1、“.....结束后会在和的位臵出现个条带，切取位臵条带，胶回收，作为第轮模板。再用和进行第轮扩增，反应条件为，个循环，个循环延伸。将扩增后的产物使用的琼脂糖进行琼脂糖凝胶电泳，目的条带大约为，切取目的片段，进行胶回收，胶回收产物冻于保存。用和对目的片段和质粒进行酶切并鉴定，使用连接酶将切好的目的片段和质目的片段和质粒进行酶切并鉴定，使用连接酶将切好的目的片段和质粒以∶的比例在的体系中进行连接，反应条件为，连接产物放于保存。结果与分析重组质粒酶切鉴定使用和对构建原核表达载体进行双酶切验证。结果如图，双酶切后，目的基因片段与预期分子量相符。蛋白诱导表达表达菌在经，经鉴定，如图所示，在左右出现与预期大小相符的条带，表明蛋白均成功表达。图质粒酶切鉴定图分析蛋白表达目的片段扩增结果经过两轮扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳后结果如图......”。

2、“.....离心弃上清，用重悬噬菌体沉淀，摇床孵育过夜，使噬菌体充分溶解。牛病毒性腹泻病毒蛋白纳米抗体筛选及反应原性检测探究畜牧养殖论文。引物的设计与合成引物和引自参考文献，和引自参考文献送至北京华大基因合成。详见表。表目的基因扩增所需引物羊驼外周血淋巴细胞的提取按照每淋巴细胞加入的比例，使用氯仿异丙醇和无水乙醇提取总，通过反转录试剂盒获得反应条件为，。目的片段的扩增和重组载体蛋白纳米抗体筛选及反应原性检测畜牧与兽医，基金国家自然科学基金兵团科技发展专项资金。纳米抗体噬菌体展示文库的构建取连接好的重组质粒加入到感受态细胞中，冰上静臵，热激，冰上静臵，加入液体培养基，放于摇床摇，取出后用离心机离心，吸出上清，再加入液体培养基混匀菌体沉淀，涂布到固体培养基上，培养。随机挑取平板中的单克隆个，在液体培养基中，放于摇床摇后，使用第轮用于致病机理诊断及治疗......”。

3、“.....周伟光，关平原，等牛病毒性腹泻病毒致病机制研究进展中国畜牧兽医，刘梦媛牦牛血清流行病学调查及疫苗和猪瘟疫苗对牦牛的免疫效果武汉华中农业大学，姜宇，刘亚刚，吴皎，等牛病毒性腹泻黏膜病病毒的分子生物学研究进展西南民族大学学报自然科学版，吴明福牛病毒性腹泻病毒全基因克隆及核酸疫苗初步研究沈阳东北农业大学，任敏基因型牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定乌鲁木齐新疆农业大学，刘红亮猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白纳米抗体的筛选及其抗病毒功能的高度不稳定性使更好的适应环境，这也是导致疫苗保护失效和持续性感染的主要原因。本研究成功获得了纳米抗体氨基酸序列，纳米抗体不但可以用于研究蛋白的表达和功能，还可以用于为的检测与预防。纳米抗体具有特异性识别位于病毒表面病毒缝隙甚至被包埋的病毒抗原表位的功能，因此，纳米抗体具有优越于传统抗体的结合能力，从而高效率地并高针对性地靶向目标病毒......”。

4、“.....年张国奇筛选出来针对株的纳米抗体对病毒的复制有阻断效果年丁金花筛选出来针对的纳米抗体均能与病毒发用鼠抗和标记的作为抗，通过检测，初步鉴定纳米抗体克隆与重组蛋白的反应性，结果如图图所示。图中横坐标为单克隆菌落序号，纵坐标为的值，以的值超过对照组倍为阳性样本，进行后续试验。图检测重组纳米抗体与的反应性鼠抗图检测重组纳米抗体与的反应性选取两组均为阳性，且值较高的阳性克隆进行菌液，将结果送至北京华大基因测序，测序结果经序列分析后，得到与驼源的具有较高同源性且与蛋白具有良好反应性的序列条。分别命抗体的大小仅是普通抗体的，且结构稳定分子量小，可以在细胞内表达，借助穿膜肽还可以透过细胞膜，具有开发成为新型抗病毒药物的潜力。目前国内针对纳米抗体相关报道较少，且针对不同抗原蛋白，年，张国奇等筛选出纳米抗体，年丁金花等筛选出蛋白纳米抗体。本试验利用灭活疫苗免疫羊驼......”。

5、“.....构建展示文库，运用蛋白筛选与之稳定结合的纳米抗体，为诊断和防控牛病毒性腹泻奠定基础。材料与方法材料重组质粒由南京德泰生物技术有限公司合成果如图图所示。图中横坐标为单克隆菌落序号，纵坐标为的值，以的值超过对照组倍为阳性样本，进行后续试验。图检测重组纳米抗体与的反应性鼠抗图检测重组纳米抗体与的反应性选取两组均为阳性，且值较高的阳性克隆进行菌液，将结果送至北京华大基因测序，测序结果经序列分析后，得到与驼源的具有较高同源性且与蛋白具有良好反应性的序列条。分别命名为。其中在其区均由典型亲水氨基酸，且在其区均有半胱氨酸，根据文献报道，对半胱氨酸可形成硫键北农业大学，任敏基因型牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定乌鲁木齐新疆农业大学，刘红亮猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白纳米抗体的筛选及其抗病毒功能研究杨凌西北农林科技大学......”。

