乙酸相同，再用的氢氧化钠将乳酸和乙酸的均调为原发酵上清液，以无菌水为空白对照，大肠杆菌与金黄色葡萄球菌分别为指示菌，采用牛津杯法测定配制的乳酸和乙酸的抑菌活性。第二章唾液乳杆菌抑菌机制的研究发酵全液和发酵上清液的抑菌活性比较将指示菌的菌液用液体培养基稀释倍，再向试管中分别加入缓冲液重悬后的供试菌菌体发酵上清液发酵全液，加入的体积为稀释后的指示菌体积的七分之。将上述四支试管放入摇床中培养在和时分别对指示菌进行活菌计数。设加入缓冲液的指示菌液作为空白对照。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别为指示菌，唾液乳杆菌为供试菌。对发酵上清液抑菌活性的影响用的氢氧化钠和盐酸将发酵上清液的分别调为和，以原发酵上清液为空白对照，以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别为指示菌，唾液乳杆菌为供试菌，采用牛津杯法对发酵上清液进行抑菌活性的测定。蛋白酶消化对发酵上清液抑菌活性的影响用胰蛋白酶蛋白酶胃蛋白酶分别在最适下以用量的优化外部凝胶化钙离子浓度的优化内部凝胶化法海藻酸钠用量的优化内部凝胶化钙离子浓度的优化实验结果唾液乳杆菌冻干保护剂的筛选唾液乳杆菌益生元的筛选合生元微胶囊的工艺优化讨论目录液抑菌活性的影响讨论第三章合生元微胶囊工艺参数的优化前言实验材料实验菌株主要试剂仪器设备相关试剂与培养基的配制实验方法唾液乳杆菌冻干保护剂的筛选唾液乳杆菌益生元的筛选外部凝胶化海藻酸钠上清液抑菌活性的影响实验结果发酵上清液中主要有机酸含量及等同有机酸的抑菌活性发酵全液和发酵上清液的抑菌活性比较对发酵上清液抑菌活性的影响蛋白酶消化对发酵上清液抑菌活性的影响过氧化氢酶处理对发酵上清液的制备目录供试菌菌体的制备发酵上清液中主要有机酸含量及等同有机酸的抑菌活性发酵全液和发酵上清液的抑菌活性比较对发酵上清液抑菌活性的影响蛋白酶消化对发酵上清液抑菌活性的影响过氧化氢酶处理对发酵的常用壁材乳化内部凝胶化技术制备微胶囊外部凝胶化技术制备微胶囊展望第二章唾液乳杆菌抑菌机制的研究前言实验材料实验菌株主要试剂器材与仪器设备相关试剂与培养基的配制实验方法菌种培养供试菌发酵上清目录目录摘要目录第章引言概述乳酸杆菌代谢产物及其作用有机酸细菌素过氧化氢常见的冻干保护剂及保护机理常见的益生元合生元的定义及特点微胶囊技术微胶囊技术的定义及作用微胶囊目录目录摘要目录第章引言概述乳酸杆菌代谢产物及其作用有机酸细菌素过氧化氢常见的冻干保护剂及保护机理常见的益生元合生元的定义及特点微胶囊技术微胶囊技术的定义及作用微胶囊的常用壁材乳化内部凝胶化技术制备微胶囊外部凝胶化技术制备微胶囊展望第二章唾液乳杆菌抑菌机制的研究前言实验材料实验菌株主要试剂器材与仪器设备相关试剂与培养基的配制实验方法菌种培养供试菌发酵上清液的制备目录供试菌菌体的制备发酵上清液中主要有机酸含量及等同有机酸的抑菌活性发酵全液和发酵上清液的抑菌活性比较对发酵上清液抑菌活性的影响蛋白酶消化对发酵上清液抑菌活性的影响过氧化氢酶处理对发酵上清液抑菌活性的影响实验结果发酵上清液中主要有机酸含量及等同有机酸的抑菌活性发酵全液和发酵上清液的抑菌活性比较对发酵上清液抑菌活性的影响蛋白酶消化对发酵上清液抑菌活性的影响过氧化氢酶处理对发酵上清液抑菌活性的影响讨论第三章合生元微胶囊工艺参数的优化前言实验材料实验菌株主要试剂仪器设备相关试剂与培养基的配制实验方法唾液乳杆菌冻干保护剂的筛选唾液乳杆菌益生元的筛选外部凝胶化海藻酸钠用量的优化外部凝胶化钙离子浓度的优化内部