1、“.....待长出叶心后移栽至花盆中,具体方法如下第,培养基准备粉末蔗糖溶于去离子水中,终浓度分别为,调节至左右培养室内,光周期为光照,黑暗培养。待植株长至叶心时,移栽至营养土里。第,移栽营养土使用前需,灭菌。冷却后,营养土蛭石按∶的比例混匀,除去杂质后装进小花盆放臵于托盘内,向托盘内喷洒去离子水至表土湿润为止。转机因拟南芥的研究遗传学论文。阳性转基因株系的鉴定。转机因拟南芥的研究遗传学论文粉末蔗糖溶于去离子水中,终浓度分别为,调节至左右,后加入琼脂终浓度为,于,高压灭菌。待固体培养基冷却到不烫手的程度后,无菌条件下,将其分装到培养皿内,凝固待用。第......”。
2、“.....加放臵于预先准备的盒子内,将盒子放臵于的环境中,暗培养后取出暗培养的植株,转至正常培养条件下继续培养为保证转化效率,拟南芥培养周左右,进行第次浸染。基于拟南芥的长势,在其整个生长周期内根据需要可浸染次转化后两周左右,拟南芥结出大量荚果,使荚果自然成熟干燥后,收取拟,至使为左右,若值过高会影响拟南芥后期长势,若值过低则会影响转化效率菌液重悬后加入表面活性剂每菌液加入,混匀静臵段时间。采用浸染花序法浸染野生型拟南芥植株,方法如下当野生型拟南芥植株抽薹......”。
3、“.....转机因拟南芥的研究遗传学论文。浸染。浸染液的准备,方法如下取检测结果为阳性的保存于的农杆菌菌液于含心将质粒溶液收集到离心管中。进行质粒提取后,用两个内切酶和Ι分别对目的基因的质粒和载体进行双酶切。加样结束后,混匀,酶切。酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳,且对目标片段及骨架进行胶回收。摘要使用农杆菌介导法实现拟南芥遗传转表达载体的构建采用质粒小提试剂盒提取扩增测序结果均正确无误的目的基因的质粒,具体步骤如下第,取过夜培养的含目的基因的大肠杆菌转化菌液......”。
4、“.....吸除上清第,向留有菌体沉淀的离心管中加入溶液已加入和的,使用涡环境下周以上即可用于后期的筛选。关键词实验拟南芥转基因植株遗传信息遗传转化实验材料试验材料转基因所需的菌株农杆菌转基因所需的模式植物野生型拟南芥转基因所需的植物表达载体。转机因拟南芥的研究遗传学论文。摘要使用农杆菌介导法实现拟南芥遗传转化,包括构建重对植株进行初步的处理剪去花葶上已经开放的花朵和已经形成的荚果,仅保留刚露白的花骨朵和花蕾提前向放臵浸染植株的盒子内铺上层滤纸,用喷壶打湿待用将刚露白的花骨朵和花蕾浸在浸染液中,定时植株上所有的花骨朵和花蕾浸染完全后......”。
5、“.....将盒子放臵于转机因拟南芥的研究遗传学论文,包括构建重组表达载体,转化农杆菌制作浸染液,有目的将外源基因插入到野生型拟南芥基因组中,通过减数分裂获得新植株,再进行筛选和鉴定,从而得到阳性的转基因植株,最终达到获取纯合代转基因株的目的。将野生型拟南芥和纯合转基因株系进行判定,可以得出目的基因在拟南芥中记录和传递的遗传信,倒掉收集管中的废液第,向吸附柱中加入漂洗液,离心,倒掉收集管中的废液第,重复步骤第,将吸附柱放入收集管中,离心,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除第,将吸附柱臵于个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位滴加洗脱缓冲液......”。
6、“.....不得超过上述菌液臵于,条件下离心,收集菌体使用转化缓冲液重悬菌体,至使为左右,若值过高会影响拟南振荡器彻底悬浮细菌沉淀第,向离心管中加入溶液,温和地上下翻转次,使菌体充分裂解第,向离心管中加入溶液,立即快速地上下颠倒次,充分混匀,将出现絮状沉淀,然后,离心第,将上步收集的上清液用移液器转移到吸附柱中,注意尽量不要吸出沉淀。,离心组表达载体,转化农杆菌制作浸染液,有目的将外源基因插入到野生型拟南芥基因组中,通过减数分裂获得新植株,再进行筛选和鉴定,从而得到阳性的转基因植株......”。
7、“.....将野生型拟南芥和纯合转基因株系进行判定,可以得出目的基因在拟南芥中记录和传递的遗传信息。实验方法环境中,暗培养后取出暗培养的植株,转至正常培养条件下继续培养为保证转化效率,拟南芥培养周左右,进行第次浸染。基于拟南芥的长势,在其整个生长周期内根据需要可浸染次转化后两周左右,拟南芥结出大量荚果,使荚果自然成熟干燥后,收取拟南芥种子即代转基因种子代种子臵于干燥后期长势,若值过低则会影响转化效率菌液重悬后加入表面活性剂每菌液加入,混匀静臵段时间。采用浸染花序法浸染野生型拟南芥植株,方法如下当野生型拟南芥植株抽薹......”。
8、“.....第,移栽营养土使用前需,灭菌。冷却后,营养土蛭石按∶的比例混匀,除去杂质后装进小花盆放臵于托盘内,向托盘内喷洒去离子水至表土湿润为止。浸染。浸染液的准备,方法如下取检测结果为阳性的保存于的农杆菌菌液于含和的液后加入琼脂终浓度为,于,高压灭菌。待固体培养基冷却到不烫手的程度后,无菌条件下,将其分装到培养皿内,凝固待用。第,种子消毒拟南芥种子粒臵于的离心管内加入乙醇溶液消毒吸出乙醇溶液,加入的次氯酸钠溶液∶∶,振荡洗涤,定为阳性的转基因代植株,分株收获得到代转基因种子......”。
9、“.....由孟德尔遗传定律知种子的分离比,抗性植株不抗植株∶,选择抗性植株中叶片和根系均生长正常的幼苗移栽,分株收获得到代种子组培法种植代转基因种子,其中,几乎全部发芽的株系则为纯合株系,留下此株系入的次氯酸钠溶液∶∶,振荡洗涤,短暂离心在无菌条件下倒掉消毒液,后用无菌去离子水冲洗次。第,播种移液枪吸取已消毒的种子于无菌滤纸条上,使用无菌牙签点播至固体培养基上。株距,行距,播种完毕后,封口膜密封,黑暗放臵。第,培养平板至芥种子即代转基因种子代种子臵于干燥的环境下周以上即可用于后期的筛选。转化野生型拟南芥野生型拟南芥的种植......”。
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