进内皮细胞增殖，这将是血管新生的来源，。由此作者假设，在内皮及胶质细胞中的表达上升并且在脑缺血后的血管新生过程中分泌增多。另外，结合受体，同时激活下游的通路。然后缺血的脑组织分泌血管生成因子，包括和，从而促进血管的新生，使侧支循环建立。当前研究提示在小鼠脑缺血模型中，的表达在星形胶质细胞中增高且来自细胞的分泌，同时可以诱导系列血管生小鼠脑缺血后与的表达研究实验医学论文蛋白的表达，蛋白水平也明显上调。此外，在眼底新生血管的模型中，增加的基因表达，的转录水平也相应的提高，。也有报道，增强了在大鼠肺癌细胞中的影响。另外，在非小细胞肺癌中，是信号通路的个上游调节因子，。并且，与在高内皮小静脉中有着密切的关系。这些数据都表明，可能是信号通路的调节器。这提示进步研究，在小鼠脑缺血模型中，是否通过信号通路来促进血局限于小鼠视网膜，也在小鼠的脉络膜血管系统中有表达。与数据表示致，研究报道在正常成人视网膜乳腺皮肤和肠血管中低水平表达，。基于之前的研究，被认为是种新型的新生血管调节因子，其表达几乎完全仅限制于血管系统。因此，推测可能在卒中后的血管生成中起调节作用。为了验证这猜测，该研究检测在小鼠脑缺血模型后的，和，及的表达变化。结果显示及蛋白的表达在缺血后时明显增高并且在达高峰，直至第出现相比对这个结果与先前的研究结果致。本课题中，图证实的表达较假手术组增多，且表达部位以星形胶质细胞和微血管的内皮细胞为主，并随着缺血时间的延长，阳性细胞的表达呈递增趋势，直至缺血后天达峰值。并发现蛋白在第相比于假手术组明显增高，在第天时达到最高值，并且直至第天开始出现下降趋势图，图因此，本文猜想，在小鼠脑缺血模型中，主要在内皮细胞和星形胶质细胞的表达明显升高，并且分泌到细胞外环境中，然后调节血管的再生从而保护缺血后的脑组织。图排除标准评分分及分小鼠实验时间点前死亡的小鼠取脑时发现为蛛网膜下腔出血或脑出血小鼠。伊红染色小鼠深度麻醉后打开胸腔，暴露心脏，从左心室插管，剪开右心耳，灌注冲洗血管内血液，至右心耳流出液体澄清后灌注多聚甲醛，断头取脑后将小鼠脑组织臵于多聚甲醛中固定后，脱水透明石蜡包埋，相邻切片进行苏木精伊红染色。染色方法甲苯依次洗片，无水乙醇各，及乙醇各后蒸馏水洗，苏木精液染色，洗去染色液，盐酸备用，于颈内动脉系活结暂时阻断血流，后系活结于颈总动脉上。将鼠板逆时针旋转，在颈外动脉上距分叉用显微剪剪小口，将标记好的线栓由此切口插入颈总动脉中。后将鼠板转回，将线栓从颈总动脉拔出至颈动脉分叉稍尾侧后将线栓转向滑入颈内动脉，解开颈内动脉活结后继续将线栓插入颈内动脉，进线长度约为距颈动脉分叉处，略感阻力时，于颈外动脉上系线固定线栓，松颈总动脉活结。观察无出血后缝皮。随机分为两组假手术组组，假手术组不插入尼龙线栓其余操作同模型组。个胶孔等质量上样蛋白，两侧胶孔分别加入蛋白标记，连接电源，电压电泳，改为电泳。电泳完毕后，组装转膜装臵，连接电源恒流，转膜。聚偏氟乙烯，膜于的脱脂奶粉溶液内室温封闭后抗稀释液，孵育过夜。次日用洗膜缓冲液，溶液漂洗膜次，每次。随后孵育加入碱性磷酸酶标记的山羊抗鼠抗准如下分，无神经损伤症状分，提尾时鼠病灶对侧前肢伸展不全分，鼠行走时向瘫痪侧转圈分，鼠向瘫痪侧倾倒分，无自主活动或意识丧失。小鼠深度麻醉后灌流至右心耳流出澄清液体，灌注多聚甲醛后，断头取脑，苏木精伊红染色观察，免疫组化观察，蛋白印迹观察。小鼠脑缺血后与的表达研究实验医学论文。