液中进行，需提供模板分别与两条模板链相结合的两种引物四种脱氧核苷酸耐热的聚合酶。过程通过控制温度使复制在体外反复进行，每个循环包括变性复性延伸。血红蛋白的提取和分离凝胶色谱法根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。电泳法利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。植物有效成分的提取植物芳香油的提取方法压榨法蒸馏法和萃取法等。芳香油的性质不溶于水，易溶于有机溶剂，因此可用有机溶剂作为提取剂来提取芳香油。胡萝卜素的性质是橘黄色结晶，从胡萝卜中提取胡萝卜素，常用亲脂水不溶性有机溶剂或有机溶剂作萃取剂。胡萝卜素的提取方法萃取法。胡萝卜素的鉴定纸层析法，在鉴定过程中需要用标准样品对照。考点和蛋白质技术与蛋白质在物理化学性质方面的差异比较项目蛋白质溶解性溶液中溶解析出溶液中析出溶解酒精溶液中析出溶解比较项目蛋白质耐受性蛋白酶无影响水解高温以上变性不能忍受的高温鉴定方法在沸水浴条件下与二苯胺反应呈蓝色与双缩脲试剂反应呈紫色比较细胞内复制与体外扩增项目复制不同点场所细胞内细胞外能量提供能量不需提供能量酶解旋酶聚合酶耐高温的聚合酶是否有转录伴有转录，产生引物无转录，需加入两种引物项目复制不同点特点边解旋边复制，半保留复制体外迅速扩增循环次数受生物体自身控制三十多次缓冲溶液不需要需要人为控制设备无严格控制温度变化的温控设备项目复制相同点原料四种脱氧核苷酸复制原理严格遵循碱基互补配对原则模板为模板引物都需要与模板相结合的引物血红蛋白的提取和分离凝胶色谱法蛋白质比较项目相对分子质量大相对分子质量小移动位置凝胶颗粒外部凝胶颗粒内部移动路程短长移动速度快慢洗脱次序先后主要实验步骤及意义红细胞的洗涤去除杂蛋白等样品处理释放血红蛋白红细胞吸水破裂分离血红蛋白离心处理，获得血红蛋白溶液方法透析目的除去样品中相对分子质量较小的杂质粗分离方法凝胶色谱法目的根据蛋白质的相对分子质量大小去除杂蛋白方法聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率取决于蛋白质分子的大小纯度鉴定纯化提分技法凝胶色谱法和电泳法分离蛋白质的方法分析凝胶色谱法只看蛋白质的相对分子质量大小，先洗脱出来的相对分子质量大。电泳法。特点移动速度由多种因素共同决定，包括待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小形状的不同。常用方法聚丙烯酰胺凝胶电泳，带电性质和电量主要取决于聚丙烯酰胺凝胶颗粒，分离效果只看蛋白质的相对分子质量大小。考题回访广东高考改编地中海贫血症属于常染色体遗传病。对夫妇生有位重型地中海贫血症患儿，分析发现，患儿血红蛋白链第位氨基酸的编码序列发生了点突变。用扩增包含该位点的段片段，突变序列的扩增片段可用种限制酶酶切为大小不同的两个片段和但正常序列的扩增片段不能被该酶酶切，如图。目前患儿母亲再次怀孕，并接受了产前基因诊断。家庭成员及胎儿的扩增产物酶切电泳带型示意图见图。终止密码子为。在获得单链模板的方式上，扩增与体内复制不同，前者通过解开双链，后者通过解开双链。据图分析，胎儿的基因型是基因用表示。患儿患病可能的原因是的原始生殖细胞通过过程产生配子时，发生了基因突变从基因表达水平分析，其患病是由于。解题指南题干关键信息突变序列的扩增片段可用种限制酶酶切为大小不同的两个片段和，但正常序列的扩增片段不能被该酶酶切。题干隐含信息不同片段经电泳后位置不同。图中隐含信息胎儿既有正常序列，也有突变序列。解析是体外扩增的方式，通过高温使双链解开，体内的复制则是通过解旋酶使双链解开。由题意可知重型地中海贫血症是隐性遗传病，突变后的序列可以被剪切成和两个片段，而正常序列无法被剪切，因此母亲父亲患儿和胎儿的基因型分别为和。母亲和父亲的基因型为和，生下患儿可能是因为母亲的原始生殖细胞通过减数分裂产生配子时发生了基因突变。由图可知，该突变为由模板链上的突变成段等。西安模拟血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中和部分的运输。请根据血红蛋白的提取和分离回答问题凝胶色谱法的基本原理是根据分离蛋白质的有效方法。洗涤红细胞的目的是去除，洗涤次数过少，无法除去离心速度过高和时间过长会使等同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是。释放血红蛋白的过程中起作用的是。洗脱的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体填“相同”或“不同”，洗脱时，对洗脱液的流速要求是。在洗脱过程中加入物质的量浓度为的磷酸缓冲液为的目的是，如果红色区带，说明色谱柱制作成功。解题指南关键词“洗涤红细胞”“离心速度”“释放血红蛋白”。隐含信息红色区带为血红蛋白。解析凝胶色谱法是根据蛋白质的相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。洗涤红细胞的目的是去除血浆蛋白等杂蛋白，如果洗涤次数过少，无法除去血浆蛋白离心速度过高和时间过长会使白细胞等同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是离心后的上清液中没有黄色。释放血红蛋白的过程中起作用的是蒸馏水和甲苯，其中蒸馏水的作用是使红细胞吸水破裂，甲苯可溶解细胞膜，加入甲苯能加速红细胞破裂并释放血红蛋白。洗脱的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体相同，否则会影响洗脱液的，使蛋白质的结构受到破坏。洗脱时，洗脱液的流速要保持稳定，否则将影响蛋白质的分离效果。在洗脱过程中加入物质的量浓度为的磷酸缓冲液为的目的是准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的和体内的致，进而保持蛋白质的正常形态结构洗脱时，血红蛋白的颜色可以指示血红蛋白的位置，因此当红色区带均匀致地移动时，说明色谱柱制作成功。答案相对分子质量的大小杂蛋白血浆蛋白血浆蛋白白细胞离心后的上清液中没有黄色蒸馏水和甲苯相同保持稳定准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的和体内的致均匀致地移动延伸探究在血红蛋白的提取过程中，哪些过程能影响血红蛋白提取的纯度提示细胞的洗涤次数次数少，不能除去血浆蛋白。