1、“.....另方面,酵母独特的细胞壁和微体结构,可以为在其中表达的外源蛋。重组酵母菌的诱导表达及产物鉴定挑取阳性转化子接种到培养基中,培养至值至左右,离心收菌,重悬于培养基,封瓶膜封口。的条件下诱导培养,每补加的甲醇至终浓度,设臵电转空载体的菌株作为对照。诱导后,取菌液,离心收集菌体用灭菌双蒸水洗涤次,加入蜗牛酶与目的片段长度之和,如图。测序结果与公布的基因参考序列致,说明目的基因已正确克隆到酵母表达载体中。农业水利论文草鱼养殖论文草鱼病毒蛋白表达探究。电转酵母菌及转化子的筛选重组质粒经线性化,同时酶切空载体做对照,异丙醇沉淀回收。酵母感受态细胞的制备和电击,。经电击转化入酵母,电击后的菌液涂布在浓度分别为的平板上,培养。挑取在高浓度平板上生长良好的转化子采用方法筛选阳性转化子,反应条件同,扩增结束后进行的琼脂糖电泳分析......”。

2、“.....还有待于下步的鱼体实验。采用疫苗免疫的方法是预防草鱼出血病最为有效的途径之。目前用于防治草鱼出血病疫苗多采用浸泡和注射途径给予,不仅操作繁琐,而且引起鱼体应激反应。口服是种最自然的免疫途径,给药安全方便,使用不受时间地点和鱼体大小限制,对水生动物不引起应激反应。近年来,随着对鱼类黏膜免疫系统,尤的甲醇至终浓度,设臵电转空载体的菌株作为对照。诱导后,取菌液,离心收集菌体用灭菌双蒸水洗涤次,加入蜗牛酶等渗溶液蜗牛酶溶解于的山梨醇溶液,同时加入巯基乙醇,孵育,使酵母细胞壁破裂。离心后取裂解液上清沉淀悬浮液悬浮以及对照裂解液进行电泳检测。同时以常规饲料中通过口服途径免疫小鼠,结果诱导产生了高效价的中和抗体。等将的包膜蛋白和在毕赤酵母中表达后以口服的形式免疫小龙虾,免疫组获得了大于的免疫保护率。本实验利用基因工程技术,将抗原蛋白基因整合到高效表达的毕赤酵母中......”。

3、“.....但重组酵母工程菌的表达量及其对鱼体实验。采用疫苗免疫的方法是预防草鱼出血病最为有效的途径之。目前用于防治草鱼出血病疫苗多采用浸泡和注射途径给予,不仅操作繁琐,而且引起鱼体应激反应。口服是种最自然的免疫途径,给药安全方便,使用不受时间地点和鱼体大小限制,对水生动物不引起应激反应。近年来,随着对鱼类黏膜免疫系统,尤其是口服免疫应答机理的认识不醇添加量的条件下,诱导时重组菌株开始表达,诱导时重组酵母的表达量最高,为提高蛋白在毕赤酵母中的表达水平可以进步对温度值甲醇添加量等条件进行优化。等成功在酵母胞内载体中表达了登革病毒型包膜蛋白结构域,其蛋白表达量可达到,并将此重组酵母添加到饲料中通过口服途径免疫小鼠断增加,为口服疫苗的研制提供了理论基础。开展酵母载体表达草鱼呼肠孤病毒抗原蛋白技术的研究,可为草鱼出血病口服疫苗的制备提供新的思路重组酵母菌的诱导表达及产物鉴定挑取阳性转化子接种到培养基中......”。

4、“.....离心收菌,重悬于培养基,封瓶膜封口。的条件下诱导培养,每补讨论当蛋白在大肠杆菌系统中高效表达时,通常以不溶的包涵体形式存在,后期的溶解复性过程耗时费力,且复性率低而利用杆状病毒昆虫细胞表达系统表达时操作复杂表达水平低产业化生产昂贵。所以本实验研究了蛋白在毕赤酵母系统中的表达情况。另方面,酵母独特的细胞壁和微体结构,可以为在其中表达的外源蛋载体,经酶切和测序鉴定的重组质粒命名为,经转化大肠杆菌筛选鉴定后,含阳性重组质粒的大肠杆菌命名为。表达产物的和检测对经甲醇连续诱导的酵母培养物经离心和破壁处理,进行电泳检测,结果显示诱导后重组菌株的裂解上清在处有特异蛋裂解上清在处有特异蛋白条带,与天然蛋白的分子量相符图对照菌株中则无该条带诱导后重组菌株的沉淀悬浮液显示弱的蛋白条带。检测结果如图,重组酵母菌株表达的蛋白可与鼠抗草鱼呼肠孤病毒的多抗特异性结合......”。

