香菇的多。通常制备原生质体单核体时用于涂布的原生质体量多为每毫升个，采用本实验确定的原生质体制备条件，个平板培养的菌丝体可以制备原生质体个，已足够满足实验需求。若研究中需要较多原生质体时，可增加培养的平板数量进行制备。不同食用菌菌株原生质体得率有差液体培养法和平板培养法用量较多，而本方法个平板的用量获得的原生质体数量可以满足大多数实验的需求。从原生质体的数量来看，液体培养法原生质体得率通常可达到每毫升个以上，而本方法和平板培养法则在每毫升个，较液体培养法略少。原生质体收集方面，之前的方法在酶解结束后需经过砂芯漏斗过滤以去除溶液中残留的菌丝，而本方法无需过滤环节，酶解液经离心及重悬后即可。表原生质体制备方法比较导出到不同食用菌原生质体的制备由表可见，种食用菌制备的原生质体的数量均为每毫升与香菇和金针菇样，每个平板制备的原生质体数量在与之间，说明此方法可有效地应用于制备本研究中选择的食用菌菌株的原生质体。表种食用菌原生质体制备情况导出到同行不同小写字母表示差异显著讨论原生质体制备过程中，影响制备胞质遗传的研究，其可作为遗传转化的受体，诱变的对象，也可用于菌株纯化及复壮杂交育种，以及物种间的融合育种等。食用菌遗传育种工作是推动产业持续发展的保障和关键，原生质体制备技术的创新可为食用菌遗传育种工作的开展提供技术支持。中药浅析食用菌原生质体制备新方法中药学论文。对香菇金针菇菌丝的酶解时间及原生质体得率进行曲线拟合，得到的次方程拟合曲线，回归系数分别为和，所获得的拟合曲线的最佳酶解时间分别为。结合的结果可知，采用本方法制备香菇和金针菇原生质体时，接种块数量为酶解时间为可以获得较多原生质体。酶解时间对原生质体再生率和单核率的影响如表所示，酶解时间对原生质体再生率和单核率的影响也较为明显。酶解时间为时，香菇金针菇原生质体再生率分别为与酶中药浅析食用菌原生质体制备新方法中药学论文条件下避光培养，待不同菌落的菌丝相互接触时图，记录各平板的培养天数，原生质体制备其他步骤参照。酶解时间对原生质体得率的影响分别接种个香菇或金针菇菌丝块直径在铺有玻璃纸的平板上，酶解时间设置为，每个处理设次重复，原生质体制备其他步骤参照。摘要建立了种原生质体制备新方法，通过研究接种块数量和酶解时间对香菇和金针菇原生质体制备的影响，对该方法进行了优化并利用该方法制备了糙皮侧耳双孢蘑菇和中国美味蘑菇原生质体。结果表明在铺有玻璃纸的平板直径上分别接种个香菇金针菇菌丝块直径，培养，直接在玻璃纸上进行酶解，酶解时间为，原生质体制备其他步骤参照。图酶解过程中原生质体黑色箭头产生情况结果与分析菌丝酶解在玻璃纸上的菌落表面滴加溶壁酶溶液进行酶解后，显微镜观察发现菌落外围菌丝尖端细胞的细胞壁溶解，释放出球形的原生质体图。随着酶解时间增加，菌丝中部细胞壁逐渐溶解，菌丝断裂，断裂点逐渐增多，菌丝变细，原生质体在菌丝内部形成。中药浅析食用菌原生质体制备新方法中药学论文。培养基再生培养基马铃薯葡萄糖琼脂蔗糖麦芽糖，自然。