离心速度和时间离心速度过高和时间过长，会使白细胞等同沉淀，得不到纯净的红细胞。透析透析不彻底，会含有小分子杂质。色谱柱的装填不能存在气泡，若存在气泡，则会降低分离效果。洗脱洗脱液的流速要保持稳定，否则将影响蛋白质的分离效果。临沂模拟生物兴趣小组开展粗提取的相关探究活动。具体步骤如下材料处理称取新鲜的花菜辣椒和蒜黄各份，每份。剪碎后分成两组，组置于，另组置于条件下，保存。粗提取第步将上述材料分别放入研钵中，各加入研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。第二步先向只小烧杯中分别注入滤液，再加入体积分数为的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。第三步取支试管，分别加入等量的的溶液溶解上述絮状物。检测在上述试管中各加入二苯胺试剂。混合均匀后，置于沸水中加热，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表。材料保存温度花菜辣椒蒜黄注越多表示蓝色越深分析上述实验过程，回答下列问题该探究性实验课题名称是。第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少。根据实验结果，得出结论并分析。结论与相比，相同实验材料在条件下保存，的提取量较多。结论。针对结论，请提出合理的解释。氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和均不相溶，且对影响极小。为了进步提高纯度，依据氯仿的特性，在粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是。然后用体积分数为的冷酒精溶液使析出。解析本题考查粗提取技术的原理操作过程及分析判断能力，从题目实验步骤看出，该实验的课题是探究不同材料和不同保存温度对提取量的影响。在第二步中，为了防止断裂，要缓缓地搅拌从表中结果看出，由于低温抑制了相关酶的活性，降解慢，使得相同材料在低温保存下的提取量大在相同条件下，蒜黄蓝色最深，说明相同条件下从蒜黄中提取的量最大由于氯仿密度比水大，可使蛋白质变性沉淀，而与水不相溶，这样可将第三步获得的溶液与等量的氯仿混合，静置段时间，吸取上清液。答案探究不同材料和不同保存温度对提取量的影响断裂等质量的不同实验材料，在相同的保存温度下，从蒜黄提取的量最多低温抑制了相关酶的活性，降解速度慢将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合，静置段时间，吸取上清液知识总结粗提取实验的相关提醒制备鸡血细胞液时，要注意向鸡血中加柠檬酸钠，防止血液凝固。涨破细胞的方法向血细胞中加入蒸馏水，血细胞溶液的浓度大于蒸馏水的浓度，从而使血细胞大量吸水而涨破。不能用生理盐水，因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度相当，所以血细胞在生理盐水中不能吸收水分。两次加入蒸馏水，第次是为了使血细胞吸水涨破第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于的析出。两次析出的方法第次是加入蒸馏水，降低氯化钠的浓度，使析出第二次是加入冷酒精溶液，因为不溶于酒精溶液。加固训练凝胶色谱技术是种快速而又简单的分离技术，对高分子物质有很好的分离效果，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。请据图回答问题均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是，原因是。自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部位置相当于多孔板的结构可由替代。装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是。若选用，则表示，表示。解析用凝胶色谱技术分离各种不同蛋白质时，相对分子质量较大的物质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，所以向下移动的速度较快。相对分子质量较小的物质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，所以大分子物质先洗脱出来。制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部位置相当于多孔板的结构可由尼龙网和尼龙纱替代。在色谱柱中装填凝胶的时候要尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。是在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。二是凝胶色谱操作过程中，不能发生洗脱液流干露出凝胶颗粒的现象。旦发生上述两种情况，凝胶色谱柱需要重新装填。专题生物技术在其他方面的应用考纲考情三年考高考指数从生物材料中提取些特定的成分蛋白质的提取和分离技术的基本操作和应用的粗提取与鉴定三年考题年考山东，江苏年考山东，江苏，江苏，广东，北京，安徽，海南，四川，四川年考山东，江苏考情播报考查内容主要考查的粗提取与鉴定技术的应用蛋白质的提取和分离植物有效成分的提取等知识。考查方式通常以多知识点结合的方式考查综合分析问题的能力，如考查植物有效成分的提取时，会结合微生物的培养与应用植物组织培养等知识，考查蛋白质的提取和分离时会结合微生物的培养与应用酶的研究与应用等知识。考查题型江苏生物单科卷中多以选择题的形式出现，广东四川卷中以选择题的个别选项的形式出现，其他省份的理科综合卷多以道非选择题的形式出现，属中低档题。知识梳理和蛋白质技术的粗提取与鉴定基本原理利用与蛋白质和脂质等在方面的差异，提取，去除其他成分。的粗提取原理。和蛋白质等其他成分在不同浓度的溶液中不同。在溶液浓度为时，的溶解度最小。不溶于溶液，但是细胞中的些蛋白质则溶于酒精溶液。物理和化学性质溶解度酒精主要步骤及注意事项实验材料的选取破碎细胞选用含量相对较高的生物组织动物材料更容易加入蒸