,企业的投入与产出就不能有效地达到平衡。所以,若好氧反硝化菌的分离纯化及特性研究作为企业生产,则最好是酶的比活要高,且回收率也要高,要在两者之间寻找个平衡点。见图。由图可知,在第第步时,即在硫酸铵分级沉淀后,比活与回收率乘积最高,此时比活约为,回收率约为,最适宜企业生产,最可能得到可观收益。综合考虑,若要获取高比活的精制品,则本实验工艺可以满足需求若要符合实际生产投放市场,则可适当减少提出步骤,提纯工艺只到硫酸铵分级沉淀为止。图比活与回收率乘积通过将黄瓜粗酶液经热变性沉淀等电点沉淀处理后,再经,硫酸铵分级沉淀和纤维素离子交换层析,四步纯化后,用聚丙烯酰胺凝胶电泳及活性染色进行鉴定,确定提取得到的为黄瓜酶。实验结果表明,黄瓜酶的比活为,回收率为,提纯倍数为倍,工艺所用时间约为很明显,提纯效果比单使用方法要好。因此若要获取高比活的精制品,则本工艺可以满足需求若要符合实际生产投放市场,则可适当减少提纯步骤,提纯工艺只到硫酸铵分级沉淀为止。好氧反硝化菌的分离纯化及特性研究致谢我的这篇毕业论文的完成，首先应当归功于指导老师原东林老师。他无论是在讲课室内资料整理还是在论文的撰写等各个方面都给予了大量的指导和帮助，令我不但完成了论文，也学到了许多书本上学不到的知识，受益匪浅，特致以深深的感谢。同时也要感谢王文静同学的帮助，我们共同完成实验和部分室内整理工作。另外还要感谢实验室系资料室及复印室的各位工作人员的帮助与合作。感谢我所有同学在这次论文中所给与的帮助，也感谢焦作大学化工与环境工程学院所有老师的帮助和鼓励。感谢老师在实习中给予的悉心指导以及在论文的写作中给与的帮助，同时也感谢在三年的学习中各位老师对我的帮助和支持。随着这篇毕业论文的最后落笔，我三年的大学生活也即将划上个圆满的句号。回忆这三年生活的点点滴滴，从入学时对大学生活的无限憧憬到课堂上对各位老师学术的羡慕，种种的切，让人无限留恋，十分珍惜。在此再次感谢我的指导老师，正是由于他们在百忙之中多次审阅全文，对细节进行修改，并为本文的撰写提供了许多中肯而且宝贵的意见，本文才得以成型。，从而使我对有了较系统的认识。最后，我要向在百忙之中抽时间对本文进行审阅评议和参加本人论文答辩的各位老师表示忠心的感谢,好氧反硝化菌的分离纯化及特性研究参考文献丁琳,姜红,王丹焱,等榆树叶超氧化物歧化酶的纯化及性质研究沈阳化工学院学报金绍黑植物超氧化物歧化酶的提取修饰制备工艺及其应用研究成都航空职业技术学院学报邓旭,李清彪,孙道华,等从大蒜细胞中分离纯化出超氧化物歧化酶食品科学姚澍晖蕨菜同工酶分析特产研究朱广廉,钟诲文,张爱琴植物生理学实验北京北京大学出版社,张沙艳,高成华玉米超氧化物歧化酶的分离及纯化沈阳师范大学学报自然科学版余旭亚,赵声兰,李涛,等仙人掌超氧化物歧化酶的纯化及其部分性质研究精细化工,,,陈淮扬刘望荑从的分布与结构看其分子进化,生物化学与生物物理进展,程光宇魏锦城吴国荣等在枸杞和何首乌体内的分布和细胞器中的定位植物生理学会编印，丁琳石榴叶超氧化物歧化酶的纯化及性质研究辽宁化工丁琳,姜红,王丹焱,等榆树叶超氧化物歧化酶的纯化及性质研究沈阳化工学院学报自俊青,杨志毅超氧化物歧化酶及其研究简介大理师专学报,好氧反硝化菌的分离纯化及特性研究金虬,程志明,李大珍胶束对几种Ⅱ氨基酸络合物样活性的影响北京师范大学学报自然科学版,吴学玲超氧化物歧化酶及其在生命科学中的作用怀化师专学报,杨雄超氧化物歧化酶的研究现状武汉教育学院学报,杨锦才超氧化物歧化酶在食品工业中的应用盐城工学院学报,王琦,徐新莲,贾维峰,等我国水果生产现状与发展对策中国果业信息巩文红,朱佳满,李汉友浅谈高营养品苹果的开发北京农业尤新功能性发酵制品北京中国轻工出版社,许平袁原大蒜超氧化物歧化酶活性测定及其些性质研究渝州大学学报自然科学版液。将粗酶液静置于恒温水浴锅中,进行热变性,使杂蛋白变性沉淀下好氧反硝化菌的分离纯化及特性研究来,再在下离心,弃去沉淀,保留上清液。