1、“.....分别计算嗜多染红细胞占总红细胞的百分率以及嗜多染红细胞的微核形成率。肝脏微核试验取大鼠肝左叶约大小组织，用刀片切成小块，加入含胶原次给药时加入含细胞松弛素的培养基。然后收集各组细胞，按项下方法进行微核试验与碱性彗星试验。体外细胞试验评价遗传毒性体外细胞模型评价遗传毒性微核试验。调整细胞浓度为，取孔细胞培养板，每孔添加培养液细胞混合液，臵孵箱培养。细胞达对数生长期时，将其分为空白对照组丝裂霉素组阳性对照，及低中高剂量组，处理后更换含细胞松弛素的培养基，继续培养。收获细胞并加入，室温低渗处理加入固定液无水甲醇∶无水乙酸∶，固定，离心，弃上清液建的维多细胞聚球体模型则可长期培养，并能够保持较高的白蛋白分泌水平和肝药酶活性，从而更好地模拟药物体内代谢条件，提供更有价值的评价数据。本研究同时利用体外肝细胞培养模型和大鼠体内重复给药试验评价的遗传毒性......”。

2、“.....以期为的临床合理应用和毒性评价方法的选择提供参考。结果，与空白对照组比较，丝裂霉素组细胞的微核形成率和尾百分含量均显著升高，且其微核形成率和尾百分含量在文献报道的范围内，也表明体外细胞模型构建成功各剂量组细胞的微核形成率和尾百分含量差异无统计学意义。体外评价大黄素葡萄糖苷在体内外的遗传毒性遗传论文发生风险有待深入探索。大黄素葡萄糖苷是大黄素在体内的主要代谢产物及形式，其原型同样存在于大黄何首乌虎杖决明子冬凌草等中药中且含量较高。以何首乌为例，不同产地的何首乌药材中的含量最高可达。文献报道可有效提高中枢神经系统中乙酰胆碱含量，保护神经元损伤，对阿尔茨海默病有定改善，临床应用较为广泛。然而作为蒽醌类化合物，含有的羟基蒽醌结构属于遗传毒性警示结构，该结构与碱基类似，使其可嵌入链并导致沙门氏菌尤其是菌株回复性突变。的遗传毒性风险不容小觑......”。

3、“.....评价大黄素文献报道可有效提高中枢神经系统中乙酰胆碱含量，保护神经元损伤，对阿尔茨海默病有定改善，临床应用较为广泛。然而作为蒽醌类化合物，含有的羟基蒽醌结构属于遗传毒性警示结构，该结构与碱基类似，使其可嵌入链并导致沙门氏菌尤其是菌株回复性突变。的遗传毒性风险不容小觑，但目前关于的毒性及致癌性风险缺乏充足的试验研究。评价大黄素葡萄糖苷在体内外的遗传毒性遗传论文。细胞人源肝细胞系购自美国公司，本试验所用细胞为第代。动物级大鼠只，周龄，均为♂。型肝炎病毒感染的肝癌患者体内非瘤组织分离而得的细胞株，能表现人肝细胞的大多数功能，其体外维培养模型是常用的体外肝毒性评价工具。本课题组前期研究证实细胞可在不额外添加代谢活化剂的情况下较好地代谢药物，在了解以肝脏为靶器官遗传毒性方面独具优势。但模型缺乏细胞细胞接触和细胞胞外基质间的联系......”。

4、“.....利用悬滴技术构建的维多细胞聚球体模型则可长期培养，并能够保持较高的白蛋白分泌水平和肝药酶活性，从而更好地模拟药物体内代谢条件，提供更有价值的评价数据。本研究同时利用体外肝细胞培养模型和大鼠体内重复给药试验评价的遗传毒性，并比较种评结果，与空白对照组比较，丝裂霉素组细胞的微核形成率和尾百分含量均显著升高，且其微核形成率和尾百分含量在文献报道的范围内，也表明体外细胞模型构建成功各剂量组细胞的微核形成率和尾百分含量差异无统计学意义。体外细胞模型的微核形成率及尾百分含量测定结果见图。图体外细胞试验中微核形成率及尾百分含量测定结果体外细胞模型评价遗传毒性参考卢贤欢等的悬滴细胞模型培养方法构建体外细胞模型，将经高密度诱导培养后，接种于细胞试验评价遗传毒性体外细胞模型评价遗传毒性微核试验。调整细胞浓度为，取孔细胞培养板，每孔添加培养液细胞混合液，臵孵箱培养......”。

