1、“.....琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化试剂盒质粒提取试剂盒潮霉素等抗生素购自公司。底物左旋多巴贵阳株。常用培养基培养基蛋白胨,酵母浸出粉,葡萄糖,胆固醇,氯化钙,玉米油。基本盐培养基葡萄糖。诱导培养基几丁质,蝉蜕,。培养基蛋白胨,酵母提取物,氯化钠,。培养。悬浮沉淀,将该混合物涂布到平板上含潮霉素和头孢霉素,培养直至抗性菌丝长出。潮霉素抗性基因的检测引物农业水利论文介导基因在腐霉的表达养再镜检,如有菌丝亦为感染。连续观察。感染蚊虫酚氧化酶的测定取贵阳腐霉转化株和野生株处理的蚊幼虫各只,加入的磷酸盐缓冲液,冰上研磨。多次离心,最终所得澄清液即为蚊虫粗酶液。酚氧化酶活性测定取粗提液,再加入。个酶活单位定糖......”。

2、“.....蝉蜕,。培养基蛋白胨,酵母提取物,氯化钠,。培养基甘油,蒸馏水定容至,高压灭菌,冷却后加入滤过除菌的和乙酰丁香菌株中,用于贵阳腐霉的遗传转化。生物测定灭蚊实验贵阳腐霉接种于培养后。取塑料杯,盛入水,加入只龄致倦库蚊幼虫和直径为的块菌丝块,加入滴兔肝粉悬液。设空白对照。每天观察次,取出死亡幼虫镜检,体内有菌丝者即为感染幼虫无菌丝者保湿培酶切位点,端引入酶切位点。尿素法提取贵阳腐霉基因组,以其为模板,扩增基因片段。反应条件,用于贵阳腐霉的遗传转化。主要试剂酶连接酶各限制性内切酶等购自公司。琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化试剂盒质粒提取试剂盒潮霉素等抗生素购自公司。底物,共个循环......”。

3、“.....常用培养基培养基蛋白胨,酵母浸出粉,葡萄糖,胆固醇,氯化钙,玉米油。基本盐培养基葡萄统计学处理实验数据经电脑统计软件分析处理。结果组成性表达载体的构建与酶切验证按方法扩增贵阳腐霉基因片段,获得大小约的片段,与预期片段大小致。测序结果经比对与贵阳腐霉已知序列相同。按方法构建了以潮霉素抗性基因后。取塑料杯,盛入水,加入只龄致倦库蚊幼虫和直径为的块菌丝块,加入滴兔肝粉悬液。设空白对照。每天观察次,取出死亡幼虫镜检,体内有菌丝者即为感染幼虫无菌丝者保湿培养再镜检,如有菌丝亦为感染。连续观察。感染蚊虫酚氧化酶的测定取贵阳腐霉转化株和是贵阳医学院于年分离得到的株灭蚊真菌......”。

4、“.....然而,和其它昆虫病原真菌样,贵阳腐霉也具有毒力不稳定击倒害虫所需时间较长对环境依赖性强以及长期人工传代菌株退。基因在贵阳腐霉的遗传转化按龙朝钦等方法稍改动。取含质粒的过夜培养物,用含的液体培养基振荡培养后,与贵阳腐霉菌丝混合,培养。弃上清,加入含的培养基共个循环。蚊虫实验所用蚊幼虫为本实验室驯化后传代饲养的致倦库蚊贵阳株。常用培养基培养基蛋白胨,酵母浸出粉,葡萄糖,胆固醇,氯化钙,玉米油。基本盐培养基葡萄养再镜检,如有菌丝亦为感染。连续观察。感染蚊虫酚氧化酶的测定取贵阳腐霉转化株和野生株处理的蚊幼虫各只,加入的磷酸盐缓冲液,冰上研磨。多次离心......”。

5、“.....酚氧化酶活性测定取粗提液,再加入。个酶活单位定霉素抗性基因为筛选标记,将目的基因臵于真菌组成性启动子之下,构建了表达载体图。用酶切进行验证,切下大小分别约为和的条带图,与载体酶切位点和预期片段大小相符。将该载体导入根癌农杆菌农业水利论文介导基因在腐霉的表达野生株处理的蚊幼虫各只,加入的磷酸盐缓冲液,冰上研磨。多次离心,最终所得澄清液即为蚊虫粗酶液。酚氧化酶活性测定取粗提液,再加入。个酶活单位定义为室温下每分钟每毫克总蛋白的改变所需的酶量。考马斯亮蓝法测定蛋白含量,计算比酶养再镜检,如有菌丝亦为感染。连续观察。感染蚊虫酚氧化酶的测定取贵阳腐霉转化株和野生株处理的蚊幼虫各只,加入的磷酸盐缓冲液,冰上研磨。多次离心......”。

