平采用荧光定量法测定水平。结果表明松果菊苷作用细胞天后，在和浓度下能显著抑制和表达，其最高抑制率分别为和同时对也具有抑制作用。松果菊苷对转基因小鼠表达的影响以转基因小鼠为模型，研究松果菊苷的体内抗作用。将只转基因小鼠随机分为组对照组拉米夫定组大剂量松果菊苷组中剂量松果菊苷组和小剂量松果菊苷组。每天灌胃给药次，对照组小鼠给予等剂量的生理盐水，连续给药天。第天小鼠眼眶取血，分离血清分别检测和水平解剖取其肝脏，提取肝组织并测定其水平，同时制作肝组织病理学检查。结果表明剂量对血清有显著抑制作用，但各剂量对肝组织水平均无显著性影响。上述结果表明，松果菊苷具有较明显的体内外抗作用。二多器官功能障碍综合征模型的建立及其药物干预研究大鼠模型的建立选取雄性大鼠，体重在之间。动物在建模前小时开始禁食，以的戊巴比妥钠体重腹腔注射麻醉用次性针筒抽取大鼠颈部动脉窦血液，对大鼠造成失血性休克创伤放血后用生理盐水体重灌胃再经小时后，尾静脉注射脂多糖，造成二次内毒素刺激然后每天用生理盐水灌胃，连续三天。三天后从未死亡的造模大鼠中挑选符合多器官障碍体征的大鼠，用于后续实验研究。六棱菊提取物对的干预作用研究取大鼠只，随机分为组模型组，大剂量组中剂量组和小剂量组，试药组以不同剂量的每天灌胃，模型组给予等剂量的生理盐水。连续给药天后，采取大鼠血液分离血清，测定超氧化物歧化酶型钠尿肽万方数据氧化氮肌酸激酶同工酶肿瘤坏死因子尿素氮白细胞介素和内毒素含量。结果显示对炎症相关介质具有显著抑制作用，能有效缓解大鼠体内炎症，减少机体自由基，显著改善心功能和肝功能。说明对具有明显改善作用。综上所述，本论文研究了转基因小鼠的病毒表达特性，并采用转基因小鼠，证明了松果菊苷的抗作用同时通过建立的大鼠模型，探讨了对的改善作用。有关转基因小鼠和动物模型的研究为今后研制新型乙肝和治疗药物提供了有力的工具。关键词乙肝病毒转基因小鼠松果菊苷多器官功能障碍综合症脂多糖动物模型六棱菊提取物分类号万方数据对细胞作用天后表达的影响表松果菊苷对细胞作用天后表达的影响表松果菊苷对细胞作用天后表达的影响表松果菊苷对细胞作用天后的影响表松果菊苷对转基因小鼠和的影响表松果菊苷对转基因小鼠与表达的影响表松果菊苷对转基因小鼠血清和肝组织水平的影响表标准曲线数据表标准曲线数据表标准曲线数据表标准曲线数据表标准曲线数据表标准曲线数据表标准曲线数据表标准曲线数据表标准曲线数据万方数据表内毒素标准曲线数据表对大鼠血清肝功能的影响表对大鼠血清心肾功能的影响表对大鼠血清炎症介质的影响表对大鼠血清炎症相关因子的影响万方数据缩略词表ⅡⅡ万方数据中国计量学院硕士学位论文绪论乙型肝炎概述乙肝病毒乙型肝炎的致病原乙型肝炎病毒，是目前所知最小的嗜肝病毒，由两部分组成，即囊膜和核心颗粒。其结构见图。图乙肝病毒结构图囊膜包含脂质双层和包膜蛋白。机体对乙肝病毒产生免疫反应，首先是接触组成包膜蛋白的抗原，包括表面抗原前抗原和前抗原。其中为是否携带乙肝病毒的主要标志物质。核心颗粒的表面是核心抗原，这种抗原般在血液中检测不到，只存在于肝细胞中。乙肝患者的肝组织病理切片显示，主要呈核型，般核周边密度比核中心大，有时也能观察到核质混合型甚至浆膜型。弥散分布于肝组织中，没有特定区域比较集中的现象。核心颗粒的内部是环状并附有聚合酶的含缺口双链，长约。严格意义上，含有双链的才能叫乙肝病毒，又称颗粒。