添加培养减少体外培养的组织细胞凋亡，增强其抗凋亡能力霍乱毒素通过上调的基因表达，促进其增殖。结论我们开发了种新型肝癌组织的体外维培养模型，它可以作为进步的药物试验和人源性异种移植模型的工具。关键词培养表达水平原代组织肝癌肝细胞癌霍乱毒素肿瘤基础研究需要合适的临床前模型，直以来，以人源性肿瘤细胞系为主的维体外培养模型是肿瘤研究的有力工具。培养的细胞系多为贴壁或悬浮生长，可无限增殖，连续传代，倍增时间短，这对于基础研究药物研发高通量筛选都十分有利。然而细胞系长期体外传代培养后，转录组基因组染色体数目等会发生改变此外单层的细胞系适应了体外培养皿的环境，缺乏瘤内异质性和肿瘤微环境的作用，无法重现肿瘤的原始新型肝癌组织的体外三维培养模型肝癌论文培养基，具体分组及培养基成分同培养组。所有组织在恒温培养箱中培养天，每天更换次培养基。表实验分组及培养基成分免疫荧光染色检测组织凋亡取培养后的组织，经多聚甲醛固定，常规梯度蔗糖脱水包埋，制备冰冻切片。根据检测试剂盒说明书，按步骤进行凋亡染色漂洗，在含的柠檬酸钠液中冰上孵育滴加反应液现配现用，湿盒中避光，恒温箱中孵育漂洗，溶液染核，常温中避光孵育抗荧光淬灭液封片，避光保存切片。荧光显微镜于倍视野下拍照，每张玻片随机取个视野。摘要目的利用肝癌组织进行体外的维，组织块培养，通过添加和霍乱毒素，工基质胶，使其覆盖组织块最后添加的培养基，具体分组及培养基成分同培养组。所有组织在恒温培养箱中培养天，每天更换次培养基。漂洗，室温封闭滴加和抗，湿盒中过夜孵育漂洗，滴加相应种属的荧光标记的抗，室温下湿盒中避光孵育漂洗，溶液染核，常温中避光孵育抗荧光淬灭液封片，避光保存切片。荧光显微镜于倍视野下拍照，每张玻片随机取个视野。统计学处理所有免疫荧光染色实验均采用软件获得平均荧光强度的半定量数据。所有数据均以均数标准差表示。应用软件进行非配对检验的统计分析。表示差异有统计学意义。新型肝癌组织的体外三维培组基因组染色体数目等会发生改变此外单层的细胞系适应了体外培养皿的环境，缺乏瘤内异质性和肿瘤微环境的作用，无法重现肿瘤的原始空间结构，难以客观真实地反应肿瘤的实际特性，这也许是导致体外药敏实验与临床药物试验结果出现差异的原因之。因此需要进步地完善以模拟体内肿瘤的生长模式。表实验分组及培养基成分免疫荧光染色检测组织凋亡取培养后的组织，经多聚甲醛固定，常规梯度蔗糖脱水包埋，制备冰冻切片。根据检测试剂盒说明书，按步骤进行凋亡染色漂洗，在含的柠檬酸钠液中冰上孵育滴加反应液现配现用，湿盒中避光，恒温箱中孵育漂洗，溶液染核，常温中避光孵育抗荧光淬灭液封片，避摘要目的利用肝癌组织进行体外的维，组织块培养，通过添加和霍乱毒素，优化培养条件，建立种高活性的肝癌组织体外培养模型。方法收集中山大学肿瘤防治中心肝胆科的肝癌组织标本，经清洗冻存复苏等处理后分为对照组组组组，同时进行体外的维，和维培养。各组组织采用断裂的原位末端标记法检测组织细胞凋亡情况，检测等相关基因的表达水平，免疫荧光染色检测和蛋白表达情况，筛选并确定最优的体外培养方法。结果培养组的组织细够上调了的表达，因此在该体系中具有抗凋亡的作用，并且在定程度上促进细胞增殖。霍乱毒素作为蛋白激酶的激动剂，是培养中常规的添加物，能显著促进上皮细胞和干细胞增殖，我们的结果也支持这结论。能显著上调抗凋亡蛋白的表达，但同时它也能显著上调促凋亡蛋白的表达，两者的效应相互抵消，所以组的凋亡几乎和对照组样另方面显著上调了的表达，因此在该体系中主要起到促增殖的作用。除此之外，培养组整体的组织细胞凋亡均少于培养组，证实了培养的效果优于培养。根据上述的体外结果，我们筛选出最优的培养方案，即添加和霍乱毒素的培养。应用该新型模型，我胞核固缩，胞质破碎，裂解成凋亡小体，进而被溶酶体等吞噬消化。细胞凋亡有两种经典途径，首先是外源性途径，也被称为死亡受体途径，是由体外的促凋亡配体和细胞表面的死亡受体结合而激活，并与相关衔接蛋白组成死亡诱导信号复合体进而招募和。在中成熟为，并将下游的裂解为，启动凋亡程序。第是内源性途径，也被称为线粒体途径，其中家族蛋白起着关键的调控作用。内源性凋亡信号激活家族中促凋亡的成员，如文。表达变化为了进步验证培养后肝癌组织的变化，我们进行了检测相关的表达情况，主要有抗凋亡基因，促凋亡基因，增殖相关基因，下游基因图。可以发现组和组均上调的表达，下调的表达但同时组下调的表达，而组上调的表达组和组均上调的表达组上调了的表达。