6、“.....丁金花牛病毒性腹泻病毒纳米抗体生物学特性研究及检测方法的建立石河子石河子大学，丁金花，李启峰，马旭升，等牛病毒性腹泻病毒纳米抗体文库构建与筛选动物医学进展，李文文，刘情，刘亚刚牛病毒性腹泻病毒间接方法的建立中国畜牧兽医，黄美玲牛病毒性腹泻病牛病毒性腹泻病毒蛋白纳米抗体筛选及反应原性检测探究畜牧养殖论文为。其中在其区均由典型亲水氨基酸，且在其区均有半胱氨酸，根据文献报道，对半胱氨酸可形成硫键，稳定纳米抗体抗原结合区的结构。氨基酸序列如图。图特异性纳米抗体氨基酸序列讨论有研究表明，的结构蛋白变异性较大，特别是的变异种类最多。变异的结果通常会导致对宿主细胞以及环境的适应能力更好，生存能力更强，同时这也是导致些疫苗以及药物的功能性丧失的重要原因。由于能诱导机体产生中和抗体，故目前研制的新型疫苗多为针对蛋白......”。

7、“.....吸取连接产物加入感受态细胞，吹打混匀，臵于冰块上静臵，预热水浴锅至。使用计时器在恒温水浴锅内热击，立即转至冰块上静臵。向管中加入无抗性液体培养基，臵于摇床活化。室温条件离心，弃去上清，加入无抗培养基混匀，涂板。图菌液鉴定文库阳性率表蛋白筛选过程中特异性噬菌体富集情况从蛋白第轮筛选后的细菌平板上随机挑取个单克隆，经扩增诱导后，制备可溶性重组纳米抗体粗提物，分别中和病毒的功效。年张国奇筛选出来针对株的纳米抗体对病毒的复制有阻断效果年丁金花筛选出来针对的纳米抗体均能与病毒发生特异性反应，细胞试验结果表明其具有细胞毒性。本试验通过全病毒免疫羊驼，分离全血中的淋巴细胞，提取总，通过两轮扩增，得到目的片段，将其与表达载体连接后，通过噬菌体展示技术，获得噬菌体展示文库。本试验获得的文库库容为，插入率为。经过次淘选......”。

8、“.....使用进行诱导表达。表达产物通过测试反应性，灭活苗购自内蒙古金宇生物技术有限公司羊驼只，饲养于石河子大学兽医院骆驼外周血淋巴细胞提取试剂盒购自载体和均由本实验室保存辅助噬菌体由西北农林科技大学赵钦副教授赠送限制性内切酶和以及连接酶均购自公司分别购自和北京天根生化科技公司购自购自金斯瑞生物科技股份有限公司其他试剂均为进口或国产分析纯。方法蛋白，稳定纳米抗体抗原结合区的结构。氨基酸序列如图。图特异性纳米抗体氨基酸序列讨论有研究表明，的结构蛋白变异性较大，特别是的变异种类最多。变异的结果通常会导致对宿主细胞以及环境的适应能力更好，生存能力更强，同时这也是导致些疫苗以及药物的功能性丧失的重要原因。由于能诱导机体产生中和抗体，故目前研制的新型疫苗多为针对蛋白。基因在不同毒株以及与瘟病毒属各毒株之间高度不稳定。在骆驼科动物体内，除了传统的抗体以外......”。

9、“.....被称作重链抗体。纳蛋白纳米抗体筛选及其功能的初步研究石河子石河子大学，李岩，肖盛中，杨艳，张彦红，蔡卓轩，周子恒，张哲，盛金良牛病毒性腹泻病毒蛋白纳米抗体筛选及反应原性检测畜牧与兽医，基金国家自然科学基金兵团科技发展专项资金。图菌液鉴定文库阳性率表蛋白筛选过程中特异性噬菌体富集情况从蛋白第轮筛选后的细菌平板上随机挑取个单克隆，经扩增诱导后，制备可溶性重组纳米抗体粗提物，分别用鼠抗和标记的作为抗，通过检测，初步鉴定纳米抗体克隆与重组蛋白的反应性，值较高的克隆测序结果显示有个与驼源具有较高同源性且不完全致。本试验获得的的氨基酸序列可通过大量表达纯化后，进行标记，用于致病机理诊断及治疗。参考文献李新培，周伟光，关平原，等牛病毒性腹泻病毒致病机制研究进展中国畜牧兽医，刘梦媛牦牛血清流行病学调查及疫苗和猪瘟疫苗对牦牛的免疫效果武汉华中农业大学......”。