凝胶化法海藻酸钠用量的优化内部凝胶化钙离子浓度的优化实验结果唾液乳杆菌冻干保护剂的筛选唾液乳杆菌益生元的筛选合生元微胶囊的工艺优化讨论目录第四章两种微胶囊性能的评价前言实验材料实验菌株主要试剂仪器设备培养基配制方法实验方法外部凝胶化制备合生元微胶囊外部凝胶化微胶囊耐模拟胃液分析外部凝胶化微胶囊耐胆盐分析外部凝胶化微胶囊存储期内部凝胶化制备合生元微胶囊内部凝胶化微胶囊耐模拟胃液分析内部凝胶化微胶囊耐胆盐分析内部凝胶化微胶囊存储期未包埋菌耐模拟胃液分析未包埋菌耐胆盐分析未包埋菌冻干后的存储期实验结果微胶囊的形态和大小分布微胶囊耐模拟胃液耐胆盐分析微胶囊存储期的评价讨论第五章结论与展望结论展望参考文献攻读学位期间的研究成果第章引言第章引言概述乳酸杆菌广泛存在于自然界中，是类应用于食品工业的革兰氏阳性菌。乳酸杆菌能够发酵碳水化合物蛋白质脂类等宝科技有限公司过氧化氢酶酶活力北京索莱宝科技有限公司蛋白酶酶活力美国公司胃蛋白酶酶活力公司乳酸西陇化工股份有限公司乙酸天津市永大化学试剂有限公司西陇化工股份有限公司国药集团化学试剂有限公司器材与仪器设备牛津杯内径，外径，高，直尺，平板，涂布棒等。立式蒸汽压力锅上海博迅实业有限公司医疗设备厂酸度计成都世纪方舟科技有限公司厌氧培养箱上海华辰医用仪表有限公司恒温培养振荡器上海智城分析仪器制造有限公司恒温水浴锅江苏金坛市中大仪器厂微量高速离心机湖南湘仪实验室仪器开发有限公司相关试剂与培养基的配制液体培养基取粉末，调节左右，加蒸馏水定容至，高压灭菌。固体培养基取粉末，调节左右，加琼脂粉末，加蒸馏水定容至，高压灭菌。液体培养基称取胰蛋白胨酵母提取物，调节左右，加蒸馏水定容至，高压灭菌。第二章唾液乳杆菌抑菌机制的研究固体培养基称取胰蛋白胨酵母提取物，调节左右，加琼脂粉末，加蒸馏水定容至，高压灭菌。缓冲液取，。加超纯水定容至，调节，高压灭菌。实验方法菌种培养实验所用菌株首先在固体培养基上划线，然后挑取菌株单菌落，接到液体培养基中培养，进行两次活化。唾液乳杆菌采用的接种量转接至液体培养基中，厌氧培养，所得菌液即为供试菌发酵全液。大肠杆菌与金黄色葡萄球菌采用的接种量转接至液体培养基中，摇床中培养，所得菌液即为指示菌菌液。供试菌发酵上清液的制备将供试菌菌液进行离心，离心，取上清液，将上清液经过微孔滤膜过滤，收集滤液即为供试菌发酵上清液。供试菌菌体的制备将离心后的菌体沉淀用缓冲液洗涤两遍，然后再用缓冲液将菌体重悬成原浓度，即为重悬后的供试菌菌体。发酵上清液中主要有机酸含量及等同有机酸的抑菌活性采用高效液相色谱仪分析发酵上清液中的有机酸种类及含量。配制定浓度的乳酸和乙酸，使其浓度分别与发酵上清液中的乳酸和乙酸相同，再用的氢氧化钠将乳酸和乙酸的均调为原发酵上清液，以无菌水为空白对照，大肠杆菌与金黄色葡萄球菌分别为指示菌，采用牛津杯法测定配制的乳酸和乙酸的抑菌活性。第二章唾液乳杆菌抑菌机制的研究发酵全液和发酵上清液的抑菌活性比较将指示菌的菌液用液体培养基稀释倍，再向试管中分别加入缓冲液重悬后的供试菌菌体发酵上清液发酵全液，加入的体积为稀释后的指示菌体积的七分之。将上述四支试管放入摇床中培养在和时分别对指示菌进行活菌计数。设加入缓冲液的指示菌液作为空白对照。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别为指示菌，唾液乳杆菌为供试菌。对发酵上清液抑菌活性的影响用的氢氧化钠和盐酸将发酵上清液的分别调为和，以原发酵上清液为空白对照，以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别为指示菌，唾液乳杆菌为供试菌，采用牛津杯法对发酵上清液进行抑菌活性的测定。