1、“.....本研究原核表达纯化经热力学优化的，突变体，并检测其酶活性，旨在进步开发种较为经济的，来源。材料与方法质粒及菌株含，突变基因的质粒由长春生物制品研究所生物技术研究室迟春萍研究员提供，由其完成突变基因展重点项目。论，突变体的酶活性测定与原核表达纯化生物化学论文。纯化产物的鉴定初步纯化产物经分析，纯度为，见图经检测，比活为。图表达产物的分析蛋白质未诱导的重组菌诱导的重组菌全菌体。根据所含金属辅基的不同，分为铜锌超氧化物歧化酶，及，其中，论，突变体的酶活性测定与原核表达纯化生物化学论文啶诱导糖尿病大鼠的降血糖作用中国食品学报，陈佳，杨晓龙，张旭峰细胞外超氧化物歧化酶甲基化对动脉粥样硬化的诱导作用及作用靶点中国现代医学杂志，谢先龙，吴艳霞，吴婷玉，等老年血管性痴呆患者认知功能与血清和水平的关系中国实用神经疾病杂志......”。

2、“.....孙冶，肖纯凌表达人源的毕赤酵母重组子的构建中国医科大学报，的理性设计及热稳定研究山东曲阜提高酶分子亚基结合的稳定性及酶蛋白的热稳定性，成功构建了可表达具有酶活性的该突变体的大肠埃希菌工程菌株。通过及酶活性电泳确定了目的蛋白主要以可溶性方式表达，根据菌体生长曲线及加入离子浓度的优化，确定在培养至左右，至左右时加入，可获得最高表达量。经初步层析纯化获得纯度为，比活为的，。本研究表达的，对重组蛋白表达量的影响图摇瓶中工程菌的生长曲线图初步纯化产物的分析蛋白质诱导表达的全菌体初步纯化产物。讨论大肠埃希菌表达系统原核表达系统由于其遗传学生物化学和分子生物学方面已充分被了解而成为表达异源蛋白质的首选表达系统。大肠埃希菌遗传图谱明确，易培养且费用低，对许多蛋白质有很强的耐受能力，能高水平地表达这些蛋白质......”。

3、“.....每小时取培养液检测菌体密度，绘制生长曲线，确定添加诱导剂的时间及诱导时间。诱导表达时加入不同剂量的酶所需要的金属离子金属离子对工程菌细胞具有定毒性，见表，检测目的蛋白表达量，确定最佳添加剂量。表达产物的初步纯化及活性测定将诱导表达后的菌液，离心收集菌体沉淀，用等体积的溶液重悬，表达质粒的双酶切产物未酶切的重组表达质粒。论，突变体的酶活性测定与原核表达纯化生物化学论文。重组表达质粒的构建用和双酶切经测序确认正确的产物和载体，回收目的基因片段和载体片段，以连接酶连接，获得重组表达质粒，转化感受态，提取质粒，双酶切鉴定，测序后进行分析。重组蛋白的诱导表达及纯化，平衡液为的，洗脱液为氯化钠溶液，获得，初步纯化产物，利用，活性检测试剂盒测定其酶活性......”。

4、“.....回收目的基因片段和载体片段，以连接酶连接，获得重组表达质粒，转化感受态，提取质粒，双酶切鉴定，测序新，陈晓耘异亮氨酸热分解机理的研究湖北工学院学报唐剑光，张健锋，常东英，曹玉锋，乔宏雷，高洪喜，迟春萍种铜锌超氧化物歧化酶突变体的原核表达纯化及酶活性测定中国生物制品学杂志，基金吉林省科学技术发展重点项目。论，突变体的酶活性测定与原核表达纯化生物化学论文。重组蛋白诱导表达条件的优化将工程菌株接种于摇瓶中培养，每小时取培了基础，但其与天然，在功能以及安全性方面的差异还需进步的研究及验证。参考文献郭笑，苑广信，王曼力，等番茄超氧化物歧化酶的生物信息学分析北方园艺，赵丹，蔡丽萍，傅婷，等非酶促糖基化对氧嘧啶诱导糖尿病大鼠的降血糖作用中国食品学报，陈佳，杨晓龙......”。

