酮类药物耐药的贡献通过基因序列分析，检测细菌喹诺酮类耐药决定区中基因编码合成拓扑异构酶Ⅳ亚单位以及基因编码合成促旋酶亚单位的突变位点设计引物，通过普通方法依次筛选氟喹诺酮类药物敏感性下降耐药菌中介菌菌株中的种基因和分子杂交技术研究基因在金黄色葡萄球菌中的分子定位脉冲场凝胶电泳和多克隆位点序列分型方法，研究携带基因的金黄色葡萄球菌的同源性以及基因的流行性。温州医科大学硕士学位论文结果本次研究共收集年月年月三年间温州医科大学附属第医院临床送检标本中分离到的非重复金黄色葡萄球菌株，其中以痰液标本为主，占，其余依次为血液，伤口分泌物，脓液，尿液，导管流出液，引流液,腹水，以及敷料等其他标本,。株金黄色葡萄球菌对临床常见几类抗菌药物敏感性最好的是万古霉素和利奈唑胺，敏感率均达到其次为呋喃妥因敏感率为，和复方新诺明敏感率为而耐药率最高的为青霉素敏感率仅有其次为红霉素敏感率为四环素利福平环丙沙星左氧氟沙星莫西沙星的耐药率也均在以上。株氟喹诺酮类药物敏感性下降的金黄色葡萄球菌中含有基因的菌株有株含有基因的菌株有株，其中株同时携带这两种基因，未发现其他类型基因。在氟喹诺酮类药物敏感性下降的菌株中选取株菌其中包括携带基因菌株株进行外排泵筛选实验，其中有株在含有的喹诺酮类药物混合琼脂平板上的值比喹诺酮类单药琼脂平板上的值下降超过倍包括倍。其余株菌在混合药物平板和单药平板上对喹诺酮类药物的值下降不明显。选取的这株喹诺酮类药物敏感性下降菌株染色体上的拓扑异构酶Ⅳ编码基因只有个突变位点，且全部为，引起的氨基酸改变为促旋酶编码基因在多个碱基位置发生突变，其中有株有株有株有株有株，引起的氨基酸改变依次是。分子杂交实验中，基因探针在质粒图谱膜上没有任何杂交信号，而在混合基因组电泳产物转移膜上出现杂交信号。脉冲场凝胶电泳发现这些基因具有较高同源性，株阳性金黄色葡萄球菌分为个克隆型，主要克隆有株，均为克隆克隆有株，全部为型克隆株，为型株阳性菌株均为同个克隆，且全部为克隆型。温州医科大学硕士学位论文结论临床分离的金黄色葡萄球菌对目前常见的几类抗菌药物不同程度耐药，但是对万古霉素利奈唑胺以及氟喹诺酮类环丙沙星左氧氟沙星抗菌药物具有良好的敏感性，仍然可以作为临床上治疗金黄色葡萄球菌感染的首选用药之。细菌外排泵机制在金黄色葡萄球菌对喹诺酮类药物的耐药产生过程中扮演了定作用。临床上分离的金黄色葡萄球菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制主要是细菌拓扑异构酶Ⅳ亚单位在第位的氨基酸变化和促旋酶亚单位在第位第位第位的氨基酸变化。这是本实验室继社区获得性金黄色葡萄球菌中发现基因以来，首次在临床住院病人标本分离的金黄色葡萄球菌中检测到喹诺酮类耐药基因和。本次研究发现的和基因可能都是位于金黄色葡萄球菌的染色体结构上，并且这些和阳性菌株在进化水平上都分别具有很高的同源性，显示条带十分接近，且几乎为亚洲流行克隆型,未来可能会在金黄色葡萄球菌中流行。关键词金黄色葡萄球菌耐药性喹诺酮类外排泵脉冲场凝胶电泳多克隆序列分型温州医科大学硕士学位论文,血液，伤口分泌物，脓液，尿液，导管流出液，引流液,腹水，以及敷料等其他标本见图。