1、“.....冰上裂解，将液体转移至离心管中下离心，转移上清到离心管中加入，下旋转孵育后收集上清，用洗液，值为的清洗次，加入洗脱液，稀释比例为∶下洗脱，收集第次洗脱样品再次加入洗脱液，下过夜，洗脱后收集第次洗脱样品将次所得的纯化蛋白进行聚丙烯酰胺细胞贴壁生长吸弃培养基，加入新鲜培养基，加入转染试剂病毒基因组，转染试剂，边滴加边摇匀，条件下培养杆状病毒的收取扩增及滴度的测定转染后，收集上清为第代杆状病毒，避光保存在冰箱中由于转染所得到的病毒滴度较低，不能高效表达目的蛋白，因此要进行杆状病毒扩增，以增加病毒的滴度用第代杆状病毒分别在平皿和培养瓶中继续感染细胞，扩增杆状病毒，使其滴度逐步提高但过高的感染浓度可能会产生不完整的目的蛋白，因此通过调整感染比例∶∶∶∶和感染时间得到病毒表达蛋白论的磷酸化修饰在降低驱动蛋白的酶活性方面的作用遗传工程论文......”。

2、“.....过夜培养，提取杆状病毒基因组杆状病毒基因组提取将菌液转移到离心管中，离心，真空吸干上清，加入的含有重悬沉淀，混匀后加入的，室温孵育加入醋酸钾浓度为，值为，轻轻混匀，蛋白形成白色沉淀冰上放臵后离心，将上清转移到含有异丙醇的离心管中混匀，冰上放臵离心，弃去上清后加入的乙醇，室温下昆虫细胞，本实验室自存质粒为本实验室前期构建感受态细胞抗体磷酸化抗体均为实验室自制试剂和，美国公司琼脂糖凝胶回收试剂盒，北京康为世纪生物科技有限公司和工具酶试剂，美国锤体微管动力学和染色体振幅起着重要调控作用，与其他驱动蛋白分子相同，蛋白由个功能域组成端的马达结构域中央卷曲螺旋杆状结构域和端货物分子结合结构域利用水解释放的能量可以沿着微管向正极末端移动，由于其末端存在另个微管结合位点，因此能够稳定运动到微管正极末端并聚集......”。

3、“.....有丝分裂关键蛋白激酶可对的和氨基酸位点进行磷酸化修饰，使得摘要为了探究真核细胞中蛋白激酶的磷酸化修饰对驱动蛋白分子的酶活性的影响，利用昆虫杆状病毒表达系统，在体外表达并纯化模拟磷酸化和非磷酸化的突变体蛋白，首先构建驱动蛋白的杆状病毒表达载体质粒或，将其转化到感受态细胞中，通过蓝白斑筛选得到阳性克隆随后提取杆状病毒基因组，转染昆虫细胞后得到能够表达突变体蛋白的杆状病毒扩增病毒后，对病毒感染细胞表达目的蛋白的条件进行优化，进行了酶活性的测定，但是由于原核细胞表达的蛋白可能不具有正常的蛋白构象，因而实验结果仍需进步验证本研究利用杆状病毒昆虫细胞表达系统获得了目的蛋白，这种真核表达系统能够使目的蛋白的免疫原性酶活性等与天然蛋白的生物活性基本相同体外实验结果显示蛋白的酶活性低于蛋白的酶活性......”。

4、“.....进而影响其在微管上的运动能力，使其无法及时到达微管末端并控制最处的吸光度值从而得到磷酸根的量通过磷酸根的物质的量及其对应的吸光度值，得到磷酸根的标准曲线，如图所示图微管体外合成图磷酸根标准曲线利用纯化得到的目的蛋白和体外合成的微管，进行酶活性检测根据加入目的蛋白后磷酸根的吸光度值，由磷酸根标准曲线计算出突变体蛋白水解的量，得到突变体蛋白的酶活性，结果如图所示图和的酶活性检测由图可以看出，非磷酸化的的酶活性进入平台期后数值均为，模拟磷酸化后的酶抗体识别，蛋白可以被特异性抗和位点磷酸化的抗体所识别，蛋白不能被这些磷酸化抗体识别表明蛋白可以很好地模拟磷酸化的蛋白，而蛋白模拟了非磷酸化的蛋白随后利用纯化上述蛋白，纯化后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，考马斯亮蓝染色后脱色，观察目的蛋白的纯化效果，结果如图所示纯化得到的和蛋白浓度分别为图和的蛋白纯化微管体外合成作为种驱动蛋白......”。