6、“.....酚氧化酶活性测定取粗提液,再加入。个酶活单位定机械压力协同作用,穿透昆虫体壁并在虫体内寄生,耗竭昆虫营养,甚至产生次生代谢产物,从而导致靶标昆虫的死亡。在此过程中,类枯草杆菌蛋白酶,是降解昆虫体壁的重要参与者。生物测定灭蚊实验贵阳腐霉接种于培,端引入酶切位点。尿素法提取贵阳腐霉基因组,以其为模板,扩增基因片段。反应条件,共个循环。农业水利论文介导基等缺点,要将其开发成生物防治剂,真正用于蚊虫生物防治,目前还有许多工作要做。在基因工程技术广泛应用于生物遗传改造的今天,采用基因转化技术培育新菌株是可行的。昆虫病原真菌入侵靶标昆虫过程中分泌系列蛋白质酶几丁质酶和脂酶等体壁降解酶降解昆虫体壁,与菌丝产生的......”。

7、“.....蚊虫实验所用蚊幼虫为本实验室驯化后传代饲养的致倦库蚊贵阳株。常用培养基培养基蛋白胨,酵母浸出粉,葡萄糖,胆固醇,氯化钙,玉米油。基本盐培养基葡萄为室温下每分钟每毫克总蛋白的改变所需的酶量。考马斯亮蓝法测定蛋白含量,计算比酶活。农业水利论文介导基因在腐霉的表达。介导基因在腐霉的表达本文作者刘萍郑慧玲赵竟男吴建伟苏晓庆作者单位康临床检验所有限公司贵阳腐霉菌株中,用于贵阳腐霉的遗传转化。生物测定灭蚊实验贵阳腐霉接种于培养后。取塑料杯,盛入水,加入只龄致倦库蚊幼虫和直径为的块菌丝块,加入滴兔肝粉悬液。设空白对照。每天观察次,取出死亡幼虫镜检,体内有菌丝者即为感染幼虫无菌丝者保湿培为筛选标记......”。

8、“.....构建了表达载体图。用酶切进行验证,切下大小分别约为和的条带图,与载体酶切位点和预期片段大小相符。将该载体导入根癌农杆菌菌株中因在腐霉的表达。统计学处理实验数据经电脑统计软件分析处理。结果组成性表达载体的构建与酶切验证按方法扩增贵阳腐霉基因片段,获得大小约的片段,与预期片段大小致。测序结果经比对与贵阳腐霉已知序列相同。按方法构建了以农业水利论文介导基因在腐霉的表达养再镜检,如有菌丝亦为感染。连续观察。感染蚊虫酚氧化酶的测定取贵阳腐霉转化株和野生株处理的蚊幼虫各只,加入的磷酸盐缓冲液,冰上研磨。多次离心,最终所得澄清液即为蚊虫粗酶液。酚氧化酶活性测定取粗提液,再加入。个酶活单位定等购自公司......”。

9、“.....端引入酶切位点菌株中,用于贵阳腐霉的遗传转化。生物测定灭蚊实验贵阳腐霉接种于培养后。取塑料杯,盛入水,加入只龄致倦库蚊幼虫和直径为的块菌丝块,加入滴兔肝粉悬液。设空白对照。每天观察次,取出死亡幼虫镜检,体内有菌丝者即为感染幼虫无菌丝者保湿培培养基甘油,蒸馏水定容至,高压灭菌,冷却后加入滤过除菌的和乙酰丁香酮。农业水利论文介导基因在腐霉的表达。主要试剂酶连接酶各限。分别以贵阳腐霉野生株和转化株基因组为模板进行扩增。条件,共个循环。蚊虫实验所用蚊幼虫为本实验室驯化后传代饲养的致倦库蚊。基因在贵阳腐霉的遗传转化按龙朝钦等方法稍改动。取含质粒的过夜培养物,用含的液体培养基振荡培养后......”。