在血液中除了表面抗原外，还能检测到另种主要的抗原，即抗原，这种抗原不是乙肝病毒本身固有的结构，而是被侵染的肝细胞所释放的种可万方数据中国计量学院硕士学位论文溶性抗原，是乙肝病毒是否复制的标志性物质。的感染与各种肝病如急慢性肝炎肝硬化肝癌等密切相关，乙肝病毒在侵入人体后有器官特异性，主要攻击肝脏。在肝细胞中，首先由其自身的聚合酶催化形成完全环状的双链，这种共价闭合环状是病毒复制的原始模板。旦形成，即有高度的稳定性，很难清除，并导致病毒的不断繁殖，这也是乙型肝炎很难根治的主要原因。乙肝病毒的致病机制般认为侵入肝脏后不会直接破坏细胞，仅在其中复制繁殖，产生病毒释放入血，同时部分病毒抗原于肝细胞膜上表达，机体随之产生免疫应答。首先由抗原提呈细胞如巨噬细胞和枯否氏细胞等提呈，即摄取抗原后将之以蛋白水解酶降解成具有抗原信息的片段并与自身的组织相容性抗原形成复合物起传递给淋巴细胞，改变其静息状态，使之转化增殖成激活的淋巴细胞遂得以发挥细胞免疫和体液免疫作用，其中由和淋巴细胞产生特异性细胞免疫攻击被感染的肝细胞，淋巴细胞产生抗体清除血液中的病毒抗原，部分淋巴细胞分泌非特异性细胞因子如白细胞介素ⅡⅡ等协调免疫反应，如淋巴细胞释放的Ⅱ能促进淋巴细胞分泌抗体。若被侵染的肝细胞为数不多，则细胞可将受侵染细胞全部杀死，释放出全部的，并为抗体所中和，这种情况即急性乙肝，可以痊愈。若被侵染的肝细胞太多，超出了细胞靶细胞杀伤能力范围，或者体内没有有效的抗体及时中和释放出来的，则会导致持续感染人体，这种情况即慢性乙肝。在人体内感染时间过长，会致使肝纤维细胞的增生，从而引发肝硬化，最终可能诱发肝癌。乙肝的流行病学乙型肝炎作为种世界性的传染病，全世界亿人口中，约生活在高流行区，约亿人证明感染，亿为乙肝慢性感染。西欧北美和澳大利亚为低地方性流行地区，东欧印度次大陆和中东为中地方性流行地区，亚洲太平洋岛屿和次撒哈拉非洲为高地方性流行地区。我国的般人群流行率为。乙肝的传播途径主要有母婴传播不安全注射和性接触。据文献报道，在排除母婴传播的可能性后，发现父婴乙肝病毒分子的相似性很高，基因进化树显示基因同源性很高，提示着父婴传播也应得到重视。等发现感染具有家族倾向性。万方数据中国计量学院硕士学位论文与乙肝斗争的最好方式是预防。自乙肝疫苗问世以来，在抗击乙肝的战役中发挥了非常重要的作用。我国对新生儿和易感人群普遍接种乙肝疫苗，并收到了很好的效果，特别是在定程度上有效地阻断了母婴传播这途径。抗乙肝药物概述核苷类药物拉米夫定，是现在治疗乙肝普遍使用的种核苷类药物。其主要通过抑制的逆转录酶和多聚酶的活性达到抗作用，从而改善患者的肝组织的病理状态。其口服效果好，口服，血清的下降中位数达到，水平亦有明显的下降，副作用较小，对治疗前水平低，水平较高的患者来说通常是首选药物。但是由于聚合酶中存在酷氨酸蛋氨酸天门冬氨酸保守区域，这区域的变异常导致对拉米夫定的耐药。因拉米夫定主要作用是抑制的复制，所以短期疗效不显著，停药后易复发。图拉米夫定结构式阿德福伟是开环嘌呤类核苷类似物，对野生株和变异株均有良好的抗病毒作用，但最佳剂量不好把握，安全范围小，毒副作用大，主要表现为肾毒性乳酸中毒和肝肿胀等。在需长期用药的情况下，很多患者不能忍受其副作用而被迫停药。