蛋白酶消化对发酵上清液抑菌活性的影响用胰蛋白酶蛋白酶胃蛋白酶分别在最适下以的酶浓度处理发酵上清液，水浴，处理后将发酵上清液均调回原发酵上清液。设不加酶的发酵上清液为空白对照，相同方法处理。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别为指示菌，唾液乳杆菌为供试菌，采用牛津杯法对发酵上清液进行抑菌活性的测定。过氧化氢酶处理对发酵上清液抑菌活性的影响将发酵上清液的调为过氧化氢酶的最适，再向其中加入过氧化氢酶，使其终浓度为，水浴，处理后将发酵上清液调回原发酵上清液。设不加酶的发酵上清液为空白对照，相同方法处理。大肠杆菌与金黄色葡萄球菌分别为指示菌，唾液乳杆菌为供试菌，采用牛津杯法对发酵上清液进行抑菌活性的测定。实验结果第二章唾液乳杆菌抑菌机制的研究发酵上清液中主要有机酸含量及等同有机酸的抑菌活性唾液乳杆菌发酵上清液中主要有机酸色谱图见图，保留时间为的峰为乳酸，浓度为，保留时间为的峰为乙酸，浓度为。与发酵上清液相同浓度的乳酸和乙酸的抑菌活性见图，与对照组比较分析，乳酸和乙酸对两种指示菌都有较强的抑菌活性，且乙酸对两种指示菌的抑菌活性要强于乳酸。图唾液乳杆菌发酵上清液中有机酸的高效液相色谱图图与唾液乳杆菌发酵上清液等同浓度的乳酸和乙酸的抑菌活性发酵全液和发酵上清液的抑菌活性比较唾液乳杆菌发酵全液和发酵上清液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性如图所示，与对照组相比，发酵全液和发酵上清液均第二章唾液乳杆菌抑菌机制的研究具有显著的抑菌作用，且发酵全液的抑菌性能优于发酵上清液，而唾液乳杆菌菌体无抑菌作用。值得注意的是，大肠杆菌表现出对发酵全液的极度敏感，共培养后，几乎不能被检出。研究结果提示，唾液乳杆菌的抑菌活性主要来自于发酵上清液中的代谢产物，菌体的存在可增强其抑菌性能。图唾液乳杆菌发酵全液和发酵上清液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性对发酵上清液抑菌活性的影响对发酵上清液抑菌活性的影响见图，与对照组比较，发酵上清液的值为时，对大肠杆菌的抑菌活性显著增强，对金黄色葡萄球菌的抑菌活性并无显著增强 ˃，且发酵上清液随着的升高，抑菌活性降低。第二章唾液乳杆菌抑菌机制的研究图对唾液乳杆菌发酵上清液抑菌活性的影响蛋白酶消化对发酵上清液抑菌活性的影响蛋白酶消化发酵上清液后的抑菌活性见图，与对照组相比，三种蛋白酶消化后的发酵上清液对两种指示菌的抑菌活性均减弱，且抑菌活性相当。推测发酵上清液中的抑菌物质含有细菌素蛋白或多肽类物质。图蛋白酶消化对唾液乳杆菌发酵上清液抑菌活性的影响过氧化氢酶处理对发酵上清液抑菌活性的影响过氧化氢酶处理对发酵上清液抑菌活性的影响见图，与对照组相比，处理后的发酵上清液对两种指示菌的抑菌活性明显减弱。提示过氧化氢酶可分解发酵上清液中的过氧化氢，减弱发酵上清液的抑菌活性。第二章唾液乳杆菌抑菌机制的研究图过氧化氢酶处理对唾液乳杆菌发酵上清液抑菌活性的影响讨论益生菌是人体胃肠道及妇女阴道维持微生态平衡的个重要因素，其来源于机体本身，并经过相应的功能系统评价，方可使用。本文证实了唾液乳杆菌产生的有机酸乳酸和乙酸，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌两株致病菌具有较强的抑菌活性，菌体可增强发酵上清液的抑菌活性。