子区的富集。分离的用，再与在小室中共培养，胰蛋白酶消化收集细胞，实验分为对照组和干预组，方法检测组蛋白修饰和富集量。结果共培养体系诱导骨髓间充质干细胞分化为膀胱平滑肌细胞为了建立诱导分血清反应因子经组蛋白乙酰化促进大鼠细胞分化实验医学论文进行的细胞核染色，进行激光共聚焦显微镜分析。实时定量聚合酶链反应在收获共培养的个，预冷洗涤。提取总后，基于反转录试剂盒进行反转录。使用第链合成试剂盒合成。采用试剂盒处理后，通过实时定量扩增系统进行实时。通过将定量的转录物标准化为肌动蛋白来计算基因相对表达水平。引物序列参见表。退火温度为。每个值代表至能联合促进的标志基因表达。本研究通过建立体外共培养体系，揭示了组蛋白乙酰化修饰在向分化中的作用。虽然组蛋白特异位点乙酰化修饰促进的标志基因的表达，并且提高乙酰化修饰后与其有相同的增高趋势，然而与相关乙酰化组蛋白间的结合是直接还是间接，尚未明确，并且上述组蛋白特异位点乙酰化与和或之间结合关系也需在后续研究中进步阐明。总之，体外小室共培养体系能够诱导分化成。在分化过程中，分化为中，激活平滑肌标记基因表达。所有结果表明，组蛋白乙酰化修饰在分化为中起促进作用。组蛋白乙酰化状态由和调节。在家族中，和保持相同的序列，通常共同存在并抑制基因转录。研究证明，通过结合些特异性转录因子来抑制标志基因的表达，。我们的研究结果表明，随着共培养时间的延长，和在标记基因上的富集程度显著降低，说明和抑制了向分化中标记基因的表达。组蛋图预处理对共培养间充质干细胞中组蛋白乙酰化修饰和结合富集的影响讨论临床上细胞移植治疗受到干细胞来源的限制。由于能够分化成多种细胞，因此被认为是种极具应用潜能的种子细胞。体外培养中，可通过直接接触或者细胞因子诱导分化为，。在体内，骨髓间充质干细胞经尿道和膀胱颈黏膜下注射可分化为膀胱平滑肌细胞。我们的研究发现共培养后的标志基因表达增加，说明体外小室共培养能够诱导向分化，这为干细胞定向分化寻找到个较为可靠的途径。向，是的关键转录因子之，与标志基因启动子区特殊序列结合激活基因转录。然而，在向分化过程中，以及相关组蛋白乙酰化修饰调控机制尚未阐明。本研究在建立体外诱导向分化的基础上，从表观遗传调控角度探讨其分子机制，以期为组织工程和细胞种植治疗提供实验依据。图共培养的中标志基因和富集量促进向分化为了测定向分化是否受调控，我们测定共培养后较处理干预组与对照组间组蛋白乙酰化修饰和富集情况。结果显示干预组和基因中和的富集量明显高于对照组，图在干预组中呈现相同增高趋势，差异具有统计学意义，图。相反，经干预组的显著低于对照组，图。关键词丁酸钠分化组蛋白乙酰化血清反应因子骨髓间充质干细胞干细胞移植是治疗膀胱功能障碍最有前途和挑战性的应用。最近，成人自体干细胞移植治疗压力性尿失禁取得了些开拓性进展，。骨点乙酰化修饰促进的标志基因的表达，并且提高乙酰化修饰后与其有相同的增高趋势，然而与相关乙酰化组蛋白间的结合是直接还是间接，尚未明确，并且上述组蛋白特异位点乙酰化与和或之间结合关系也需在后续研究中进步阐明。总之，体外小室共培养体系能够诱导分化成。在分化过程中，和可能经和调整，促进标志基因的表达，和可能结合参与标志基因的初始转录。刘晶霞，梁志清和调节。在家族中，和保持相同的序列，通常共同存在并抑制基因转录。研究证明，通过结合些特异性转录因子来抑制标志基因的表达，。我们的研究结果表明，随着共培养时间的延长，和在标记基因上的富集程度显著降低，说明和抑制了向分化中标记基因的表达。组蛋白修饰通过转录因子调控基因表达，。是特异性基因表达的关键转录因子之。报道与乙酰化结合可以控制的分化。在血清反应因子经组蛋白乙酰化促进大鼠细胞分化实验医学论文标志基因启动子区的富集情况，图显示随着共培养时间的延长，在和基因中富集量显著增加。图共培养的的标志基因中富集组蛋白乙酰化可能通过促进分化成研究采用，并比较处理干预组与对照组间组蛋白乙酰化修饰和富集情况。结果显示干预组和基因中和的富集量明显高于对照组，图在干预组中呈现相同增高趋势，差异具有统计学意义，图。相反，经干预组的显著低于对照组，图修饰之，受组蛋白乙酰化酶，和组蛋白去乙酰化酶，调控。分为个类别，其中些与标记基因的表达有关，。和是的类成员，序列存在相似性，通常共同调控相关基因的表达，。此外，抑制特定基因的表达。通过调节组蛋白特殊位点乙酰化，使致密染色质解聚，招募转录因子结合到启动子区的特殊序列，从而调控相关基因的表达。血清反应因子胞，因此被认为是种极具应用潜能的种子细胞。