此外，年年年每年分离的标本类型中，最多的均是痰液，其他的标本类型有些微小差异，见图。温州医科大学硕士学位论文图株金黄色葡萄球菌临床标本分布情况图年金黄色葡萄球菌临床标本分布情况图金黄色葡萄球菌的科室分布情况温州医科大学硕士学位论文株金黄色葡萄球菌的科室来源分布株金黄色葡萄球菌主要来源于神经外科株其次为病房株烧伤科株皮肤科株肾内免疫科株血液透析室株神经内科株，还有心内科呼吸科以及呼吸病房等多个科室,见图。每年菌株来源的科室分布也有定的差异，年主要来源是神经外科，其次是病房烧伤外科和皮肤科年的主要来源是病房，其次是神经外科年的主要来源是神经外科，其次是病房和烧伤伤外科。金黄色葡萄球菌耐药现状分析年年三年间株金黄色葡萄球菌耐药情况见表表期间临床分离金黄色葡萄球菌耐药情况年份年菌株株年菌株株年菌株株合计株耐药菌耐药率耐药菌耐药率耐药菌耐药率耐药菌耐药率青霉素头孢西丁复方新诺明呋喃妥因红霉素四环素左氧氟沙星环丙沙星莫西沙星利福平庆大霉素万古霉素利奈唑胺从表可以发现，本院近三年来不同病区病人体内分离的金黄色葡萄球菌对头孢西丁表现为耐药的菌株占，即菌株占本次研究菌株的。株金黄色葡萄球菌中，对内酰胺类抗生素青霉素的耐药性最为严重，耐药率高达。其次红霉素庆大霉素环丙沙星四环素的耐药率依次达到和，对其他些抗菌药物比如左氧氟沙星莫西沙星利福平等耐药率也都在以上，但是对糖肽类抗生素万古霉素恶唑烷酮类抗生素利奈唑胺全部表现为敏感，对呋喃妥因复方新诺明的耐药率仅分别为和。耐药率抗菌药物温州医科大学硕士学位论文年年金黄色葡萄球菌耐药率变化情况见图图年年金黄色葡萄球菌耐药率变迁情况从以上的图中可以发现，本次研究的种抗菌药物中，年分离的金黄色葡萄球菌对其中的种抗菌药物的耐药率较年和年的耐药率都要低或者相同，只有红霉素和青霉素的耐药率在逐年攀升，同时莫西沙星耐药率逐年降低。分析与讨论金黄色葡萄球菌是社区获得性感染和医院感染最常见的病原菌之，可引起各种类型感染，包括皮肤和软组织感染呼吸道感染泌尿道感染血液感染等，常见的临床分离标本主要有痰脓尿血液和伤口分泌物等。年中国细菌耐药性检测结果显示，年收集全国主要地区的家教学医院共株细菌，标本来源前四个依次是痰液尿液血液和脓液。年中国细菌耐药性监测结果显示，国内主要地区的家医院共株分离细菌中，结果发现主要的标本来源也是痰液尿液血液和脓液标本，而本次研究的株金黄色葡萄球菌最主要来源是痰液标本，占，其次是的血液标本和的伤口分泌物标本，这些结果与近两年来的中国统计结果有相同点,主要标本来源都是痰液等呼吸道标本，这可能与标本的获取途径有关，痰液标本与其他标本相比，采集较为方便。不同的是本次研究中尿液标本来源菌株数量很少，这可能与本次研究标本病区来源相关，本次研究的标本主要来自病房神经外科等，很少来自泌尿外温州医科大学硕士学位论文科肾内科等病区。从标本来源看，本院分离的金黄色葡萄球菌主要还是导致上呼吸道等呼吸系统的感染，其次是各病区的化脓性感染，以及由金黄色葡萄球菌导致的血流感染，本次研究来自皮肤科的金黄色葡萄球菌在所以标本类型中位于第四位，表明皮肤等软组织感染不容忽视。