1、“.....在分离过程中不可避免地会造成些菌种的丢失。主要原因有表面消毒过头，将部分内生真菌杀死表面消毒不充分，表面菌污染，杂菌抑制内生真菌生长些生长缓慢的真菌往往被生长快的真菌所覆盖所用培养基不能保证所有内生真菌都生长。目前国内多采用抗生素平板进行内生真菌的分离，而国外般均采用水琼脂法。传统方法般是先进行表面消毒，然后用无菌刀片削去外部组织，将内部心材切割进行分离，由于银杏树枝木质坚硬，样品分割困难，极易造成污染，而有人研究报道树皮中也通常出现活性内生菌株，因此我们采用先分割整段树枝再表面消毒的处理，通过水琼脂法对中国古银杏样品中的内生真菌进行分离，建立与宿主植物内环境类似的生态模型，从而较为真实地反映植物内生菌的生物学特征。分离过程中设置了对照组，用于分离纯化的菌落为不同于对照组平板上的菌落，以区分内生真菌和表面杂菌......”。

2、“.....另外我也尝试过在培养基中加入孟加拉红抑制细菌和放线菌生长的方法，同时采用种不同的培养基马铃薯葡萄糖培养基玉米粉培养基察氏培养基酵母提取物培养基进行分离，获得了株菌种，其中大部分是产孢真菌，且交链孢霉属曲霉属和青霉属较普遍，而这些菌同时也是自然界中常见的病原菌或污染菌。因此，应用水琼脂法对整体样品进行分离的方法适合于银杏内生真菌的分离。内生真菌是新型生物活性物质的巨大资源。从抗菌实验结果可看出，银杏内生真菌中具有抗菌活性的菌株普遍存在，活性菌株大多集中于无孢菌群中，这个结果与相关研究致。研究表明内生真菌在宿主体内产生特定的生物活性化合物，既可以有助于它在植物体生境中形成优势地位，也可以保护植物免受病原菌侵袭，因此，素有。活化石。之称的银杏几乎不感染任何病虫害的特性，不能排除是其内生真菌在发挥作用。目前,丝状真菌的抽提方法主要为液氮干冰玻璃珠机械研磨,或超声微波......”。

3、“.....氟化氢等化学试剂方法壳多糖酶裂解酶等酶处理方法,以及上述方法的联合应用。但丝状真菌富含多糖的胞壁即使在液氮研磨后也难于被普通的抽提试剂破坏,而其它机械研磨方法直接破壁时不可避免会损伤到菌体释放的,导致降解剧增。而以各种酶消化胞壁,既费时又昂贵,并且不总是有效。丝状真菌的细胞壁主要以几丁质构成骨架结构,而几丁质是以乙酸基葡萄糖胺为单体的聚合物,它的糖链上有大量的经基。氯化苄在弱碱性条件下可以与多糖上的轻基作用生成醚,通过该反应破坏细胞壁糖链,在离子型表面活性剂作用下,胞内得以释放。许多内生真菌在培养基或无菌的植物组织上不产生孢子。随着分子生物学技术的发展和真菌基因组数据库的不断扩大,建立在基础上的新型技术被用于内生真菌的鉴定,特别是序列具有较高的突变速率,己被各国研究者公认为是生物类群种间水平的比较研究中较好的指标......”。

4、“.....选用及其侧翼的区域对另外株不产孢活性菌株进行分析,基因高度保守,适宜用于较高分类水平的系统发育分析,而区域则高度变异,可以在较低分类水平上进行序列分析。根据序列相似性分析结果,银杏内生真菌菌株与细交链孢霉具有较高的同源性,另外与砖红镰孢霉和与炭角菌与株分离自的内生菌分别具有较高的相似性,结果与形态特征比较的结果致。内生真菌通常为无孢菌群,有的菌株即使进行相当烦琐费时的产孢诱导处理在人工培养基上也不产生有性或无性孢子,而且新的物种也在不断出现,因此内生真菌的鉴定通常比较困难。等报道从俄勒冈州西部常绿灌木中分离出的内生真菌中有左右不产生孢子。和发现从沿海红杉中分离出的内生菌大约有属于无孢菌群。些特殊的方法可用于诱导真菌产孢。等对棕搁内生真菌进行诱孢处理,将内生菌接种到含有麦芽膏培养基和无菌棕搁叶柄的三角瓶中,在紫外灯和黑暗下交替培养......”。

