收集菌膜，混悬于适宜的 灭菌保护液内，经冷冻干燥制成。冻干菌苗活菌数应在万以上。药品 要求严格控制潜在的污染，如以微粒微生物或内毒素的形式存在。微生物制药生产水平的高低与菌种的性能质量有直接关系，保持菌种活力是首要任务，还要 给与合适的环境条件使菌种的生产能力充分表达出来。随着医学模式从以治疗 疾病为主转向以预防疾病为主，接种疫苗成为最经济有效安全和方便的疾病 预防方式，世界疫苗行业发展迅猛。根据的研究，疫苗的使用可以有效降 低公共医疗保险的负担，平均在疫苗接种上每花费美元，约可节省医疗费用 达美元，大力推广疫苗接种能够有效降低节节升高的医疗成本。 项目的工艺路线 菌种传代检定培养特性毒力试验安全试验免疫力试验 生产培养培养段时间 收菌 合并 原液检定纯菌试验浓度测定 半成品配置稀释加速干保护剂检定纯菌试验浓度测定 分装及冻干 成品检定鉴别试验物理检查水分无菌试验活菌计数热稳定性试验效力试验 包装包装材料 入库 卡介苗生产工艺路线 卡介苗大多采用表面培养，少数采用深层培养。表面培养采用改良的苏通培养 基，培养温度，培养时间天，生产的卡介苗活力高，用培养 天的幼龄苗，有利于制备冻干制品，采用对数生长期的幼龄培养菌代替稳定期 的培养菌生产，可使活菌率由左右提高至。菌膜收集后压平，移 入盛有不锈钢珠瓶内，可加入适量稀释液，低温下研磨，研磨好的原液稀释成各 种浓度的菌苗。 制造过程 菌种 制造卡介苗的菌种，应由中国药品生物制品检定所分发或经同意。严 禁使用通过动物的菌种制造卡介苗。 如果采用次代种子批，单批收获培养物的总代数不得超过代包 括在马铃薯培养基上培育的代数与在液体苏通培养基上的代数。 菌种检定 新收到的菌种或新制备种子批应进行下列检定。 培养特性卡介菌在苏通培养基上发育良好。培育温度在之间。抗酸染色应为抗 酸杆菌。在苏通马铃薯培养基上发育的卡介菌应是干皱成团略呈浅黄色。在牛 胆汁马铃薯培养基上为浅灰色粘膏状菌苔。在鸡蛋培养基上有突起的皱型和扩 散型两类菌落，且带浅黄色。在苏通培养基上卡介菌应浮于表面，为多皱微带 黄色的菌膜。 毒力试验 用结素试验阴性，体重的同性健康豚鼠只，于肌 内侧皮下各注射菌液，注射前称体重，注射后每周观察次 注射部位及局部淋巴结的变化。每周称体重次。周时解剖只，满个 月将另只豚鼠解剂，检查各脏器应无肉眼可见的结核病变。若有可疑病灶时， 应作涂片和组织切片检查，并采取部分病灶磨碎，加少量生理盐水混匀，皮下 注射只豚鼠。若证明系结核病变，该菌种即应废弃。试验经过详细记录备查。 若未满个月试验豚鼠因其他病患死亡应解剖检查，依上法处理。若死亡只 以上应重试。 免疫力试验 用原代种子批以人份的剂量免疫豚鼠，以强毒人型结核分枝杆 菌感染，免疫组与对照组动物的病变指数及脾脏毒菌分离数的对数值经统计学 处理，应有显著差异。如无条件，可送中国药品生物制品检定所进行。 菌种保存 冻干菌种保存于。 菌苗制造 卡介苗制造室必须与其他生物制品部门及实验室分开。所需用具如高 压锅冰箱及玻璃器皿等，均须单独设置并专用。卡介苗制造包装及保存过 程均须避光。 卡介苗制造的工作人员及经常进入卡介苗制造室的人员，必须身体健康，经 线检查无结核病，且以后每年经线检查次，可疑者暂不在卡介苗制造室 工作，其检查记录必须保存备查。 制造用培养基 生产用培养基不得含有能使人产生毒性或变态反应的物质。培养基所用的原料 应符合中国生物制品主要原材料试行标准规定。 菌种传代与培养 冻干菌种在苏通马铃薯培养基胆汁马铃薯培养基以及液体苏通培养基上每传 次为代。马铃薯培养基上培育的菌种放冰箱保存不超过个月。用造成不能与结核菌感染相区别，从而降低纯蛋白衍 生物的诊断效率卡介苗是减毒活疫苗，不能用于感染个体进来研究显示致 病性结核杆菌的些编码抗原能够增强诱导保护性免疫，但卡介苗却缺少编码这些 抗原的基因，在卡介苗减毒和反复传代时缺少而导致免疫效果下降，加上结核杆菌 多重抗药株在许多国家包括中国明显增加，目前全国大约有万人感染的是 结核杆菌此外，我国城市农村来源的流动人口中，有部分人在儿童未接受卡 介苗免疫，致使现在对结核菌易感染。上述种种原因导致结核病发病率和死亡率居 高不下。因此，研制新型的有效疫苗对防治结核病已迫在眉睫。世界卫生组织认为 个理想的疫苗应具备的条件是价廉，让贫困地区或国家的人们有应用疫苗的支 付能力。耐热，翡冷链运输和保存可显著降低疫苗的应用成本。耐热的疫苗有更好 的稳定性。单次注射剂可产生保护，有研究表明，若种疫苗如乙肝疫苗需注射 针，注射完针的人数仅为注射针人数的。多价，针对病原体的多个表 位的疫苗会刺激更强的免疫应答。