万方数据中国计量学院硕士学位论文图阿德福伟结构式恩替卡韦是种环戊基鸟嘌呤核苷酸类似物，是最新的抗乙肝病毒线药，对聚合酶有抑制的作用。它能通过细胞内的磷酸化成具活性的磷酸盐，竞争三磷酸脱氧鸟嘌呤核苷，从而实现其抑制乙肝病毒的复制的效果。的细胞毒性较低，有着十分优良的选择性治疗指数，其有效浓度的倍才能对细胞产生毒性。图恩替卡韦结构式替比夫定为种天然胸腺嘧啶脱氧核苷的对映体，是高特异性抑制复制的左旋核苷类似物，其也是通过磷酸化产生的替比夫定腺苷，与乙肝病毒底物胸腺嘧啶的腺苷竞争来实现对多聚酶的抑制，造成乙肝病毒链延长的终止。毒理学研究表明，替比夫定无致癌性，无致畸性，无致突变性，亦无质粒体毒性，体外实验和治疗效果都优于拉米夫定和阿德福韦酯。万方数据硕士学位论文乙肝病毒转基因小鼠和多器官障碍综合征模型的评价及药物干预研究作者沈钰明导师伍义行教授学科生物化学与分子生物学中国计量学院二〇四年五月万方数据，万方数据中图分类号学校代码密级公开硕士学位论文乙肝病毒转基因小鼠和多器官障碍综合征模型的评价及药物干预研究作者沈钰明导师伍义行教授申请学位理学硕士培养单位中国计量学院学科专业生物化学与分子生物学研究方向肝脏药理二〇四年六月万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国计量学院或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名签字日期年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国计量学院有关保留使用学位论文的规定。特授权中国计量学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印缩印或扫描等复制手段保存汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。保密的学位论文在解密后适用本授权说明学位论文作者签名导师签名签字日期年月日签字日期年月日万方数据致谢本论文是在导师伍义行教授的指导和帮助下完成的，从论文选题到实验设计都倾注了伍老师很多心血。感谢他在科研工作中对我的悉心培养和教诲，他敏捷的思维方式严谨的治学态度以及虚怀若谷的人生理念将使我终生受益。他的教诲将激励我在今后的工作生活和学习中不畏困难，勇往直前。在此向伍老师表示深深的感谢与崇高的敬意。感谢生命科学学院的各位领导和老师的关心和帮助。感谢在我完成毕业论文期间葛建老师和胡华军老师给予的热心帮助和耐心指导。感谢级生物化学与分子生物学专业的同学们在学习和生活中给予的关心和帮助，也要感谢戴灵豪师弟贾袁媛师姐和张虹莉师姐在实验中给予的帮助与支持。借此机会，我还要对那些未在此提及的老师同学和朋友们的关心和帮助表示诚挚的谢意。特别感谢我的父母和亲人，他们长期以来对我的支持与鼓励，使我能够全身心的投入到研究学习中，顺利完成学业。衷心感谢论文评阅和答辩委员会的所有专家。最后，我再次向所有曾经关心帮助和支持我的人致以最诚挚的谢意！沈钰明年月万方数据乙肝病毒转基因小鼠和多器官障碍综合征模型的评价及药物干预研究摘要乙型肝炎作为种世界性的传染病，尚无彻底根治的办法。乙肝病毒的宿主特异性给乙肝疾病模型的建立带来了很大难度。目前的乙肝动物模型局限性在于所用动物与人类相比在进化上相去甚