够牢固，在反应过程中酶分子容易脱落，。交联法指的是利用双功能或多功能，考察温度对脂肪酶吸附实验的影响，称取的大孔吸附树脂加入塑料管中，分别放在的摇床中吸附定时间，吸附结束后取出抽滤烘干，测定酶活力。吸附时间优化固定其他条件不变，考察吸附时间对脂肪酶吸附实验的影响，称取的大孔吸附树脂加入塑料管中，分别吸附后抽滤烘干，测定酶活力。摘要以大孔吸附树脂为载体，新戊醇缩水甘油醚为交联剂固定化海洋脂肪酶，并探究所制备的固定化酶的酶学性质。在温度交联质量分数时间的最佳交联条件下，采用单因素试验和正交试验优化吸附条件并对激烈，容易造成酶活力失活，因此通常选择把交联法放在吸附法之后，以减少交联对酶的损害。但是吸附交联法降低了交联程度，导致所制备的固定化酶在反应过程中酶分子容易脱落。目前，先交联后吸附法固定化生物酶的相关报道较少，本实验室曾对基于无机载体硅藻土的先交联后吸附的固定化方法进行探究，所制备固定化脂肪酶的酶活力为，酶活力回收率为。该固定化酶比游离脂肪酶具有更好的温度稳定性稳定性和良好的储存稳定性，在保存依然保持以上的酶活力连续操作次依然保持以上的酶活性。先交联后吸关于交联剂固定化海洋脂肪酶研究及其酶学性质鉴定生物工程论文重复利用等诸多缺陷，。为了解决这些问题，酶的固定化技术被提出。常见的酶固定化方法有吸附法交联法包埋法和共价结合法。这种固定化方法各有其优缺点。吸附法利用载体和酶分子之间产生的弱作用力相互吸引而联结在起，但是弱作用力的结合不够牢固，在反应过程中酶分子容易脱落，。交联法指的是利用双功能或多功能试剂，使试剂与酶分子酶分子之间或者试剂与载体形成共价键从而将酶分子固定起来，交联反应所形成的共价键比较稳定，但是交联过程又容易造成酶活力损失。包埋法是利用高分子聚合物将酶包裹起来用改进铜皂分光光度法。固定化酶的酶活力测定方法与游离酶的测定相同，只需将游离酶换成适量的固定化酶。摘要以大孔吸附树脂为载体，新戊醇缩水甘油醚为交联剂固定化海洋脂肪酶，并探究所制备的固定化酶的酶学性质。在温度交联质量分数时间的最佳交联条件下，采用单因素试验和正交试验优化吸附条件并对固定化酶的酶学性质进行鉴定。结果表明最佳吸附条件为温度，载体量，吸附。该条件下酶活力达，酶活力回收率为对比游离酶和固定化酶，其稳定性基本致，但是固定化酶的最适反应温度提质鉴定生物工程论文。大孔吸附树脂是种不含交换基团具有大孔结构的有机高聚物吸附剂，与硅藻土和蒙脱土等无机材料类似，也是利用弱作用力吸附酶分子。同时，大孔吸附树脂具有网状结构和比较大的比表面积，而且稳定性好。为了进步验证先交联后吸附固定化法，本实验以大孔吸附树脂为载体进行系统固定化探究，通过先交联后吸附法固定化海洋来源脂肪酶。材料与方法材料与仪器材料海洋假丝酵母脂肪酶上海鼓臣生物有限公司大孔吸附树脂郑州和成新材料科技有限公司聚乙烯醇天津市大茂化学试剂厂吸附载体量优化吸附载体量优化结果如图所示。结果表明最适载体量为，相对酶活力随着载体量增加而降低。可能原因是在相同酶量的反应体系中，随着载体量增加单位体积的载体所吸附的酶量变少，酶活力降低。因此选择作为后续载体的量。吸附温度优化吸附温度优化结果如图所示。结果表明随着吸附温度逐渐升高，相对酶活力也逐渐升高，在时达到最高，之后随着温度升高相对酶活力开始下降。这可能是因为温度逐渐升高时，酶分子的热运动也逐渐变快，吸附速度加快，吸附量增加但是过高的温度会使酶分子从载只能操作次，固定化酶的操作稳定性比游离酶大幅度提高。热耐受性将固定化酶和游离酶分别在的环境中放臵，保持两者其他处理条件致，后将固定化酶和游离酶取出并测定酶活力。根据酶活力绘制两者相对酶活力曲线，比较两者对热的耐受性。操作稳定性将制备好的固定化酶抽滤烘干，称取，在下连续反应次，以第次反应的酶活力为，探究该固定化酶的操作稳定性。储存稳定性制备定量的固定化酶并将其储存于冰箱，每隔定时间取出适量，测定其酶活力，以第次所测酶活力为，直测到储存，探究固定化酶的储存对热的耐受性。操作稳定性将制备好的固定化酶抽滤烘干，称取，在下连续反应次，以第次反应的酶活力为，探究该固定化酶的操作稳定性。储存稳定性制备定量的固定化酶并将其储存于冰箱，每隔定时间取出适量，测定其酶活力，以第次所测酶活力为，直测到储存，探究固定化酶的储存稳定性。结果与分析吸附实验结果吸附载体的筛选种大孔吸附树脂筛选结果如图所示。结果表明大孔吸附树脂的吸附效果最好。是非极性大孔吸附树脂，其比表面积平均孔径。比表面积比较大，能够吸附更酶活力降低。因此选择作为后续载体的量。吸附温度优化吸附温度优化结果如图所示。结果表明随着吸附温度逐渐升高，相对酶活力也逐渐升高，在时达到最高，之后随着温度升高相对酶活力开始下降。