每孔加入反应终止液终止反应，使用酶联免疫检测仪在。同时按照蛋白定量试剂盒说明书操作测定总蛋白浓度。每组样本在每个时间点选个平行样进行检测。表征观察表面形貌扫描电子显微镜观察组材料表面形貌，通过原子力显微镜进步观察纯钛组和纳镜观察组材料表面形貌，通过原子力显微镜进步观察纯钛组和纳米管组表面形貌，使用图形分析软件对样品表面的表面平均粗糙度均方根表面积差值维表面积比维表面积的比值增加的百分比垂直距离等表面粗糙度指标进行定量分析。表面能利用静态水接触角实验检测不同植入材料表面能，每个样本几十纳米不等图。体外实验大鼠骨髓间充质细胞分离和培养取周大雄性大鼠，水合氯醛腹腔注射麻醉后颈椎脱臼处死，浸泡于酒精。迅速分离胫骨和腓骨周围的皮肤肌肉等结缔组织，将股骨和胫骨置于双抗溶液中。在无菌条件下，剪去股骨及胫骨的骨垢端，用无菌注射器吸取培养基冲洗骨髓腔获得细胞悬液，离心后用含胎牛统计学分析采用软件进行数据分析，结果均以来表示，采用单因素方差分析及检验进行组间比较，表引物序列结果样品表征材料表面形貌特点分析扫描电子显微镜下纯钛组表面仅见机械打磨的痕迹图微米骨小梁组表面形成微米骨小梁样表面形貌，有些微米管之间互相交通管径，类似骨小梁结构图，增殖黏附及成骨向分化潜能的影响。最后均用避光染色。激光共聚焦显微镜，下观察。检测成骨标志基因表达细胞接种后，用试剂提取总，使用步法试骨向分化。关键词纳米管微纳米结构种植体表面处理骨髓间充质细胞骨内植入体在整形外科和牙科应用十分广泛，。低弹性模量的纯钛或钛合金是目前植入体的首选材料。但钛及钛合金属于生物惰性材料，直接植入常无法获得良好快速的骨结合，制约了其更为广泛的应用。骨结合是骨内植入体植入成功的标志，细胞在种植体表面黏附增殖水性最好为结果示，微纳米复合钛组和纳米管组的细胞增殖活性显著高于纯钛组和微米骨小梁组结果示时，微纳米复合钛组表面活性最高结果示培养后，微纳米复合钛组肌动蛋白染色最深培养后，微纳米复合钛组表达强于间充质细胞，接种于组材料上，观察细胞黏附情况法检测细胞在材料表面增殖能力碱性磷酸酶，活性检测细胞在材料表面分化能力共聚焦显微镜新型钛表面微纳米共存梯度仿生结构对骨髓的影响骨科材料论文盒逆转录成，再行检测。引物序列如表所示。反应条件预变性，变性，退火，运行个循环，目的基因表达均依据管家基因表达水平进行标准化处理后进行比较，根据法对成骨标志基因和型胶原，进行基因相对表达倍数转具有微纳米级共存的梯度结构，从仿生角度，具有微纳米级共存的梯度仿生表面结构更利于植入体周围骨组织营养运输和骨引导生长。目前，钛材如何在维空间中影响细胞植入体的相互作用尚未达到共识。本研究制备种新型微纳米共存的梯度仿生表面结构，即在微米骨小梁样结构上制备纳米管结构，并研究其对体外大鼠骨髓间充质细胞髓的影响骨科材料论文。摘要目的制备种新型微纳米共存梯度仿生表面结构，并探究其对骨髓间充质细胞生物学活性的影响。方法通过放电等离子烧结法和阳极氧化处理分别在纯钛表面纯钛组制备微米骨小梁样结构微米骨小梁组和纳米管形貌纳米管组再通过阳极氧化法在微米骨小梁样结构上制备纳米管结构，形成新型是种植体与周围组织作用的关键环节，通过影响细胞黏附增殖分化等细胞反应最终影响植入体骨结合性能，。