可经黏膜接种，对于经黏膜感染的病原体，能刺 激分泌型免疫球蛋白的疫苗会产生更好的预防作用。适合在生命的早期应用。 近期的发展趋势 目前进行重组疫苗营养缺陷型结核减毒活疫苗结核亚单位疫苗及结 核疫苗等的研究。然而卡介苗作为多年来使用被验证的疫苗，相对来说还是 很安全的，并且建立了定的基础，不会被轻易的取代。由于卡介苗具有经济性 等优点，因而在今后相当长的段时间内，其仍然会在全世界尤其是发展中国家 继续使用。新疫苗的回复突变率仍比较高，其安全性是最令人担忧的问题。当前 的研究方向技术难度大，短期内难以成功。寻求合适的佐剂也需要相当长的时间， 还有些生产过程中的操作关键也需要确定。在经过动物模型初步筛选后，结核 新疫苗还需进行Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期临床试验。上述这些都需要大量的时间去完成， 目前，卡介苗的市场还是非常可观的。 项目的技术成熟性 根据生物制品中的要求生产检定用设施原料及辅料水器具动物等应符 合凡例的有关要求。卡介苗生产车间必须与其他生物制品生产车间及实验室 分开所需设备及器具均须单独设置并专用卡几秒制造包装及保存过程均须避光。 从事卡介苗制造的工作人员及经常进入卡介苗制造室的人员必须身体健康经Χ 射线检查无结核病，为了控制好生产的技术过程，必须及时对各个阶段中间体进 行必要的分析，便于发现问题，及时采取有效措施，以指导生产和保证产品质量。 中间体的质量控制主要取决于中间体的性质。在发酵过程中各阶段中控制效价 总氮氨基氮总糖还原糖总磷溶解磷等变化和利用的情况。在提炼 过程中主要控制滤洗液萃取液洗脱液浓缩液精制液结晶液中间盐 废液等的质量。检查项目主要有效价色泽透光度水分灰分等。 根据国家药典规定，微生物制药产品般的常规检验项目有性状及鉴别试验酸 碱度澄清度水分纯度杂质灰分重金属安全试验热源试验降压 试验效价检定等。项目的产品成熟性 在实验室研究阶段，生产用的菌毒种的构建选用培养遗传稳定性生物组 织的选择有效成分的提取纯化及其理化特性生物特性的分析等研究，取得 制造和质量检定的基本条件和方法。 在小量试制阶段，根据实验研究结果，确定配方，建立制备工艺和检定方法，试 制小批量样品，进行临床安全性和有效性的实验，并制造与检定基本要求。 在中间试制阶段，生产工艺基本定型，产品质量和产率相对稳定，能放大生产 有产品质量标准检定方法保存稳定性资料，并有效测定效价用的参考品或对 照品提供自检和中国药品生物检定所复检合格，并能满足临床研究用量的连续 三批产品制定较完善的制造检定试行规程和使用说明书。 在试生产阶段，完善生产工艺和质量标准及其检定方法，同时按有关规定完成第 Ⅳ期临床试验制品长期稳定性研究和国家药品监督管理局要求进行的其他工 作。 项目产品的可靠性 众多的规定能确保疫苗的安全性和质量，从精确地起始材料到最后的允许疫苗出 厂。并且每批疫苗都要获得世界卫生组织资格认证的实验室进行单独检测，并由 世界卫生组织专家赴现场视察以确保疫苗和生产方法符合国际标准。还有随机检 测和定期再评估程序，以确保生产的持续质量。 从生产场所到使用地点，疫苗必须始终保持在最佳温度。世界卫生组织发表了关 于疫苗国际包装和运输的详细准则，包括检测表格的使用，例如运输物品到达目 的地时应填写疫苗到达报告。 在实际应用中应监测疫苗在大量目标人群常规使用状态下的各种情况，目的是发 现不良反应不良反应并监控有效性效力。对于偶发疾病及罕见疾病，需调查整 个群体以保证统计学的可信性，但般研究常局限于分组人群。多数情况下，采 取病例对照或观察性队列研究。疫苗的最佳应用些高危人群中有效性长期 效果和安全性监控。 进行安全性评价，发现临床试验中不常发生的长期或急性不良反应事件的途径。 发现在以前未能发现的极少数或非预测事件。 第三部分项目产品市场调查与竞争能力预测 项目产品的主要用途，目前主要使用领域的需求量 原用于预防结核，属特异性免疫制剂，后证明它还具有促进巨噬细胞吞噬功能的 作用，为非特异性免疫增强剂。现用于治疗恶性黑色素瘤，或在肺癌急性白血 病恶性淋巴瘤根治性手术或化疗后作为辅助治疗，均收到定疗效。此外，死 卡介苗还用于小儿哮喘性支气管炎的治疗小儿感冒的预防以及慢性气管炎 的防治。预防重于治疗，接种卡介苗可以使人体产生对结核病的抵抗力，以预防 结核病俗称肺痨。婴幼儿的抵抗力最弱，若受到了结核菌的感染，容易发生急 性结核病，如结核性脑膜炎，而危及生命，因此每个婴儿都定要接种卡介苗。 入伍新兵大学新生边远地区派出人员也应列为接种对象边远地区儿童和青少年 在进入城市之前个