5、“.....确证了表法进行反应,抗浓度为∶,辣根过氧化物酶标记的抗浓度为∶,化学发光底物显色。农业水利论文草鱼养殖论文草鱼病毒蛋白表达探究。电转酵母菌及转化子的筛选重组质粒经线性化,同时酶切空载体做对照,异丙醇沉淀回收。酵母感受态细胞的制备和电击转化法参考断增加,为口服疫苗的研制提供了理论基础。开展酵母载体表达草鱼呼肠孤病毒抗原蛋白技术的研究,可为草鱼出血病口服疫苗的制备提供新的思路重组酵母菌的诱导表达及产物鉴定挑取阳性转化子接种到培养基中,培养至值至左右,离心收菌,重悬于培养基,封瓶膜封口。的条件下诱导培养,每补体的免疫效果,还有待于下步的鱼体实验。采用疫苗免疫的方法是预防草鱼出血病最为有效的途径之。目前用于防治草鱼出血病疫苗多采用浸泡和注射途径给予,不仅操作繁琐,而且引起鱼体应激反应。口服是种最自然的免疫途径,给药安全方便,使用不受时间地点和鱼体大小限制......”。

6、“.....近年来,随着对鱼类黏膜免疫系统,尤过流式细胞仪分析表明在甲醇添加量的条件下,诱导时重组菌株开始表达,诱导时重组酵母的表达量最高,为提高蛋白在毕赤酵母中的表达水平可以进步对温度值甲醇添加量等条件进行优化。等成功在酵母胞内载体中表达了登革病毒型包膜蛋白结构域,其蛋白表达量可达到,并将此重组酵母添加到农业水利论文草鱼养殖论文草鱼病毒蛋白表达探究条带,与天然蛋白的分子量相符图对照菌株中则无该条带诱导后重组菌株的沉淀悬浮液显示弱的蛋白条带。检测结果如图,重组酵母菌株表达的蛋白可与鼠抗草鱼呼肠孤病毒的多抗特异性结合,在处出现单杂交条带而裂解后的细胞沉淀对照菌株则无杂交条带,确证了表达产物是蛋体的免疫效果,还有待于下步的鱼体实验。采用疫苗免疫的方法是预防草鱼出血病最为有效的途径之。目前用于防治草鱼出血病疫苗多采用浸泡和注射途径给予,不仅操作繁琐,而且引起鱼体应激反应......”。

7、“.....给药安全方便,使用不受时间地点和鱼体大小限制,对水生动物不引起应激反应。近年来,随着对鱼类黏膜免疫系统,尤酶切位点。细胞培养和增殖按参考文献进行。按说明书提取病毒总,通过逆转录聚合酶链式反应扩增基因。反应条件如下预变性变性,退火,延伸,个循环最后延伸。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后回收纯化,克隆到殖论文草鱼病毒蛋白表达探究。讨论当蛋白在大肠杆菌系统中高效表达时,通常以不溶的包涵体形式存在,后期的溶解复性过程耗时费力,且复性率低而利用杆状病毒昆虫细胞表达系统表达时操作复杂表达水平低产业化生产昂贵。所以本实验研究了蛋白在毕赤酵母系统中的表达情况。另方面,酵母独特的细胞壁和微体达产物是蛋白。基因的引物设计及扩增根据公布的株基因编码序列和酵母表达载体所含的酶切位点,应用软件设计对特异扩增引物,分别引入断增加,为口服疫苗的研制提供了理论基础。开展酵母载体表达草鱼呼肠孤病毒抗原蛋白技术的研究......”。

8、“.....培养至值至左右,离心收菌,重悬于培养基,封瓶膜封口。的条件下诱导培养,每补是口服免疫应答机理的认识不断增加,为口服疫苗的研制提供了理论基础。开展酵母载体表达草鱼呼肠孤病毒抗原蛋白技术的研究,可为草鱼出血病口服疫苗的制备提供新的思路表达产物的和检测对经甲醇连续诱导的酵母培养物经离心和破壁处理,进行电泳检测,结果显示诱导后重组菌株饲料中通过口服途径免疫小鼠,结果诱导产生了高效价的中和抗体。等将的包膜蛋白和在毕赤酵母中表达后以口服的形式免疫小龙虾,免疫组获得了大于的免疫保护率。本实验利用基因工程技术,将抗原蛋白基因整合到高效表达的毕赤酵母中,成功实现了蛋白在酵母菌中的表达,但重组酵母工程菌的表达量及其对蛋白提供种生物微囊,使其免受消化道蛋白酶的降解。本实验的诱导表达条件为的甲醇添加量......”。

9、“.....本实验室曾将基因整合到酵母表达载体多克隆位点区的和酶切位点间,并成功实现了其在酵母宿主菌中的表达,通过流式细胞仪分析表明在构,可以为在其中表达的外源蛋白提供种生物微囊,使其免受消化道蛋白酶的降解。本实验的诱导表达条件为的甲醇添加量,是根据增强绿色荧光蛋白在毕赤酵母中的表达情况初步确定的。本实验室曾将基因整合到酵母表达载体多克隆位点区的和酶切位点间,并成功实现了其在酵母宿主菌中的表达,农业水利论文草鱼养殖论文草鱼病毒蛋白表达探究体的免疫效果,还有待于下步的鱼体实验。采用疫苗免疫的方法是预防草鱼出血病最为有效的途径之。目前用于防治草鱼出血病疫苗多采用浸泡和注射途径给予,不仅操作繁琐,而且引起鱼体应激反应。口服是种最自然的免疫途径,给药安全方便,使用不受时间地点和鱼体大小限制,对水生动物不引起应激反应。近年来,随着对鱼类黏膜免疫系统......”。