如何通过种植体表面改性促进成骨细胞早期黏附，缩短植入体骨结合时间，增强骨结合强度，仍然是口腔种植体领域研究热点，。研究证实，通过电化学阳极氧化形成的纳米级表面形貌可以促进成骨细胞在植入体表面的早期附着。同时，米骨小梁组和纳米管组。结果示纳米管组和微纳米复合钛组表面细胞所有成骨转录因子的基因表达水平强于纯钛组和微米骨小梁组，其中型胶原基因表达水平差异有统计学意义。结论微纳米复合钛这种新型微纳米共存梯度仿生表面结构能有效促进骨髓间充质细胞黏附增殖及，下观察细胞黏附免疫荧光检测相关蛋白肌动蛋白黏着斑蛋白骨钙素，骨桥蛋白，表达观察细胞成骨转录因子型胶原，表达情况。结果微纳米复合钛组表面纳米共存梯度仿生表面结构，命名为微纳米复合钛组。应用扫描电子显微镜，和原子力显微镜，接触角，测量对纯钛组微米骨小梁组纳米管组和微纳米复合钛组进行表征观察。将大鼠骨髓新型钛表面微纳米共存梯度仿生结构对骨髓的影响骨科材料论文测。引物序列如表所示。反应条件预变性，变性，退火，运行个循环，目的基因表达均依据管家基因表达水平进行标准化处理后进行比较，根据法对成骨标志基因和型胶原，进行基因相对表达倍数转化。新型钛表面微纳米共存梯度仿生结构对通管径，类似骨小梁结构图纳米管组表面形成均排列的纳米管样结构图图微纳米复合钛组表面形成微米骨小梁结构上有均排列纳米管的新型梯度仿生表面结构。图材料表面形貌扫描电镜观察原子力显微镜下可见纯钛组表面光滑，没有明显的孔洞或任何规则的形状纳米管组纳米孔近似圆形，直径从十胎牛血清的培养基重悬，记为。体积分数为饱和湿度的细胞培养箱孵育。后首次换液，更换新鲜培养基，隔日换液，待细胞生长至融合时按∶传代培养。在细胞超净台中，将第代以细胞密度接种于组植入材料表面，置于饱和湿度的培养箱中培养。在不同时间点进行如下检测。新型钛表面微纳米共存管组表面形貌，使用图形分析软件对样品表面的表面平均粗糙度均方根表面积差值维表面积比维表面积的比值增加的百分比垂直距离等表面粗糙度指标进行定量分析。表面能利用静态水接触角实验检测不同植入材料表面能，每个样本表面随机选取个点进行测量。新型钛表面微纳米共存梯度仿生结构对骨髓面随机选取个点进行测量。碱性磷酸酶检测钛材样品接种细胞后，将培养基更换为成骨诱导液含体积分数的胎牛血清，地塞米松抗坏血酸甘油磷酸钠的培养液。每换液次。培养后，清洗次，每孔加入裂解液，放置过夜。次日细胞裂解液和对硝基苯磷酸盐清的培养基重悬，记为。体积分数为饱和湿度的细胞培养箱孵育。后首次换液，更换新鲜培养基，隔日换液，待细胞生长至融合时按∶传代培养。在细胞超净台中，将第代以细胞密度接种于组植入材料表面，置于饱和湿度的培养箱中培养。在不同时间点进行如下检测。表征观察表面形貌扫描电子显纳米管组表面形成均排列的纳米管样结构图图微纳米复合钛组表面形成微米骨小梁结构上有均排列纳米管的新型梯度仿生表面结构。图材料表面形貌扫描电镜观察原子力显微镜下可见纯钛组表面光滑，没有明显的孔洞或任何规则的形状纳米管组纳米孔近似圆形，直径从十几纳米至上百纳米不等，纳米孔深度从十几