用盐酸调节上清液,使其达到,在下离心,收集上清液。在上清液中加入固体硫酸铵粉末,使溶液达到的饱和度后,用玻璃棒搅拌,然后冷藏静置,再在,离心,去除沉淀,取上清液再加入固体硫酸铵粉末到饱和度,搅拌,冷藏过夜,再在,离心,取沉淀,溶解于,的磷酸盐缓冲液中,透析过夜,待上柱。预先处理纤维素,装柱,将待上柱的酶液加入层析柱中,用,的磷酸盐缓冲液进行洗脱,洗脱速度控制在,以每管收集洗脱物,收集管,将收集活性峰的部分合并,测定蛋白峰处各管的酶活力及蛋白质含量。将收集的酶液,透析,再置于冰箱中,冷冻过夜,用冷冻干燥机将酶液制成干粉,即为成品。的鉴定本实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳及酶活性染色来鉴定纯化物确为。超氧化物歧化酶活力测定用光还原法来测定超氧化物歧化酶的活性,根据光照时体系中产生氧自由基使还原成蓝色甲簪在处有吸收峰,而超氧化物歧化酶作为氧自由基的清除剂可抑制此反应。酶活性单位采用抑制光还原为个酶活性单位表示蛋白质含量测定以考马斯亮蓝在波长下制作标准曲线,再进行样品液中蛋白质含量测定,根据所测定的值,在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量,重复次取平均值,通过计算求出样品中蛋白质含量。结果沉淀法分离好氧反硝化菌的分离纯化及特性研究本实验通过热变性沉淀法等电点沉淀法从黄瓜中分离,在此过程中,热变性温度的选择均对分离提取存在影响。热变性温度对提取的影响是种热稳定性很好的酶。当温度低于时,短时间的热处理,酶活力不会有明显的变化,而般杂蛋白却在高于时就易变性沉淀。因此选择不同温度及时间对粗酶液进行热击。酶活性结果见表。表热变性温度和时间对活性的影响温度表结果表明,在下热击时,酶活性最大,因此确定选择在此温度时间进行处理则粗酶液在热击前后结果见表。表热变性前后处理结果比较总蛋白总酶比活纯化时间含量活倍数热变前交换提取此综合法的提纯效果与单方法提纯相比,酶比活力明显有大幅度的提高。结果见表。表综合法分离提纯黄瓜超氧化物歧化酶的结果总蛋白总活力比活回收率分离步骤纯化倍数粗酶热变性等电点沉淀饱和硫酸铵饱和硫酸铵离子交换从表中可以看出,黄瓜分离纯化前的比活为,经最终纯化后的比活为,纯化倍数为,回收率为。电泳鉴定将浓缩干燥后的成品,溶解于,的磷酸缓冲液中,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用活性染色。提纯后的物质经电泳处理,再进行活性染色后,出现条透明条带。因此,可以确定,该提纯物质确为超氧化物歧化酶。好氧反硝化菌的分离纯化及特性研究讨论实验误差实验过程中,对各步的酶活力和总蛋白含量进行计算,其比活和纯化倍数较低,可能与操作过程中样品放置时间的长短和试材的质量有关另外,在运用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定时,发现最终的电泳条带只有条,可能是由于提纯物中还存在定量的杂蛋白也可能与点样中含量有关,据有关文献显示,通过离子交换后,总蛋白含量般在而本实验只是从黄瓜中提取,其最终总蛋白含量为,因此其余两条带不能清晰显现。单方法与综合法的比较从结果分析可知,若用热变性法处理粗酶液,在下热击,部分杂蛋白被去除,比活从上升至,此工艺的纯化倍数为,回收率为若用等电点沉淀法,选择时处理粗酶液,则提纯后总蛋白含量为,酶总活力为,比活为,纯化倍数为,回收率为若只采用和的饱和硫酸铵处理粗酶液时,酶的比活则分别为和,纯化倍数分别为和,回收率分别为和。而用综合法提纯,提纯后总蛋白含量为,酶总活力为,比活为,纯化倍数为,回收率为。因此可以看出,用单方法提纯粗酶液,其比活和纯化倍数均不是很高,说明单方法分离提纯,不能有效提高其纯度。在实际中的应用从整个制备工艺