1、“.....基金吉林省教育厅基金资助课题吉林省卫生与健康技术创新项目年国家级大学生创新创业训练计划。材料和方法主要试剂与仪器真核表达载体和由时结果差异较大。而转染效率越高,后续的实验结果也会更好,并且瞬时转染的转染效率越高,后续筛选时获得阳性克隆的概率越大。所以在不损伤细胞的情况下,目的基因较大时,脂质体用量可以适当增加。后续研究可以针对不同的细胞对脂质体转染是否有影响,以及确定多大量的脂质体会对细胞产生毒害作用。图流式细胞仪检测转染效率空白对照探讨脂质体转染效率与目的基因大小的关联性遗传工程论文率越高,后续获得阳性克隆的概率越大。本研究选用连接在相同载体上启动子相同而目的基因大小不等的两种真核表达载体和,梯度设置脂质体用量......”。
2、“.....和均表达荧光,便于实验的观察和检测。构建的载体中,大小为,大小为,大小为,可以知道检测,检测结果显示,和在质粒用量为脂质体用量为时,转染效率依次上升每个浓度梯度,的转染效率均大于的转染效率。结果见图。次检测结果取算数平均数,在质粒用量为脂质体用量为时,转染效率分别为在质粒用量为脂质体用量为时,转染效率分别为。经统计学分析,数据具有统计学意义。遗传工程论文。摘要目的研究使用脂质体转染时目的基因大小对转染效率影响。方法将大小差异显著的目的基因连接到同载体,脂质体转染法分别将上述两种目的基因转染至细胞,转染完成后,应用倒置荧光显微镜和流式细胞仪分析转染效率,检测目的基因的大小对转染效率的影响。结果转染效率均随着脂质体用量增加而上升,无论脂质体浓度如何选择......”。
3、“.....转染前消化细胞至孔板,保证转染时细胞密度达到。消化后细胞分为两组,每组个孔,组转染,另组转染。脂质体每个孔用量按梯度设置为,两种质粒每个孔的用量均为。按照说明书混合完转染试剂和质粒后,室温孵育。孵育时用溶液清洗细胞,去除残留的血清。清洗完成后测质粒的浓度和纯度,按照试剂要求,取浓度在的质粒备用。结果质粒提质量检测结果质粒使用美国进行检测,质粒在处有最高峰,浓度为,为,为浓度为,为,为。时,即可说明无蛋白质污染,时,即可说明无醇和盐的残留,则流式细胞仪分析转染效率,检测目的基因的大小对转染效率的影响。结果转染效率均随着脂质体用量增加而上升,无论脂质体浓度如何选择,两种真核表达载体的转染效率均有显著性差异,且目的基因越大,转染效率越低......”。
4、“.....转染及转染效率检测转染使用细胞为细胞,转染前消化细胞至孔板,保证转染时细胞密度达到。消化后在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其离子通道特性吉林大学学报医学版,郑锴,朱杭飞,王长文,等在细胞中的表达及其对碘离子敏感特性的研究中国兽医杂志,方芳,陈忠航,张宸豪,等诱导细胞分化对基因表达的影响吉林医药学院学报,丁旭,郭佳琦,张嘉琪,解宇浩,徐连秀,狄文慧,聂文营,郝峰目的基因大小对脂质体用量如何,目的基因大小影响用脂质体转染时的效率,且目的基因越大,转染效率越低。研究结果对于今后脂质体转染工作具有指导作用,脂质体转染试剂说明书并没有考虑到目的基因的大小,而不同大小的目的基因使用脂质体转染时结果差异较大。而转染效率越高,后续的实验结果也会更好......”。