然而有趣的是，虽然本次研究标本主要来源于痰液等呼吸道标本，但从科室分布来看，最主要的分布科室并不是呼吸内科传染科等呼吸道感染相关科室，这可能与患者入院的首发症状有关或者导管相关，尤其是病房，昏迷病人会定期有吸痰，避免痰液堵塞呼吸道也可能与患者首发症状有关，多数患者因为咳嗽等非特异性临床症状入院，痰液检查几乎是必不可少。当然，这些与痰液标本的取材方便有关。与国内关于金葡菌感染的标本类型符合,。株金黄色葡萄球菌中，来自重症监护室神经外科病房以及创伤外科的共占到了，其中单是神经外科病房分离的金葡菌几乎占，这些数据表明，本院的金黄色葡萄球菌在些病区，尤其是在神经外科重症监护室以及烧伤外科可能存在耐药株的集中播散，应该引起院感等医院管理部门的重视，这些数据表明，医院感染控制部门应该对以上这些可能存在耐药株播散的病区做相关的流行病学调查，探明耐药菌株的播散途径以及传染源，从而切断耐药克隆的播散，防止耐药克隆在同个病区的暴发流行，给治疗带来困难,。本次研究的株金黄色葡萄球对种常见抗菌药物的耐药性结果表明，目前本院针对金黄色葡萄球菌感染最为有效的药物依旧是糖肽类抗生素万古霉素和恶唑烷酮类抗菌药物利奈唑胺，目前是没有发现耐药菌株，这与近年中国关于金黄色葡萄球菌的耐药特征基本是吻合的,。其次对呋喃妥因和磺胺类药物复方新诺明的耐药率也都在以下，本次研究发现金黄色葡萄球菌对复方新诺明耐药率总的趋势在下降，这与年年中国网报道的结果相似，可见在日益增强的耐药大背景下，磺胺类药物的耐药形势却在逐年好转，这可能与规范用药有关，另方面说明，复方新诺明联合治疗应该会对金葡菌感染达到有效控制。耐药率最高的为青霉素耐药率达，其次是红霉素耐药率庆大霉素耐药率等，发现对氟喹诺酮类药物虽然耐药率也达到了，但不管从副作用还是从经济上考虑，相对于其他类型的抗菌药物，氟喹诺酮类药物在治疗金葡菌感染中还有定的优势可以联合磺胺类药物或者糖肽类抗生素使用。细菌在药物选择条件下，自然就会产生耐药菌株以适应药物环境的影响，这也是符合生物进化般规律的，所以不能完全阻止耐药菌株的产生。统计结果显示，金黄色葡萄球菌的耐药情况已十分严重，而且新的抗菌药物开发应用远远赶不上细菌耐药步伐，面对严峻的耐药现状，抗菌药物管理部门医院感温州医科大学硕士学位论文染控制部门以及线用药的临床医生应该相互沟通，制定严格的药物使用制度，临床医生应该减少抗生素的预防性使用，防止抗生素滥用，从而减少耐药菌株的压力选择，另外，在指导合理选择抗菌药物方面，临床微生物检验实验室应发挥积极作用，在确保体外药敏试验准确的同时，也要与临床科室建立种良好的沟通制度，最后就是要进行耐药机制的研究，减少诱导耐药的发生和耐药性的播散。第二部分金黄色葡萄球菌对喹诺酮类抗菌药物耐药机制研究随着临床对喹诺酮类药物的依赖和大量使用，喹诺酮类药物耐药形势日趋严峻，限制了喹诺酮类药物的临床使用及疗效。目前关于细菌喹诺酮类耐药机制包括两大方面细菌染色体耐药决定区的基因突变和质粒介导的喹诺酮类耐药。但不同的菌属，耐药机制也存在些差异，金黄色葡萄球菌对喹诺酮类药物主要存在以下三方面的耐药机制第是细菌染色体上喹诺酮耐药决定区旋转酶亚单位和的编码基因和以及拓扑异构酶Ⅳ亚单位和的编码基因和的突变，从而降低喹诺酮类药物与细菌有效结合，目前大量报道发现