过程中具有重要作用,但具体的作用机制仍需进步探究。参考文献廖宗甄,孙彩云,王晓爱,等抚仙金线鲃基因的克隆及组织表达特性川动物,张颖,孙慧武,刘晓勇,的表达水平显著下降,与精子发生前相比,在排精后雄鱼脑中的表达显著下降。可见,随着鱼类性腺的成熟,其体内基因的表达水平发生不同程度的降低。然而,对星点东方鲀的研究发现,从配子发生早期至产卵前后,基因表达均显著升高,且雌鱼基因的表达量要高于雄鱼,此外,等发现在条纹鲈性成熟期,和基因表达均显著升高。研究表明,仔鱼孵化后,原始生殖细胞迁入性腺原基发育为原始性腺,这个时期为施氏鲟性腺分化的关键期,本研究以施氏鲟性腺分化的关键期为切入鲮及欧洲鲈的表达结果致。然而,在鲐的性腺中并没有检测到基因的表达。外周组织中,和基因在施氏鲟的心脏肾和肌肉等组织中均有表达......”

9、“.....以上推测,基因在施氏鲟发育和生殖方面确实有重要作用,且鱼类的基因可能参与除生殖以外的其他功能,但在其他组织中的生理学作用目前尚未见报道。近几年,在鱼类生殖调控中的作用也有较多研究。如直接促进金鱼垂体细胞促黄体激素的分泌,增加了促卵泡激素亚基统进化树分析发现,进化树可分为两大支,其中施氏鲟与达氏鲟聚为支且支持率为,其次与爬行类聚为支,然后与哺乳类如猕猴鼠牛熊等聚为支图。从图可以看出,施氏鲟与达氏鲟的氨基酸序列相似度最高,但与已报道的其他鱼类在进化过程中则可能发生了定程度的分化,以上表明施氏鲟和均与达氏鲟亲缘关系最近。施氏鲟和基因的时空表达分析和基因组织表达特征分析利用荧光定量方法检测和基因在施氏鲟心脾肾肌肉等种组织中的表达情况,结果显示,和在检测的种组织中均浅析施氏鲟下丘脑神经肽基因的序列分析克隆和表达特征水产物论文守......”

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