5、“.....后续筛选时获得阳性克隆的概率越大。所以探讨脂质体转染效率与目的基因大小的关联性遗传工程论文浓度符合实验要求。探讨脂质体转染效率与目的基因大小的关联性遗传工程论文。质粒提取与质量检测取已转化完成的大肠杆菌接入的培养基,过夜培养,按照质粒小提取试剂盒说明书裂解细菌提取质粒。提取完成后,用检测质粒的浓度和纯度,按照试剂要求,取浓度在的质粒备培养箱孵育。后检测细胞是否表达目的基因,先在荧光显微镜下观察细胞表达荧光情况,充分消化细胞,利用流式细胞仪检测表达荧光的细胞数量和细胞总数的比值,实验重复次,数据取平均值。质粒提取与质量检测取已转化完成的大肠杆菌接入的培养基,过夜培养,按照质粒小提取试剂盒说明书裂解细菌提取质粒。提取完成后,用单且不需要特殊仪器设备而被广泛接受......”。
6、“.....转染时,不管实际使用的载体如何,转染试剂说明书给出的方法都是相同的,但是实际操作时,不同的目的基因转染时的效率不同。而转染效率越高,后续获得阳性克隆的概率越大。本研究选用连接在相同载体上启动子相同而目的基因大小不等的两种真核表达载体胞分为两组,每组个孔,组转染,另组转染。脂质体每个孔用量按梯度设置为,两种质粒每个孔的用量均为。按照说明书混合完转染试剂和质粒后,室温孵育。孵育时用溶液清洗细胞,去除残留的血清。清洗完成后,每个孔中加入完全培养液。脂质体质粒混合溶液孵育完成后,向每个孔逐滴加入混合溶液,摇匀后放入转染效率影响的研究吉林医药学院学报,基金吉林省教育厅基金资助课题吉林省卫生与健康技术创新项目年国家级大学生创新创业训练计划......”。
7、“.....方法将大小差异显著的目的基因连接到同载体,脂质体转染法分别将上述两种目的基因转染至细胞,转染完成后,应用倒置荧光显微镜不损伤细胞的情况下,目的基因较大时,脂质体用量可以适当增加。后续研究可以针对不同的细胞对脂质体转染是否有影响,以及确定多大量的脂质体会对细胞产生毒害作用。图流式细胞仪检测转染效率空白对照转染效率检测脂质体用量转染效率检测脂质体用量从参考文献郝峰,王皓,许会静,等和,梯度设置脂质体用量,选取易于转染的细胞进行研究。和均表达荧光,便于实验的观察和检测。构建的载体中,大小为,大小为,大小为,可以知道大小显著大于,在相同实验条件下检测得的转染效率高于的转染效率。因此,本研究证实......”。
8、“.....结果见图。次检测结果取算数平均数,在质粒用量为脂质体用量为时,转染效率分别为在质粒用量为脂质体用量为时,转染效率分别为。经统计学分析,数据具有统计学意义。证实脂质体用量越大,转染效率越高,且目的基因大小影响用脂质体转染时的效率,目的基因越大,转染效率越低。讨论脂质体转染因操作实验室前期构建并完成转化所用引物由南京诺唯赞公司合成脂质体购自公司质粒提取试剂盒购自北京全式金公司营养培养基购自公司血清购自公司细胞由本实验室保存。探讨脂质体转染效率与目的基因大小的关联性遗传工程论文。图倒置荧光显微镜观测转染染效率检测脂质体用量转染效率检测脂质体用量从参考文献郝峰,王皓,许会静......”。
9、“.....郑锴,朱杭飞,王长文,等在细胞中的表达及其对碘离子敏感特性的研究中国兽医杂志,方芳,陈忠航,张宸豪,等诱导细胞分大小显著大于,在相同实验条件下检测得的转染效率高于的转染效率。因此,本研究证实,无论脂质体用量如何,目的基因大小影响用脂质体转染时的效率,且目的基因越大,转染效率越低。研究结果对于今后脂质体转染工作具有指导作用,脂质体转染试剂说明书并没有考虑到目的基因的大小,而不同大小的目的基因使用脂质体转实脂质体用量越大,转染效率越高,且目的基因大小影响用脂质体转染时的效率,目的基因越大,转染效率越低。讨论脂质体转染因操作简单且不需要特殊仪器设备而被广泛接受,目的基因的大小被认为对转染效率有较明显的影响。转染时,不管实际使用的载体如何......”。
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