对老年大鼠睾丸间质细胞睾酮合成功能的影响临床泌尿外科杂志，。材料与方法实验动物从河南省实验动物中心购买月龄级雄性大鼠只，体重为。饲养条件所有大鼠均饲养于独立的通风鼠笼中，室温恒定为，自由饮食水。药物与试剂未羧化骨钙素，购于公司半乳糖分离液胎牛血清，购于北京索莱宝科技有限公司。培养液购于公司。细胞培养液上清可促进其分泌睾酮，认为非羧化骨钙素作为成骨细胞特异性分泌的蛋白，具有促进雄性性腺发育的功能。我们对体外培养的睾丸间质细胞培养液进行检测发现模型组大鼠跟对照组相比，睾丸间质细胞睾酮分泌能力显著下降。对于模型组大鼠，加入不同浓度的未羧化骨钙素组同加入等量溶液的空白组比较，加入未羧化骨钙素的睾丸间质细胞合成睾酮浓度得到较为明显的上升。以上结果表明，衰老模型组睾丸间质细胞睾酮合成能力较对照组下降显著，经未羧化骨钙素处理后可明显提高其睾酮合成能力。但值得注意的是，高浓度的未羧化骨钙素可能导致这种刺激作用减弱。睾丸间质细胞的睾酮合成收到多种酶的调节，其中，者作为标志物在研究中常用于判定细胞睾酮合成的能力。为了研究外源未羧化骨钙素对老年大鼠睾丸间质细胞睾酮合成功能的影响医学职称论文质细胞合成。有研究者认为的发病机制可能与睾丸间质细胞功能减退及昼夜节律变化为特征的下丘脑垂体性腺轴功能减退有密切关系。图检测不同浓度的对衰老大鼠睾丸间质细胞睾酮合成关键酶的影响半乳糖致衰老模型的建立是通过在段时间内连续给动物多为大鼠注射定剂量的半乳糖，乳糖的积聚将使细胞通透性改变，影响细胞正常发挥其应有的作用，接着产生的超出机体所能承受范围之外的活性氧使各个器官抗氧化能力下降，最终多器官衰退造成衰老，这过程和自然衰老的病理过程有定的相似性，。该模型可造成机体神经衰老心脏老化免疫功能退化肝脏功能退化生殖功能退化等。且有研究证实该模型可以用来模拟老年性腺损伤，活性氧在睾丸间质细胞的积聚将导致细胞合成类固醇的下降，从而进步导组和模型组睾丸间质细胞在加入等量后细胞上清中的睾酮含量为和。同加入等量溶液的对照组大鼠睾丸间质细胞相比，加入等量溶液的模型组大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮水平下降对模型组大鼠睾丸间质细胞分别进行未羧化骨钙素处理，相较于模型组加入等量溶液处理的睾丸间质细胞，骨钙素处理组细胞分泌的睾酮水平均升高分别为，但仍低于对照组大鼠睾丸间质细胞睾酮水平，见图。图大鼠睾丸组织苏木精伊红染色图睾丸间质细胞原代及传代培养图睾丸间质细胞染色鉴定图不同浓度的对睾丸间质细胞睾酮合成的影响未羧化骨钙素对衰老大鼠睾丸间质细胞睾酮合成关键酶表达的影响将提取的模型组大睾丸间质细胞相比，加入等量溶液的模型组大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮水平下降对模型组大鼠睾丸间质细胞分别进行未羧化骨钙素处理，相较于模型组加入等量溶液处理的睾丸间质细胞，骨钙素处理组睾丸间质细胞培养液上清中睾酮水平均升高与加入等量溶液的模型组大鼠睾丸间质细胞相比，经过未羧化骨钙素处理后的模型组大鼠睾丸间质细胞的基因的表达有明显的上升经过未羧化骨钙素处理后的模型组大鼠睾丸间质细胞的基因的表达有显著上升。结论本研究成功的构建了半乳糖诱导的衰老大鼠模型，证明了未羧化的骨钙素可以促进半乳糖诱导的老年大鼠睾丸间质细胞睾酮合成，并且该作用可能是由于未羧化骨钙素促进其睾酮合成检测睾丸间质细胞分泌的睾酮浓度用光学显微镜每天观察细胞的生长状况，待观察到成以上细胞铺细胞培养板时进行传代，选择使用第代细胞作为实验使用。分别用不同质量浓度等量的刺激细胞，每组各孔细胞，后将收集上清培养液采用试剂盒检测睾酮浓度。荧光定量检测未羧化骨钙素培养后衰老大鼠睾丸间质细胞睾酮合成关键酶表达情况分别用不同质量浓度等量的刺激细胞，每组各孔细胞，用提取睾丸间质细胞的，测定的纯度后按照反转录试剂盒得到作为模板，使用荧光定量的方法检测衰老模型组大鼠睾丸间质细胞等睾酮合成关键酶的表达。引物序列见丸指数，睾酮水平。模型组与对照组比较，睾丸指数下降睾丸重量体重下降，见表。血清睾酮水平降低，见图。表大鼠的般情况大鼠氧化应激指标的测定用脱颈法处死大鼠，取部分睾丸组织，按照试剂盒操作流程检测睾丸组织中酶活性与水平。根据图发现与对照组比较，模型组衰老大鼠的含量明显降低，差异有统计学意义，水平明显增加，差异有统计学意义。未羧化骨钙素对老年大鼠睾丸间质细胞睾酮合成功能的影响医学职称论文。