5、“.....谢先龙论，突变体的酶活性测定与原核表达纯化生物化学论文可溶性分析将阳性重组表达质粒转化入感受态中，制备重组工程菌株，按接种量接种于含卡那霉素的培养基中振荡培养至约为时，加入终浓度为，继续诱导培养。离心收集菌体，用水重悬后沸煮法裂解菌体，离心，分别收集上清及沉淀，进行分析，并通过活性电泳对表达蛋白进行鉴别确证，以未诱导表达的工程菌为对蛋白进行鉴别确证，以未诱导表达的工程菌为对照。重组表达质粒的鉴定重组表达质粒的双酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分析，可见约的目的基因片段，见图。经测序及分析，片段大小与目的片段核苷酸序列致，表明重组表达质粒构建正确。图重组表达质粒的双酶切鉴定重组缺乏表达后的蛋白质修饰，如蛋白质的糖基化，从而影响部分蛋白质结构的形成以及性质......”。

6、“.....将第位亮氨酸残基突变为异亮氨酸残基，第位亮氨酸残基替换为谷氨酰胺残基，以提高酶分子亚基结合的稳定性及酶蛋白的热稳定性，成功构建了可表达具有酶活性的该突变体的大肠埃希菌工程菌株。通过及酶活性电泳确定了目后进行分析。重组蛋白的诱导表达及可溶性分析将阳性重组表达质粒转化入感受态中，制备重组工程菌株，按接种量接种于含卡那霉素的培养基中振荡培养至约为时，加入终浓度为，继续诱导培养。离心收集菌体，用水重悬后沸煮法裂解菌体，离心，分别收集上清及沉淀，进行分析，并通过活性电泳对表达液检测菌体密度，绘制生长曲线，确定添加诱导剂的时间及诱导时间。诱导表达时加入不同剂量的酶所需要的金属离子金属离子对工程菌细胞具有定毒性，见表，检测目的蛋白表达量，确定最佳添加剂量。表达产物的初步纯化及活性测定将诱导表达后的菌液......”。

7、“.....高压匀质破碎菌体，离心，收集上清液，经阴离子交换介质，吴艳霞，吴婷玉，等老年血管性痴呆患者认知功能与血清和水平的关系中国实用神经疾病杂志，李新鸣，孙冶，肖纯凌表达人源的毕赤酵母重组子的构建中国医科大学报，的理性设计及热稳定研究山东曲阜曲阜师范大学，魏贝贝基于分子动力学分析的的热稳定性研究山东曲阜曲阜师范大学，张龙翔，张庭芳，李令媛生化实验方法和技术版北京高等教育出版社，胡立的蛋白主要以可溶性方式表达，根据菌体生长曲线及加入离子浓度的优化，确定在培养至左右，至左右时加入，可获得最高表达量。经初步层析纯化获得纯度为，比活为的，。本研究表达的，突变体在原核表达系统中具有较好的酶活性，且该突变体经过了热力学优化突变，具有潜在的应用价值，也为进步摸索大规模发酵生产工艺及该酶突变体的实际应用奠定论......”。

8、“.....大肠埃希菌遗传图谱明确，易培养且费用低，对许多蛋白质有很强的耐受能力，能高水平地表达这些蛋白质，而且较以哺乳动物细胞及酵母细胞为代表的真核表达系统，具有更容易获得工程菌株工程菌株繁殖快速培养液细胞密度高目的蛋白产量高易纯化等优点。但大肠埃希菌表达系统表达的蛋白质的设计及合成为参照中番茄中介绍的序列，通过热力学分析，将第位亮氨酸残基突变为异亮氨酸残基，第位亮氨酸残基替换为谷氨酰胺残基，以提高其亚基结合的稳定性及酶蛋白的热稳定性载体和感受态均购自日本公司。纯化产物的鉴定初步纯化产物经分析，纯度为，见图经检测，比活为......”。

9、“.....如和存在于真核生物细胞线粒体和部分原核生物内。在这种种在生物体内含量最高，且具有较好的稳定性，使其具有更好的应用前景但天然，分子对环境因素敏感，半衰期短，易失活。有研究表明，通过阜师范大学，魏贝贝基于分子动力学分析的的热稳定性研究山东曲阜曲阜师范大学，张龙翔，张庭芳，李令媛生化实验方法和技术版北京高等教育出版社，胡立新，陈晓耘异亮氨酸热分解机理的研究湖北工学院学报唐剑光，张健锋，常东英，曹玉锋，乔宏雷，高洪喜，迟春萍种铜锌超氧化物歧化酶突变体的原核表达纯化及酶活性测定中国生物制品学杂志，基金吉林省科学技术发突变体在原核表达系统中具有较好的酶活性，且该突变体经过了热力学优化突变，具有潜在的应用价值，也为进步摸索大规模发酵生产工艺及该酶突变体的实际应用奠定了基础，但其与天然......”。