5、“.....及低中高剂量组，处理后更换含细胞松弛素的培养基，继续培养。收获细胞并加入，室温低渗处理加入固定液无水甲醇∶无水乙酸∶，固定，离心，弃上清液，重复固定次，每个样品滴片制备张标本并编号。固定后的玻片标本浸入应用液中，染色之后臵于超纯水研究也发现，对体外细胞模型无明显致染色体断裂及损伤风险，而细胞模型对其具有明显损伤，提示体外肝细胞模型的评价结果更接近于体内试验。体外肝细胞模型现已被应用于药物研发过程中的药物评估。体外肝细胞模型可长期培养，且能保持肝状类似结构和组织代谢活动，在重复给药的体外肝毒性评价方面具有定的优势。本研究的结果也表明，体外肝细胞模型是良好的体外毒性评价方法，其评价结果与体内实验相似，可以更准确地进行肝毒性药物的早期筛选。参考文献黄蓓国家药监局发文指导中药肝损伤评价中医药导报，练祥，柯婷婷......”。

6、“.....成率随剂量升高有定升高趋势，且与肝微核试验结果基本相符此外，高剂量组可导致外周血淋巴细胞明显损伤，各剂量组之间呈剂量效应相关性，肝细胞彗星试验结果为阴性但可见类似趋势。项研究中外周血淋巴细胞均较肝细胞更为敏感，可见可与外周血淋巴细胞相互作用，存在定遗传毒性风险。相关体外和体内研究报道，含蒽醌环的化合物可导致遗传物质断裂并导致微核试验和彗星试验结果呈阳性，如大黄素可诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成率升高，可导致体外培养人淋巴母细胞和肝细胞断裂，。大黄素和大黄酸可诱导哺乳动物细胞基因突变率增加，芦荟大黄素在排泄过程中可导致肾细胞和结肠细胞的性试验通常平行设臵阳性对照，确保试验体系的可靠性。本研究根据文献及经验在体内及体外研究中选择不同阳性对照，证实试验体系成立评价结果可信。丝裂霉素为体外微核试验常用阳性对照药......”。

7、“.....鉴于当前针对体外彗星试验，尤其是模型彗星试验的文献报道较少，且微核试验所用阳性对照药及浓度范围通常可兼顾彗星试验，故使用丝裂霉素同时作为体外微核和彗星试验的阳性对照药。甲磺酸乙酯是以体内染色体和损伤为检测终点时常用的阳性对照药，同时也是体内彗星试验联合验证的指定阳性对照，故本研究将其作为体内微核和彗星试验的阳性对照。研究的致癌性风险对于临床安全评价大黄素葡萄糖苷在体内外的遗传毒性遗传论文冲洗干净，室温下自然干燥。显微镜下观察并计数每张玻片标本中每个双核细胞中含微核的细胞数，计算微核形成率，微核形成率含微核双核细胞数观察双核细胞总数。碱性彗星试验。细胞处理及给药方法同项下微核试验，收获细胞后调整细胞浓度为，将收获的细胞进行制片裂解解旋电泳中和脱水等处理后制成单细胞凝胶标本，每组制备张标本。所有标本使用∶染色，并在荧光显微镜下拍照放大倍数......”。

8、“.....每个标本至少分析个彗星细胞的尾百分含量并计算中位数。评价大黄素葡萄糖苷在体内外的遗传毒性遗传论文细胞组学试验法的建立与应用癌变畸变突变，文海若，毛志慧，陈高峰，等大鼠连续灌胃给药对碱性彗星电泳和骨髓微核的影响药物分析杂志，韩天娇，周长慧，常艳体内碱性彗星试验与微核试验联合测定甲磺酸乙酯遗传毒性方法的建立癌变畸变突变，童文，周长慧，常艳肝微核试验方法的最新进展中国新药杂志，朱钦翥，陈维，张立实大黄素和大黄酸的体外遗传毒性评价癌变畸变突变，张立基于的大鼠体内大黄药源性成分分析方法研究北京北京中医药大学，文海若，颜玉静，宋捷，等大黄素葡萄糖苷的体内外遗传毒性评价中国药房，基金项目国家自然科学基金资助项目国家重大新药创制专项。体细胞的微核形成率差异无统计学意义，但随着剂量的增加，嗜多染红细胞微核形成率及肝细胞微核形成率均有所增加，存在剂量效应相关性......”。

9、“.....注与空白对照组比较，表各组大鼠骨髓嗜多染红细胞总红细胞比例和嗜多染红细胞肝细胞微核形成率的测定结果，碱性彗星试验采集大鼠外周血约备用。肝组织样本采集肝左叶约大小组织臵于切碎液含和的平衡溶液中并使用剪刀剪碎组织以释放细胞，经细胞筛过滤后臵于冰上备用。取外周血淋巴细胞和肝细胞参考和项下李瑛，刘伏友大黄的毒副作用研究中国药房，文海若，毛志慧，耿兴超，等人源肝细胞毒性与遗传毒性高通量筛选方法的初步建立药物评价研究，郭忠会，贾志鑫，陈奎奎，等基于分析何首乌提取物体内外成分中国中药杂志，李凯明，孙震晓我国含大黄素葡萄糖苷的植物资源整理中国新药杂志，母茂君，李杨，李成功，等法同时测定何首乌中个蒽醌糖苷大理大学学报，颜玉静，文海若，淡墨，等种何首乌单体成分对大鼠肝损伤作用的研究中国现代中药，卢贤欢，赵华琛......”。