1、“.....化方法，已经被证明可以用于小球藻的转化，相对于其他转化方法具有可以装载大量大片段与操作简单等优势，具有定的优越性。后续还需不断优化转化条件，建立更加稳定高效的遗传转化体系，为发展小球藻新型转基因技术提供理论基础。参考文献冯兴标，李光伟，陈丹阳，等小球藻表达胡萝卜素酮化酶基因提高虾青素的量合肥工业大学学报自然科学版，吴丽娟，余志良，林祥志，等小球藻基因工程的研究进展及应用前景展望科技通报，王安琪，朱华新，赵翔，等基于纳米基因载体的动植物遗传转化研究进展生物技术进展，李瑶，崔海信，刘琪，等解时间过短，半原生质体原生质体获得率较低而酶解时间过长，细胞内容物流出，导致细胞不完整，无法作为转化受体进行高效遗传转化。本试验探究了酶解时间对椭圆小球藻半原生质体原生质体形成的影响，最终确定了椭圆小球藻在条件下避光酶解时......”。

2、“.....本研究在转化过程中使用增强型荧光蛋白基因作为外源报告基因，基因为基因的突变型，发射的荧光强度比基因增加了约倍，且已有报道表明该基因已经成功在杜氏盐藻中表达。在本研究中，基因在小球藻中的瞬时表达结果清晰，探讨如何将椭圆小球藻转化体系的建立与磁性纳米颗粒介导有机结合遗传学论文便捷稳定的操作，简化了转化过程中系列繁琐的步骤，而且在遗传转化的过程中，受体材料的可选择范围广，磁性纳米颗粒对受体材料呈现出优良的安全性稳定性与保护性。本研究首次尝试将磁性纳米颗粒介导的转化方法用于小球藻，小球藻作为当前最具经济潜力和生产价值的真核微藻之，其应用范围广泛，可作为转基因技术良好的受体材料，但是由于其遗传转化方法的限制等原因，导致小球藻的基因工程工作进展缓慢。纳米载体具有独特的理化结构和转化原理，可以简化传统转化方法的操作步骤，装载大量核酸分子......”。

3、“.....从而颗粒复合物酶切产物的琼脂糖凝胶电泳结果泳道为未经酶切的磁性纳米颗粒复合物，磁性纳米颗粒与质粒的质量比分别为∶∶∶∶∶泳道为相同条件下经过酶切的磁性纳米颗粒复合物产物，磁性纳米颗粒与质粒的质量比分别为∶∶∶∶∶泳道为未经酶切的质粒泳道为经过酶切的质粒。每孔中的质量均为。磁性纳米颗粒复合物转化小球藻的荧光瞬时表达用纳米磁性颗粒介导基因转化小球藻细胞后，内进行荧光显微观察。图显示，经质粒转化的藻细胞中部分发出绿色荧光，在视野中呈清晰的绿色，未被转化学显微镜下观察细胞状态。通过研究不同酶解时间对半原生质体原生质体形成的影响发现酶解时间不足，形成半原生质体原生质体的数量较少酶解时间过长，细胞酶解过度，又会导致细胞内容物溢出，无法形成完整细胞。综合分析，最佳酶解条件为在避光条件下于酶解，相应的原生质体半原生质体形成率为图......”。

4、“.....在室温条件下孵育，制备磁珠质粒复合物。在无菌操作台上，将孔板臵于磁板上，加入外加磁场，分别在不同孔中加入经酶解处理的椭圆小球藻为单细胞生物，直径为，利用磁性纳米颗粒作为载体转化藻细胞在理论上是可行的。考虑到小球藻具有坚硬复杂的细胞壁，不利于转化的进行，因此在利用磁性纳米颗粒对小球藻细胞进行转化时，要部分或完全去除小球藻的细胞壁以制备半原生质体或原生质体，从而提高磁性纳米颗粒质粒复合物进入细胞的概率，进而提高转化效率。本研究用直径为的磁性纳米颗粒作为载体，介导外源基因对小球藻原生质体的转化，实现外源增强型荧光蛋白基因在小球藻中的转化与瞬时表达，为进步通过基因工程技术深入开发小球藻生物反应器提各领域发挥出巨大的作用。磁性纳米材料由于具有特殊的理化性质和结构，因而可以被用作基因载体，进行磁转化，并且可以在定程度上起到保护的作用......”。