5、“.....也得到了红杉内生菌的子实体结构。本研究中银杏内生真菌菌株在固体平板上形成黑色炭化菌落,在液体或固态基质上均能形成黑色子座,通过目前已报道的各种诱导产孢手段,包括近紫外线照射菌体扫刷寄主接种温差培养等处理,都未产生孢子,内生真菌生活在特殊的植物体内环境中,形成了独特的生理生化特性,在人工培养条件或即使人工接种宿主的情况下都有可能不产生孢子。因此不能依靠形态学特征对内生真菌进行准确的种的水平上的鉴定。小结从银杏枝条树叶样品中分离得到株内生菌,其中株为孟加拉红法分离所得,在培养基上大部分为产孢真菌,包括株交链孢霉株曲霉株青霉株毛霉株镰孢霉株不产孢真菌和株酵母株为水琼脂法所得,包括株小单头孢霉属株交链孢霉株简梗孢霉和株不产孢真菌。水琼脂法更适合银杏内生真菌的分离。通过平板孔阱实验筛选具有抗菌活性的内生真菌......”。

6、“.....占总分离菌株的。以水琼脂法分离所得菌株的活性明显高于孟加拉红方法。对用水琼脂法分离所得的株活性菌株进行初步鉴定。根据分生孢子形态对其中株产孢菌进行鉴定,为简梗孢霉属为小单头孢霉属和均为交链孢霉,,,,,,。通过对片段进行序列分析,结果显示与交链孢霉与镰孢霉和与炭角菌与株分离自的未鉴定的内生菌分别具有较高的相似性,结果与形态特征比较的结果致。致谢本文是在阎华老师悉心指导下完成的，从论文选题实验设计到实验材料的采集实验的实施论文的撰写，导师都倾注了大量的心血，老师学术上严谨的治学态度，对实验操作的严格要求以及对科学真理的执着追求的精神，直鞭策激励着我，这将使我受益终身，在此向老师表示由衷的感谢,在论文期间，湖北文理学院化学工程与食品科学学院的余海中孙永林张火云等老师都给予我热情的指导......”。

7、“.....在此并向他们表示衷心的感谢,感谢化学工程与食品科学学院各位领导老师在大学四年里对我的谆谆教导关心支持,参考文献，，，，,，刘芸，殷红，彭辉等植物内生真菌潜在的天然药物新来源中华现代中西医杂志杜慧娟药用植物抗菌内生菌的分离鉴定及其生物学性质的研究重庆重庆大学硕士学位论文，邹文欣，谭仁祥植物内生菌研究进展植物学报梁宗琦真菌次生代谢产物多样性及其潜在应用价值生物多样性，，，，申屠旭萍，俞晓平，夏湛恩，等株银杏内生真菌代谢产物抗菌活性初步研究植物保护许灵波，申屠旭萍，陈宵峰，等银杏内生真菌的培养条件及其代谢产物对作物真菌病害的抑制作用菌物研究，,,世界现已发现多种真菌，而且每年还以余种的新种递增，保守估计全世界真菌总数可达万余种。从目前已经研究过的植物来看，还没有发现未分离到内生真菌的物种，因此可以推断内生真菌在植物体内是普遍存在的......”。

8、“.....包括盘菌纲核菌纲和腔菌纲，少数为结合菌类和担子菌类。常见的属有曲霉属毛霉属刺盘孢属拟莲点霉属叶点霉属嫌孢霉属等。植物内生菌是个十分丰富的微生物类群，其内生菌种类和分布因植物种类及环境的不同而异。内生菌系统地分布于植物体的各部分组织器官及细胞间隙中，其中叶叶鞘和种子内的菌丝含量最多。植物的种类本身所取样本的多少和样本地周围环境因子的不同，都会影响分离到的内生菌的数量。同植物的不同组织其内生菌的种类不相同，不同季节同植物内生菌的种类和数量也不相同。内生真菌的生物学作用内生真菌长期生活在植物体内的特殊环境中，并与宿主协同进化，在演化过程中二者形成了互惠共生关系，方面内生真菌可从宿主中吸收营养供自己生长需要，另方面内生真菌在宿主的生长发育和系统演化过程中起重要的作用。而且，内生真菌分布于植物组织内，可获得足够的碳源氮源，受到植物组织的良好保护......”。

9、“.....更易于发挥作用。研究表明，感染内生菌的植物宿主往往具有生长快速抗逆境抗病害抗动物危害等优势，比未感染植株更具生存竞争力。在内生菌植物宿主食草动物生态系统中，植物内生菌扮演着前所未知的重要生态学作用。发挥这些作用的物质基础是内生菌产生的丰富多样的次生代谢产物，它们具有多种生物活性，在农业和或医药业中具有重要的应用潜力。增强宿主的生长许多内生菌可产生叫噪乙睛以及细胞激动素等植物生长激素促进宿主生长，等从黄花篙中分离到的株内生真菌在发酵液中也能积累，因此感染内生真菌的植物般比未感染内生真菌的植物生长快。另方面，内生菌可增进宿主植物对氮磷等营养元素的吸收。等发现在低水平氮源的土壤中，内生真菌可增加宿主对氮元素的吸收，在侵染内生真菌的高羊茅的叶子中，氮元素的含量明显高于没有感染内生真菌的高羊茅......”。