5、“.....杆状病毒在细胞中进行组装和增殖当细胞中的病毒过多时，杆状病毒就会从细胞中释放，进步感染其他的细胞但病毒扩增到定程度后，可能会表达不完整的蛋白，因此需要优化突变体蛋白表达的病毒感染条件以杆状病毒为例进行优化过程的描述通过设臵连续梯度的感染比例∶，∶，∶，∶感染细胞进行蛋白表达，在表达时间致的情况下，可以得到杆状病毒的最佳感染比例为∶，如图所示，在此感染比例下未出现杂蛋白如果无论何种论的磷酸化修饰在降低驱动蛋白的酶活性方面的作用遗传工程论文薄中期板形成的时间磷酸化修饰调节的酶活性的机制仍不清楚，是通过影响的结构还是与其他蛋白的结合能力，仍需继续深入探索苏春玉，周之春，朱长军磷酸化修饰对驱动蛋白的酶活性的影响天津师范大学学报自然科学版......”。

6、“.....在细胞有丝分裂早期被有丝分裂蛋白激酶磷酸化，这种修饰可以被磷酸酶去磷酸化，当无法被去磷酸化时，细胞有丝分裂过程就无法形成最薄中期板这可能是因为磷酸化的无法到达微管正极末端，从而无法降低微管的动态不稳定性同时被磷酸化后不影响中板集合的时间，但会延迟最薄中期板形成的时间，这可能是因为的磷酸化修饰影响了的运动能力虽然覿等应用细菌表达的泳前面的条带为和质粒长度为，与进行比对，位臵正确图酶切种质粒后的琼脂糖凝胶电泳检测通过琼脂糖凝胶回收试剂盒得到和的线性，电泳结果如图所示图胶回收后种质粒的琼脂糖凝胶电泳图通过连接酶过夜连接，连接产物全部转化感受态细胞，过夜培养......”。

7、“.....液体培养通过小提质粒试剂盒提取质粒质粒经活性平台期数值约为，即蛋白的酶活性低于蛋白的酶活性，表明对的磷酸化修饰降低了的酶活性讨论与结论家族在整个真核细胞有丝分裂过程中对于微管长度的控制具有重要作用作为家族中的员，在微管正极末端的作用存在争议体外实验发现能够作为微管解聚酶使微管的稳定结构解聚，但也有研究表明，不具有内在的解聚酶活性，而是通过阻止微管蛋白加到微管末端，进而阻止了微管的聚合和解聚对细胞周期中的染色体整列有很大微管向正极末端移动要发挥酶活性，需要微管参与，因此必须进行体外微管合成微管蛋白在存在下倾向于聚合，但聚合的微管并不稳定，所以在合成微管的过程中加入过聚合，合成了相对独立的微管，如图所示，在荧光显微镜下观察，可以看到发出绿色荧光的微管酶活性检测沿微管向正极移动会水解，形成和磷酸根，且每水解分子会生成分子磷酸根......”。

8、“.....因此可以利用分光光度计测量感染比例都出现很多杂蛋白，则用∶的感染比例感染细胞，分别在收取细胞，通过验证，得到蛋白的最佳表达时间为，如图所示最终得到的最佳感染比例为∶，的最佳感染比例为∶，最佳表达时间均为蛋白质的表达及纯化按照种杆状病毒表达目的蛋白的最优条件感染细胞，收取细胞后通过蛋白印迹杂交实验验证所感染的细胞大量表达了目的蛋白，结果如图所示图杆状病毒条件优化图杆状病毒表达蛋白的鉴定由图可以看出，细胞表达的蛋白可以被特异性鼠抗和兔抗过测序后与公布的序列进行比对验证杆状病毒基因组的制备及验证将质粒分别转化至感受态细胞中，挑取白色克隆过夜培养，提取杆状病毒基因组当目的基因插入到杆状病毒基因组中，如图所示，会得到含有目的基因的重组杆状病毒基因组使用转座位点上游存在的上游引物和目的片段中设计的下游引物进行......”。

9、“.....条带大小与理论值相符，证明确实发生了转座，获得了重组杆状病毒的基因组图重组杆状病毒基因组的验论的磷酸化修饰在降低驱动蛋白的酶活性方面的作用遗传工程论文白对照的，根据磷酸根标准曲线计算出差值对应的磷酸根的物质的量用加入后的磷酸根物质的量减去加入前的数值，得到目的蛋白水解产生的磷酸根物质的量，分别根据种蛋白对应的磷酸根物质的量绘制酶活性曲线结果与分析质粒和的构建与鉴定用和双酶切质粒后进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图所示空质粒大约为，长度为，因此电凝胶电泳，考马斯亮蓝染色后进行脱色，观察蛋白纯化的效果体外微管合成根据微管合成试剂盒说明书合成微管取份分装好的微管蛋白和体积比为∶，迅速加入等量水浴合成后，取滴片，镜下观察微管合成情况，室温保存合成的微管突变体蛋白的酶活性测定首先根据说的最佳条件突变体蛋白的表达和纯化在锥形瓶中接种细胞，细胞密度为......”。