1、“.....仅在端存在酶切位点图。由此构建了基于的外源性表位呈递模型，在该模型中，可以用过上述方法，在的端和端插入定范围内任意拷贝数的表位。由于拷贝数关系到融合蛋白的表达量以及免疫原性，因此，该的外源性表位呈递模型的建立，方便了多种融合抗原的筛选。农杆菌介导的瞬时表达系统与融合蛋白的表达量基于的已经证明可在大肠杆菌，酵母菌，哺乳动物细胞和植物等多种系统中成功组装。然而，植物表达系统作为种成本低廉，可规模化生产，并且可将人图蔗糖密度梯度离心的夹心检测结果图检测，与的表达，与,类病原的污染可能性减小到最低的系统，具有不可替代的优势。然而......”。

2、“.....本实验利用农杆菌介导的瞬时表达系统，将菌液注射入烟草叶片中，表达出的目的蛋白总量明显高于稳定核转基因植物的表达量。本实验中，的产量达到，新鲜叶片重量，。而转基因植物表达出的，在烟草叶片中仅为，在马铃薯叶片中仅为，在莴苣叶片中为，在墨西哥酸浆的叶片和果实中产量分别达到和。而本实验中的两种融合蛋白的产量更高，达到了达到了，。但融合蛋白表达量却在插入片段以后显著下降，甚至无法检测到。这现象的原因仍有待进步研究。以上数据均表明，该瞬时表达系统无论是在生产周期上仅还是在产量上，都明显优于稳定核转基因植物表达系统。而周期短，产量高，成本低的优点......”。

3、“.....具有重要意义。基于的的抗原性分析将外源氨基酸插入的亲水区中，必然会直接影响到与免疫原性。目前的研究表明，在的个氨基酸残基中，其主要亲水区域集中在到之间，这区域对的抗原性与免疫原性起到最主要的作用。本实验避开了中端到之间的表位，选择把外源性抗原融合在的端和端。这样表达的融合抗原在获得外源性表位的抗原性的同时，依然保留了的抗原性。通过软件分析图可见，无论将插入到的端还是端，都可以在基本不影响本身抗原性的同时，产生良好的抗原性。这样，方面极大便利了蛋白表达的检测与定量，另方面，可诱导机体产生抗和抗两种中和抗体......”。

4、“.....图，与的亲水性，抗原性与表面可能性分析致谢感谢中科院上海巴斯德研究所黄忠老师在试验上的精心指导和在生活学习上的关心与帮助，感谢实验室刘庆伟，蔡村，王波，黄栩林，石金平，冯嫣芳，库志强，叶晓华，王婷的热情帮助，感谢我院孙钦伟老师对论文修改所提出的建议与指导。参考文献,粘性末端的片段。用单酶切质粒，纯化酶切产物，并与上述片段连接。连接产物转化感受态，挑取单克隆，用目的基因的上游引物和载体的下游引物与进行鉴定，筛选阳性克隆进行扩增，提取质粒进行酶切鉴定，并通过测序证实重组质粒图的构建。该载体上插入后，的端仍有酶切位点，而端的酶切位点消失图......”。

5、“.....同法连入，构建图。的两条单链序列分别为和。同样方法利用合成的互补单链和，从端酶切位点插入，构建质粒图。合成互补单链和图,在位点的插入如图中方框所示，设计插入片段时将碱基突变为，使该片段连接在的位点上之后，端的酶切位点消失，仅在端存在酶切位点。,图植物重组表达载体的构建热休克蛋白启动子链霉菌噬菌体整合酶和整合酶重组位点肌动蛋白启动子依赖性聚合酶移动蛋白非编码区胭脂氨酸合酶终止子,区域的左端和右端，同法构建图。在烟草中的农杆菌介导表达将上述五种重组质粒通过电转化法转入农杆菌，转化后的农杆菌涂布添加抗生素的琼脂平板酵母浸出物，营养肉汤，琼脂粉......”。

6、“.....羧苄西林，于培养。分别挑取单克隆接种添加抗生素的培养基酵母浸出物，营养共感染烟草，以实现重组外源蛋白的表达图。与作为的广谱中和表位，与融合表达后可以被展示在端或端，使其更好的被机体免疫系统识别和呈递，诱导出具有更高中和效价的抗体。然而与的位置关系，拷贝数，都与融合蛋白的表达量有极大关系。为了使其更好的表达，我们设计了种不同的重组质粒，将，分别构建在序列的端和端图，以对其表达量做出相应的评估。由于能使表达的植物叶片产生绿色荧光，因此可对蛋白在植物叶片中表达起到监控作用。感染后第日，蛋白表达的量较为理想，叶片呈现出显著荧光图......”。

7、“.....我们计算出目的蛋白在样品可溶性蛋白总量中所占比例图，以及每克新鲜叶片的蛋白产量图。表达野生型的叶片，每克新鲜叶片包含，每毫克中包含当融合在的端或端时，每克新鲜叶片分别包含与，每毫克中分别包含与而当将与同融合表达在的端或端时，其的表达量显著降低，几乎无法检测到。由于其表达量过低，以致难以准确检测，因此后续的系列检测中不再保留与。图农杆菌感染叶片后，绿色荧光蛋白在叶片中的表达,图融合蛋白中表达量的检测图融合病毒样颗粒蛋白中与的比例免疫印迹为进步证实融合蛋白的正确表达......”。

8、“.....通过软件计算，的大小约为，与的大小约为。由此进步证实了融合蛋白的正确表达。病毒样颗粒组装的检测由植物表达的融合蛋白形成的能力直接关系到对中和表位的展示以及其免疫原性的高低。为确认本实验中的融合蛋白已组装成，我们用含，与的叶片提取液进行蔗糖密度梯度离心，而后采集不同蔗糖梯度进行夹心检测。如图所示，对这三种蛋白蔗糖梯度的夹心检测所形成的的峰型相似。已知农杆菌介导表达的野生型可在该植物表达系统中组装成，因此可证实，与也已完成了相应的组装。讨论基于的外源性表位呈递模型的建立由于能够模拟整个病毒的结构而组装成没有感染性遗传物质的颗粒......”。

9、“.....目前，已经有两种疫苗上市乙肝病毒疫苗和人类乳头瘤病毒疫苗。作为种具有较好免疫原性的，基于的除了直接作为的预防性疫苗外，还可以作为种具有很强的呈递外源性表位能力的载体。具有免疫原性的外源性表位可插入在端或端，也可插入到中间的亲水区内。在本文中，我们主要研究了将与融合到的端或端。基因端存在个汤，利福平，羧苄西林，同时，接种农杆菌于同样的培养基，将上述种农杆菌置摇床培养至。菌液于离心，弃上清，用吗啉基乙磺酸重悬，分别将最终调至，等体积混合。挑选叶片平整的周龄烟草，中科院植物生理生态研究所种植，用注射器针头在叶片背面轻刺小孔，去除针头......”。