体外培养中，可通过直接接触或者细胞因子诱导分化为，。在体内，骨髓间充质干细胞经尿道和膀胱颈黏膜下注射可分化为膀胱平滑肌细胞。我们的研究发现共培养后的标志基因表达增加，说明体外小室共培养能够诱导向分化，这为干细胞定向分化寻找到个较为可靠的途径。向分化的机制尚不清楚。先前的研究表明，组蛋白乙酰化修饰参与了的分化，。干细胞系的乙酰化水平较低，而在分化后的中，标志基间充质干细胞，具有容易获取免疫原性小以及不涉及伦理问题等优势，被认为是种理想的移植种子细胞，。研究表明表观遗传调控在干细胞向平滑肌细胞，分化过程中发挥重要作用，通过对启动子区进行特殊的组蛋白修饰来调节标记基因的表达。多项研究发现，胚胎干细胞，向分化过程中，相关基因启动子区具有高水平的和残基和乙酰化，。组蛋白乙酰化是组蛋白血清反应因子经组蛋白乙酰化促进大鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化第军医大学学报，基金国家自然科学基金面上项目。图共培养的中标志基因和富集量促进向分化为了测定向分化是否受调控，我们测定共培养后的标志基因启动子区的富集情况，图显示随着共培养时间的延长，在和基因中富集量显著增加。图共培养的的标志基因中富集组蛋白乙酰化可能通过促进分化成研究采用，并研究中，我们发现在分化中，在标志基因启动子区富集量增加，促进中标志基因的表达。进步，我们通过，并观察了的富集和组蛋白修饰的变化。结果发现，与对照组相比，干预组基因启动子区富集量显著降低，原因可能是高乙酰化状态抑制了乙酰化同时，和明显升高，提示和可能联合促进的标志基因表达。本研究通过建立体外共培养体系，揭示了组蛋白乙酰化修饰在向分化中的作用。虽然组蛋白特异的和升高。与此相致，我们还发现，标志基因中和的富集在向分化中升高，这意味着和在分化过程中启动了相关基因表达。报道和的升高。我们还发现分化的中，和的显著高于未分化的。这些数据表明在分化为中，激活平滑肌标记基因表达。所有结果表明，组蛋白乙酰化修饰在分化为中起促进作用。组蛋白乙酰化状态由血清反应因子经组蛋白乙酰化促进大鼠细胞分化实验医学论文第链合成试剂盒合成。采用试剂盒处理后，通过实时定量扩增系统进行实时。通过将定量的转录物标准化为肌动蛋白来计算基因相对表达水平。引物序列参见表。退火温度为。每个值代表至少次独立实验的平均值。血清反应因子经组蛋白乙酰化促进大鼠细胞分化实验医学论文。图预处理对共培养间充质干细胞中组蛋白乙酰化修饰和结合富集的影响讨论临床上细胞移植治疗受到干细胞来源的限制。由于能够分化成多种在小室中共培养。胰蛋白酶消化后，以个密度接种于的外室中。胰蛋白酶消化后，同样也以个密度接种于的内室中。在和收获共培养的细胞，用于测定标志基因表达在和收集共培养，用于检测组蛋白乙酰化修饰和在标志基因启动子区的富集。分离的用，再与在小室中共培养，胰蛋白酶消化收集细胞，实验分为对照组和干预组，为的可行和有效的方法，我们采用小室，将与共培养，并采用检测不同时间点诱导的中标志基因的表达，结果在共培养的中，和表达量显著增加图使用免疫荧光技术检测上述细胞中和蛋白表达，结果这些蛋白在共培养的中表达增强图。图共培养中标志基因的表达共培养后不同时间点标志基因组蛋白乙酰化修饰为了测试是否有组蛋白乙酰化修饰参与了向少次独立实验的平均值。血清反应因子经组蛋白乙酰化促进大鼠细胞分化实验医学论文。膀胱平滑肌细胞分离培养从上述大鼠中无菌分离膀胱，去除浆膜层和黏膜层，通过胶原酶和∶消化后，收集游离细胞。将获得的细胞在含的培养基中重悬，于，饱和湿度培养箱中培养。细胞密度达到时进行传代。本研究中第代或第代细胞用于与共培养。骨髓间充质干细胞与膀胱平滑肌细胞共培养将与在小室中共培养。胰蛋白酶消化后，以个密度接种于的外室中。胰蛋白和可能经和调整，促进标志基因的表达，和可能结合参与标志基因的初始转录。刘晶霞，梁志清血清反应因子经组蛋白乙酰化促进大鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌细胞分化第军医大学学报，基金国家自然科学基金面上项目。免疫荧光检测和共培养的，以个密度接种在培养板中，用多聚甲醛固定。采用抗大鼠抗大鼠和抗大鼠的抗，在孵育。然后采用偶联抗孵育。最后采用，修饰通过转录因子调控基因表达，。是特异性基因表达的关键转录因子之。报道与乙酰化结合可以控制的分化。在本研究中，我们发现在分化中，在标志基因启动子区富集量增加，促进中标志基因的表达。进步，我们通过，并观察了的富