原生质体制备图直接在玻璃纸上对菌丝进行酶解图香菇菌丝在铺有玻璃纸的平板上的生长情况接种块数量分别是接种个香菇或金针菇菌丝块直径于铺有玻璃纸的平板上，在条件下避光培养，待菌落的菌丝铺有玻璃纸的平板上接种个香菇金针菇菌丝块直径，接种个菌丝块的平板作为对照，每个处理设次重复。在条件下避光培养，待不同菌落的菌丝相互接触时图，记录各平板的培养天数，原生质体制备其他步骤参照。酶解时间对原生质体得率的影响分别接种个香菇或金针菇菌丝块直径在铺有玻璃纸的平板上，酶解时间设置为，每个处理设次重复，原生质体制备其他步骤参照。培养基再生培养基马铃薯葡萄糖琼脂蔗糖麦芽糖，自然。原生质体制备图直接在玻璃纸上对菌丝进行酶解图香菇菌丝在铺有玻璃纸的平板上的生长情况接种块数量分别是接种个香菇或金针菇菌丝块直径于铺有玻璃纸的平板上，在条件下避光培养，待菌落的菌丝相互接触时，无菌操作用摘要建立了种原生质体制备新方法，通过研究接种块数量和酶解时间对香菇和金针菇原生质体制备的影响，对该方法进行了优化并利用该方法制备了糙皮侧耳双孢蘑菇和中国美味蘑菇原生质体。结果表明在铺有玻璃纸的平板直径上分别接种个香菇金针菇菌丝块直径，培养后将带有菌丝体的玻璃纸转移到另个无菌培养皿中，直接在菌丝上滴加∶溶壁酶溶液，酶解，单个平板制备的原生质体数量为个。使用该方法成功地制备了糙皮侧耳双孢蘑菇和中国美味蘑菇原生质体。该方法与常用的原生质体制备方法相比具有制备时间短操作简单和不易污染的优点。关键核化技术在香菇育种中的应用园艺学报，谭琦香菇对称杂交与非对称杂交方法的分子机理及应用研究南京南京农业大学，任轩，贾乐，杨凤苓，等食用菌原生质体融合育种研究进展生物技术通报，韩业君，曹晖，陈明杰，等草菇原生质体制备与再生及诱变效应研究食用菌学报，马跃腾，杜双田，丁建，等秦巴蛹虫草原生质体的制备及再生条件研究西北农林科技大学学报自然科学版，孙露，姚方杰，方明毛木耳原生质体制备与再生条件的研究中国食用菌，张丽，郭成金松茸原生质体制备再生条件优化及释放方式观察浙江农业学报，姜宁，宋春艳，刘建雨，等农杆菌介导香菇菌丝遗传转化体系的研究菌物学报，卢绪志，万佳宁，茅文俊，等金针菇尿嘧啶营养缺陷型菌株的筛选与分子鉴定园艺学报，宋莹，刘俊杰，张敏，等采用原成分会影响菌丝细胞壁的组成及厚薄，由于幼嫩菌丝及其尖端的细胞壁成分相对简单并较薄，通常是最容易酶解并释放原生质体的部位，因此菌丝培养的重点是得到足够数量的幼嫩菌丝及其尖端。笔者将多个菌丝块接种于培养基上，在短时间内提高了幼嫩菌丝在菌丝总量中的占比。在培养基上铺层玻璃纸，是为了更方便转移菌丝，且不携带培养基。进行酶解的培养皿中加入甘露醇溶液，可以使玻璃纸能够与平皿底部更好得贴合。转移后的菌丝用渗透压稳定剂润洗两次，是为了给溶壁酶提供稳定的高渗透压作用环境。在菌丝制备过程中，无需匀浆洗涤过滤等步骤，操作简便高效。溶壁酶渗透压稳定剂的种类以及酶解温度参考前人的方法，通过酶解时间的梯度实验得出结论，酶解最佳时间为，与前人的相比，显著缩短了时间。解时间金针菇和香菇原生质体再生率及单核率导原生质体悬浮液中菌丝残留量检测结果涂布原生质体悬浮液的平板，培养后仍没有菌丝萌发，判定原生质体悬浮液中菌丝残留量为零，因此原生质体悬浮液不需要过滤去除残留菌丝，可以直接涂布使原生质体再生。