和蛋白表达变化检测中观察到凋亡相关基因的瞬时变化，为了进步验证其长期表达变化，我们检测了和蛋白表源性异种移植小鼠模型的建立热带医学杂志，尹萌，陈焕鹏，李永超，郭荣平，林小军，刘忠华，余波澜，黄朝峰，赵擎宇新型肝癌组织的体外维培养模型现代肿瘤医学，基金广东省省级科技计划项目编号。郭亚焕等发现，肝癌细胞株在维和维培养中，显示出不同的生物学特性。因此，本实验以人体手术的肝细胞癌组织块为研究对象，利用人工基质胶，进行体外的组织培养，并通过添加细胞外信号调节激酶抑制剂和蛋白激酶激动剂霍乱毒素，优化培养条件，开发种高活性的人原代肝癌组织体外培养模型，为进步的药物试验和人源性异种移植，模型提供新的工具。材料与方法实验试剂培养所用的新型肝癌组织的体外三维培养模型肝癌论文已经成功构建经体外培养的肝癌组织的小鼠模型。当然，本实验仍存在以下不足有待进步探索和研究首先体外培养模型中，没有比较培养后的组织和原始肿瘤组织在肿瘤细胞基因谱表达水平肿瘤异质性肿瘤微环境等方面的异同，后续实验可进步验证其次体外培养时间较长，后续将针对时间进行进步优化，有望将该模型应用于药效评价及药物筛选中。参考文献郭亚焕，南克俊，崔洁，等维与维培养肝癌细胞的药物敏感性及生物学特性比较现代肿瘤医学，尹萌，陈焕鹏，李永超，等经体外培养的肝癌组织人源性异种移植小鼠模型的建立热带医学杂志，尹萌，陈焕鹏，李永超，郭荣平，林小军，刘忠华，余波澜，黄朝峰，赵擎宇新型肝癌组织的体外维培养模型现代肿瘤医学，基金广东省省级科技计划项目编号免疫荧光染色检测组织蛋白表达培养组培养组平均荧光强度半定量数据分析。红色蛋白蓝色。有研究认为抑制剂能通过抑制信号通路，调节细胞周期蛋白依赖性激酶的表达，诱导期阻滞，诱导细胞凋亡，并与化疗药物产生协同作用也有研究认为可以降低细胞活性氧自由基水平，减少的磷酸化，上调抗凋亡成分，下调促凋亡成分等方式减少凋亡，并且促进体外干细胞的生长，。我们的研究发现，当在体外培养中添加时，凋亡的细胞减少，其机制可能与抗凋亡蛋白的上调，促凋亡蛋白的下调，以及下游基因的激活有关，另外能究发现，当在体外培养中添加时，凋亡的细胞减少，其机制可能与抗凋亡蛋白的上调，促凋亡蛋白的下调，以及下游基因的激活有关，另外能够上调了的表达，因此在该体系中具有抗凋亡的作用，并且在定程度上促进细胞增殖。霍乱毒素作为蛋白激酶的激动剂，是培养中常规的添加物，能显著促进上皮细胞和干细胞增殖，我们的结果也支持这结论。能显著上调抗凋亡蛋白的表达，但同时它也能显著上调促凋亡蛋白的表达，两者的效应相互抵消，所以组的凋亡几乎和对照组样另方面显著上调了的表达，因此在该体系中主要起到促增殖，促进线粒体释放细胞色素。细胞色素与形成复合体，在复合体中成熟为，并裂解下游，激活凋亡。因此无论在外源性途径还是内源性途径，都是启动凋亡的最终执行者，此外，家族的抗凋亡成员，包括等，以负反馈的方式维持细胞凋亡的平衡。图免疫荧光染色检测组织凋亡培养组培养组平均荧光强度半定量数据分析。图检测组织相关基因表达情况图免疫荧光染色检测组织蛋白表达培养组培养组平均荧光强度半定量数据分析。红色蛋白蓝色可以发现在培养图和培养图中，组和组均上调蛋白的表达，平均荧光强度的半定量数据分析证实了这结果图。但同时，在培养图和培养中，组的蛋白少于对照组，组的蛋白少于组组的蛋白几乎与对照组相同，平均荧光强度的半定量数据分析证实了这结果图。讨论在体外模型中，我们同时进行了肝癌组织的无培养和添加培养，并且评估了和霍乱毒素对组织细胞的凋亡增殖的影响。程序性细胞死亡是维持正常细胞内环境平衡清除病理细胞的重要调控机制，其中凋亡是作用最广泛的种形式。细胞接收激素免疫因子等凋亡信号培养基双抗谷氨酰胺丙酮酸钠非必需氨基酸牛血清白蛋白胰岛素购自美国公司表皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子购自美国公司霍乱毒素购自美国公司胎牛血清购自美国公司购自美国公司检测试剂盒购自美国公司逆转录试剂盒均购自中国公司抗均购自美国公司荧光标记的抗均购自美国的公司其他常用化学试剂购自公司和上海生工公司。新型肝癌组织的体外三维培养模型肝癌论作用。除此之外，培养组整体的组织细胞凋亡均少于培养组，证实了培养的效果优于培养。根据上述的体外结果，我们筛选出最优的培养方案，即添加和霍乱毒素的培养。应用该新型模型，我们已经成功构建经体外培养的