大鼠睾丸间质细胞的提取与鉴定大鼠采用颈椎脱臼法处死后浸入乙醇中消毒，用无菌剪刀在冰面上去除睾丸的白膜，将睾丸实质拨散后，将实质加入装有型胶原酶消化液的离心管中，用封口膜将管口密闭，将离心管放入水浴锅内消化，消化期间每隔摇报告显示，人群中的总体患病率为，并且随着年龄的增长患病率也随之上涨，岁的男性患病率为，在岁的男性当中上升到，在岁男性患病率上升为，在岁男性患病率则为。睾酮分泌减少是极为重要的特征之，同时也是诊断的必要条件。最近的研究表明，存在与下丘脑垂体性腺轴平行的内分泌通路，该通路能够作用于睾丸的内分泌功能，其中涉及骨源性激素骨钙素。检测睾丸间质细胞分泌的睾酮浓度用光学显微镜每天观察细胞的生长状况，待观察到成以上细胞铺细胞培养板时进行传代，选择使用第代细胞作为实验使用。分别用不同质量浓度等量的刺激细胞，每组各孔细胞，后将收集上清培养液采用试剂盒检测睾酮浓度。荧光定量检测未羧化，对照组颈背部皮下注射等剂量生理盐水，注射时间为周。验证衰老模型构建成功后，取大鼠的睾丸间质细胞，分别用不同质量浓度等量溶液的非羧化骨钙素刺激大鼠睾丸间质细胞，后收取培养液采用睾酮检测试剂盒进行睾酮浓度检测并在后收集细胞提取，然后采用荧光定量法检测睾丸间质细胞睾酮合成关键酶的表达。结果同加入等量溶液的对照组大鼠睾丸间质细胞相比，加入等量溶液的模型组大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮水平下降对模型组大鼠睾丸间质细胞分别进行未羧化骨钙素处理，相较于模型组加入等量溶液处理的睾丸间质细胞，骨钙素处理组睾丸间质细胞培养液上清中睾酮水平均升高与加入等量是，高浓度的未羧化骨钙素可能导致这种刺激作用减弱。睾丸间质细胞的睾酮合成收到多种酶的调节，其中，者作为标志物在研究中常用于判定细胞睾酮合成的能力。为了研究外源性非羧化骨钙素对衰老大鼠睾丸间质细胞的影响，本研究分别合成了种睾酮合成关键酶的引物，通过荧光定量检测睾丸间质细胞中标识性酶分子的表达，发现加入非羧化骨钙素后，大鼠睾丸间质细胞主要的相关睾酮合成关键酶的表达水平都有所提高，这证明了非羧化骨钙素能够促进亚急性衰老模型大鼠睾酮合成关键酶的表达，但其更为详细的机制仍需进步研究，并且这种调控在男性迟发性性腺功能减退患者体内是否具有相同的效应也有待验证，如果通过分子生物学方面的研究最终揭开未未羧化骨钙素对老年大鼠睾丸间质细胞睾酮合成功能的影响医学职称论文试管，待睾丸实质几乎全部散开之后加入倍体积的含有的培养液终止消化，将试管内的溶液用目的筛网过滤，过滤掉剩余未消化的实质。过滤后的液体在离心机内离心，将上清液弃掉后用适量培养基重悬细胞，将悬液加于由下向上分别为浓度的分离液的顶层，离心。取和浓度之间第条细胞带的悬液，液稀释，离心机离心次，每次离心，将细胞沉淀加入含的培养液，最后将细胞培养板放于氧化碳培养箱中。睾丸间质细胞的染色鉴定方法为染色。在细胞培养液内加入配置好的溶液约，放置在温箱内后再在光学显微镜下观察结果。如果观察到被染成蓝紫色的细胞，则证明提取培养的原代细胞为实验所需的细培养液终止消化，将试管内的溶液用目的筛网过滤，过滤掉剩余未消化的实质。过滤后的液体在离心机内离心，将上清液弃掉后用适量培养基重悬细胞，将悬液加于由下向上分别为浓度的分离液的顶层，离心。取和浓度之间第条细胞带的悬液，液稀释，离心机离心次，每次离心，将细胞沉淀加入含的培养液，最后将细胞培养板放于氧化碳培养箱中。睾丸间质细胞的染色鉴定方法为染色。在细胞培养液内加入配置好的溶液约，放置在温箱内后再在光学显微镜下观察结果。如果观察到被染成蓝紫色的细胞，则证明提取培养的原代细胞为实验所需的细胞。我们从衰老模型组大鼠和正常对照组大鼠随机各取只处死，检查其可造成机体神经衰老心脏老化免疫功能退化肝脏功能退化生殖功能退化等。且有研究证实该模型可以用来模拟老年性腺损伤，活性氧在睾丸间质细胞的积聚将导致细胞合成类固醇的下降，从而进步导致睾酮水平降低。本次实验选择了雄性大鼠，在颈背部皮下注射半乳糖溶液，持续注射周后构建衰老模型，在实验过程中有只大鼠死亡，其中只为皮下注射过程中意外损伤，另只死亡原因不详，剩余大鼠正常存活。周后发现注射半乳糖溶液的模型组大鼠和正常对照组相比，模型组大鼠摄食量明显减少，身型萎缩，行动迟缓，精神萎靡，血清睾酮水平降低，睾丸指数下降，氧化应激水平改变降低，升高，睾丸间质细胞的细胞形态也发生明显变化，实验结果与既往研究结论类似，证实模型构建成功，。近年来钙素培养后衰老大鼠睾丸间质细胞睾酮合成关键酶表达情况分别用不同质量浓度等量的刺激细胞，每组各孔细胞，用提取睾丸间质细