与常用制备方法的比较结果如表所示，平板培养的菌丝收集时容易携带固体培养基液体培养的菌丝匀浆和接种过程易污染，并且在培养完成后需要通过过滤收集菌丝。本方法培养的菌丝体直接进行酶解，操作步骤少，可显著地缩短时间，加快了原生质体制备的速度。在溶壁酶的用量上，液体培养法和平板培养法用量较多，而本方法个平板的用量获得的原生质体数量可以满足大多数实验的需求。从原生质体的数量来看，液体培养法原生质体得率通常可达到每毫升个以上，而本方，李良敏，章炉军，尚晓冬，宋春艳，于海龙，张美彦，谭琦种食用菌原生质体制备新方法食用菌学报，基金上海市科技兴农项目上海市科委国内合作项目国家现代农业产业技术体系。笔者针对食用菌原生质体制备过程中最为耗时的菌丝制备和酶解环节进行改进，建立了种原生质体制备的新方法，并研究了接种块数量以及酶解时间对香菇和金针菇原生质体制备的影响，对该方法进行了优化，并利用其制备了糙皮侧耳双孢蘑菇和中国美味蘑菇原生质体。材料与方法供试菌株香菇菌株申香金针菇菌株糙皮侧耳菌株新秀号双孢蘑菇菌株和中国美味蘑菇菌株均由上海市农中药浅析食用菌原生质体制备新方法中药学论文生质体单核体杂交技术创新香菇种质资源北方园艺，陈力力，马美湖，周传云，等不同因素对金针菇原生质体制备和再生的影响生物技术，陈文辉，郭照辉，贺月林，等姬松茸原生质体再生条件的优化湖南农业大学学报自然科学版，王杰，林俊芳，云慧芬，等草菇原生质体制备再生及转化研究华南农业大学学报，林稚兰，黄秀梨现代微生物学与实验技术北京科学出版社，王金斌，李文，张俊沛，等草菇原生质体制备再生条件的响应面法优化及诱变效应分子植物育种，邱景芸，廖汉泉，吴月嫦，等介绍种食用菌细胞壁溶解酶中国食用菌，李良敏，章炉军，尚晓冬，宋春艳，于海龙，张美彦，谭琦种食用菌原生质体制备新方法食用菌学报，基金上海市科技兴农项目上海市科委国内合作项目国家现代农业产业技术体系洋，于延申，王月，等食用菌市场发展中的问题与对策建议吉林蔬菜，徐天惠，王镛涛食用菌实验技术第讲原生质体融合实验食用菌，朱朝辉，陈明杰，谭琦，等香菇原生质体单核体的再生与交配型的关系食用菌学报，张美彦，谭琦，陈明杰，等香菇菌株特异标记在其原生质体单核中的分布菌物学报，刘建雨，徐珍，张丹，等农杆菌介导法转化金针菇不同受体的效率比较食用菌学报，王丽宁，赵妍，张宝粉，等利用原生质体紫外诱变技术选育耐高温香菇菌株微生物学通报，樊晓琳，叶绿笋，边银丙双孢蘑菇菌株的提纯复壮食用菌学报，潘迎捷，张树庭单核原生质体在食用菌遗传育种上的应用食用菌，潘迎捷，陈明杰，汪昭月，等香菇菌丝原生质体的分离与培养上海农业学报，谭琦，潘迎捷，汪昭月，等原生质体单食用菌学报，潘迎捷，张树庭单核原生质体在食用菌遗传育种上的应用食用菌，潘迎捷，陈明杰，汪昭月，等香菇菌丝原生质体的分离与培养上海农业学报，谭琦，潘迎捷，汪昭月，等原生质体单核化技术在香菇育种中的应用园艺学报，谭琦香菇对称杂交与非对称杂交方法的分子机理及应用研究南京南京农业大学，