5、“.....经过聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米颗粒可以携带核酸分子在磁场力的作用下进行定向移动，从而富集在目的细胞表面，通过电荷之间的相互作用，在短时间内进行高效转化。磁转化最初被应用于逆转录病毒，随着纳米载体技术的研究日益深入，该技术因操作简单且高效，同时具有目的基因高效稳定表达安全无害靶向性高等优点，被国内外培养基中，在光照摇床中培养至对数生长期。取藻液，离心，小心弃去上清，收集藻体。将藻细胞用无菌水洗涤次，加入酶解液含有纤维素酶果胶酶半纤维素酶，用滤膜无菌过滤，现配现用，使藻细胞充分悬浮于酶解液中，于避光振荡条件下分别酶解后，于离心，弃上清，用含有洗涤次，去除残留的酶解液，将藻细胞含量调整为个，分别在显微镜下观察小球藻原生质体半原生质体情况，统计结果为次观察结果的生物学重复平均值，每次重复至少统计个具有代表性的视野中的原生质体数和半......”。

6、“.....氧化铁磁性纳米颗粒是目前应用比较广泛的磁性颗粒，经过聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米颗粒可以携带核酸分子在磁场力的作用下进行定向移动，从而富集在目的细胞表面，通过电荷之间的相互作用，在短时间内进行高效转化。磁转化最初被应用于逆转录病毒，随着纳米载体技术的研究日益深入，该技术因操作简单且高效，同时具有目的基因高效稳定表达安全无害靶向性高等优点，被国内外很多研究者用于进行体内外细胞基因转化试验，目前已经成功转化大鼠胃组织细胞猪呼吸道上皮细胞及人细胞等。究所淡水藻种库，并在固体平板上连续划线继代进行纯化质粒大肠杆菌菌株由笔者所在实验室保藏。关键词增强型绿色荧光蛋白基因小球藻瞬时表达磁性纳米颗粒转化遗传学小球藻作为单细胞真核微藻，是种重要的微藻资源。由于具有营养价值高易大规模培养可用于生产修饰复杂蛋白质且成本低廉等多重优点......”。

7、“.....并有望逐渐成为医学食品工业研究等领域的新型模式生物。随着小球藻转基因技术研究的不断深入，目前已经有些成功转化小球藻的报探讨如何将椭圆小球藻转化体系的建立与磁性纳米颗粒介导有机结合遗传学论文很多研究者用于进行体内外细胞基因转化试验，目前已经成功转化大鼠胃组织细胞猪呼吸道上皮细胞及人细胞等。由于植物细胞壁的屏障作用，使纳米载体介导的植物基因转化研究发展相对缓慢。等于年利用氧化硅纳米粒子结合外源基因转化植物细胞，首次成功获得了转基因植株，并将该技术成功应用于植物转基因领域。研究者们随后利用磁性纳米基因载体技术对拟南芥水稻等植物进行了遗传转化，并取得了定成果，从而使纳米载体技术开始逐步应用于植物遗传转化方面。探讨如何将椭圆小球藻转化体系的建立与磁性纳米颗粒介导有机结合遗传学论文品工业研究等领域的新型模式生物。随着小球藻转基因技术研究的不断深入......”。

8、“.....转化方法包括基因枪法农杆菌侵染法电击转化法聚乙醇介导法等。研究者们将报告基因或者具有功能性的外源基因转入小球藻，并实现其表达。但是以上方法均存在不同的缺点，如操作复杂效率低遗传稳定性差等，从而限制了小球藻作为生物反应器的规模化应用。因此，研发操作简单转化效率高的遗传转化方法对于加快小球藻生物反应器的有效开发和利用是条重要的途径。近年来，纳米载体相关技术作为极具前景的技术之而得到快速发展，已经在原生质体及半原生质体是转化体系中较为关键的步。由于单酶解液的效果并不理想，因此采用组合酶液对小球藻进行酶解处理。取酶解不同时间的藻细胞，在光学显微镜下观察细胞状态。通过研究不同酶解时间对半原生质体原生质体形成的影响发现酶解时间不足，形成半原生质体原生质体的数量较少酶解时间过长，细胞酶解过度，又会导致细胞内容物溢出，无法形成完整细胞。综合分析......”。

9、“.....相应的原生质体半原生质体形成率为图。椭圆小球藻为单细胞生物，直径为，利用磁性纳米颗粒作为载体转化藻细胞在理原生质体数。质粒的提取如图所示，质粒含有由花椰菜花叶病毒启动子与胭脂碱合成酶终止子构成的报告基因的表达框。按照天根生化科技北京有限公司的无内毒素质粒大提试剂盒说明书抽提质粒，提取纯度约为，于保存备用。关键词增强型绿色荧光蛋白基因小球藻瞬时表达磁性纳米颗粒转化遗传学小球藻作为单细胞真核微藻，是种重要的微藻资源。由于具有营养价值高易大规模培养可用于生产修饰复杂蛋白质且成本低廉等多重优点，小球藻可以作为种环境友好型生物反应器用于生产活性物质，并有望逐渐成为医学由于植物细胞壁的屏障作用，使纳米载体介导的植物基因转化研究发展相对缓慢。等于年利用氧化硅纳米粒子结合外源基因转化植物细胞，首次成功获得了转基因植株，并将该技术成功应用于植物转基因领域......”。