这可能是因为温度逐渐升高时，酶分子的热运动也逐渐变快，吸附速度加快，吸附量增加但是过高的温度会使酶分子从载体上脱落，甚至使酶蛋白质变性。所以当温度升高到之后，酶活力下降。因此选择作为后续实验温度。吸附时间优化吸附时间优化结果如图所示。结果表明在吸附时相对酶活力达到最高，之后随固定化探究，通过先交联后吸附法固定化海洋来源脂肪酶。材料与方法材料与仪器材料海洋假丝酵母脂肪酶上海鼓臣生物有限公司大孔吸附树脂郑州和成新材料科技有限公司聚乙烯醇天津市大茂化学试剂厂无水乙醇异辛烷天津市津东天正精细化学试剂厂新戊醇缩水甘油醚橄榄油上海麦克林生化科技有限公司。仪器酸度计德国公司型离心机公司移液枪吉尔森公司型恒温摇床上海实维实验仪器技术有限关于交联剂固定化海洋脂肪酶研究及其酶学性质鉴定生物工程论文定性。结果与分析吸附实验结果吸附载体的筛选种大孔吸附树脂筛选结果如图所示。结果表明大孔吸附树脂的吸附效果最好。是非极性大孔吸附树脂，其比表面积平均孔径。比表面积比较大，能够吸附更多的酶分子其平均孔径介于其他大孔吸附树脂之间，有可能刚好与交联后的脂肪酶体积相匹配，既不会因为孔径太小导致酶吸附量少，又避免孔径过大导致吸附不牢固。本实验优选大孔吸附树脂为后续固定化实验的载体。关于交联剂固定化海洋脂肪酶研究及其酶学性质鉴定生物工程论文相对酶活力低于游离酶，但固定化酶在，温度稳定性明显高于游离酶。这可能是因为游离酶暴露在高于的高温条件下，酶蛋白结构受热发生改变而固定化酶在固定化载体的保护下定程度上减弱高温环境的损害，因此温度稳定性比游离酶好。而且，游离酶在温度超过后，酶活力急剧下降，在时只剩余，而固定化酶在时还能保留约的酶活力。因此进步说明固定化酶的热稳定性明显优于游离酶。操作稳定性固定化酶的操作稳定性结果如图所示。结果表明固定化脂肪酶连续反应操作次后仍保留的酶活力，相比于游离酶海洋来源脂肪酶，所制备固定化酶的酶活力为，酶活力回收率为童晓倩等通过包埋法和交联法固定化风味酶，酶活力回收率为。在吸附法和交联法的结合应用过程中，科研人员认为交联过程的反应较为激烈，容易造成酶活力失活，因此通常选择把交联法放在吸附法之后，以减少交联对酶的损害。但是吸附交联法降低了交联程度，导致所制备的固定化酶在反应过程中酶分子容易脱落。目前，先交联后吸附法固定化生物酶的相关报道较少，本实验室曾对基于无机载体硅藻土的先交联后吸附的固定化方法进行探究，所制备固定化脂多的酶分子其平均孔径介于其他大孔吸附树脂之间，有可能刚好与交联后的脂肪酶体积相匹配，既不会因为孔径太小导致酶吸附量少，又避免孔径过大导致吸附不牢固。本实验优选大孔吸附树脂为后续固定化实验的载体。最适反应温度固定化酶和游离酶的最适反应温度如图所示。结果表明游离酶最适反应温度为，固定化酶的最适反应温度为，比游离酶提高。由此可见，本实验制备的固定化酶比游离酶最适反应温度大幅度提高。热耐受性固定化酶和游离酶的热耐受性结果如图所示。结果表明在，固定化酶吸附时间延长酶活力下降。可能原因是在吸附后，大孔吸附树脂已经吸附酶分子饱和，之后随着吸附继续进行，载体孔隙堵塞，造成酶促反应时酶分子不能充分展开。图固定化条件对吸附效果的影响注，所得数据为个平行实验均值，误差计算方法是计算个平行实验的标准差。关于交联剂固定化海洋脂肪酶研究及其酶学性质鉴定生物工程论文。热耐受性将固定化酶和游离酶分别在的环境中放臵，保持两者其他处理条件致，后将固定化酶和游离酶取出并测定酶活力。根据酶活力绘制两者相对酶活力曲线，比较两公司涡旋振荡器水浴锅电热鼓风箱上海恒科学仪器有限公司型超声破碎仪超声清洗仪宁波新芝生物公司。酶活力的测定脂肪酶活力的测定酶活力的测定游离酶的酶活力测定采用改进铜皂分光光度法。固定化酶的酶活力测定方法与游离酶的测定相同，只需将游离酶换成适量的固定化酶。吸附载体量优化吸附载体量优化结果如图所示。结果表明最适载体量为，相对酶活力随着载体量增加而降低。可能原因是在相同酶量的反应体系中，随着载体量增加单位体积的载体所吸附的酶量变少肪酶的酶活力为，酶活力回收率为。该固定化酶比游离脂肪酶具有更好的温度稳定性稳定性和良好的储存稳定性，在保存依然保持以上的酶活力连续操作次依然保持以上的酶活性。先交联后吸附固定化脂肪酶的工艺研究仍值得进步探究。大孔吸附树脂是种不含交换基团具有大孔结构的有机高聚物吸附剂，与硅藻土和蒙脱土等无机材料类似，也是利用弱作用力吸附酶分子。同时，大孔吸附树脂具有网状结构和比较大的比表面积，而且稳定性好。为了进步验证先交联后吸附固定化法，本实验以大孔吸附树脂为载体进行系关于交联剂固定化海洋脂