小鼠于手术后相应时间点，迅速断头取脑，分离缺血侧脑组织，臵于液氮速冻，保存备用。每个馏水稍洗，后及乙醇，无水乙醇，甲苯各，中性树胶封固。小鼠称重后水合氯醛麻醉，采用的改良线栓法建立小鼠模型。小鼠头左尾右固定于镜下鼠板后充分暴露颈部，备皮消毒后，于胸骨柄及下颌骨间取长约正中切口。分离颈总动脉并于其近心端挂线备用，结扎颈外动脉，于结扎线近心端挂两条线备用，于颈内动脉系活结暂时阻断血流，后系活结于颈总动脉上。将鼠板逆时针旋转，在颈外动脉上距分叉用显微剪剪小口，将标记小鼠脑缺血后与的表达研究实验医学论文组小鼠分别于手术后相应的时间点，即术后时取材，取材前进行评分。神经功能缺损评分实验动物评分标准如下分，无神经损伤症状分，提尾时鼠病灶对侧前肢伸展不全分，鼠行走时向瘫痪侧转圈分，鼠向瘫痪侧倾倒分，无自主活动或意识丧失。小鼠深度麻醉后灌流至右心耳流出澄清液体，灌注多聚甲醛后，断头取脑，苏木精伊红染色观察，免疫组化观察，蛋白印迹观察。小鼠脑缺血后与的表达研究实验医学论文美国，碱性磷酸酶标记的山羊抗鼠抗博士德，中国，发光试剂盒博士德，中国。应用软件实验数据结果为，组间差异采用单因素方差分析的方法来检验和之间的关系，统计分析，以为差异有统计学意义。小鼠称重后水合氯醛麻醉，采用的改良线栓法建立小鼠模型。小鼠头左尾右固定于镜下鼠板后充分暴露颈部，备皮消毒后，于胸骨柄及下颌骨间取长约正中切口。分离颈总动脉并于其近心端挂线备用，结扎颈外动脉，于结扎线近心端挂两条线较假手术组增多，且表达部位以星形胶质细胞和微血管的内皮细胞为主，并随着缺血时间的延长，阳性细胞的表达呈递增趋势，直至缺血后天达峰值。并发现蛋白在第相比于假手术组明显增高，在第天时达到最高值，并且直至第天开始出现下降趋势图，图因此，本文猜想，在小鼠脑缺血模型中，主要在内皮细胞和星形胶质细胞的表达明显升高，并且分泌到细胞外环境中，然后调节血管的再生从而保护缺血后的脑组织。排除标准评分分及分小鼠实验时间点前死亡的小鼠取脑时发室温。再次用溶液漂洗膜次，每次。膜加入现配化学发光试剂发光剂，和两种试剂等体积混匀显色后放入凝胶成像仪进行曝光，至出现特异性条带后停止曝光。主要试剂蛋白裂解液博士德，中国，蛋白酶抑制剂，美国，蛋白，美国，膜，德国，鼠抗单克隆抗体，美国，鼠抗用脑组织加入含蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟，的蛋白裂解液研磨后进行涡旋混匀，静臵。离心后提取上清。测定总蛋白浓度并确定上样量。根据样本蛋白总体积按的比例加入上样缓冲液，充分混匀，水浴锅使蛋白变性，室温冷却后分装保存备用。组装凝胶配臵装臵，灌入分离胶后水封，室温静臵，倒去上方液体，加入浓缩胶，迅速插入梳子，室温凝固。的线栓由此切口插入颈总动脉中。后将鼠板转回，将线栓从颈总动脉拔出至颈动脉分叉稍尾侧后将线栓转向滑入颈内动脉，解开颈内动脉活结后继续将线栓插入颈内动脉，进线长度约为距颈动脉分叉处，略感阻力时，于颈外动脉上系线固定线栓，松颈总动脉活结。观察无出血后缝皮。随机分为两组假手术组组，假手术组不插入尼龙线栓其余操作同模型组。每组小鼠分别于手术后相应的时间点，即术后时取材，取材前进行评分。神经功能缺损评分实验动物评分标为蛛网膜下腔出血或脑出血小鼠。伊红染色小鼠深度麻醉后打开胸腔，暴露心脏，从左心室插管，剪开右心耳，灌注冲洗血管内血液，至右心耳流出液体澄清后灌注多聚甲醛，断头取脑后将小鼠脑组织臵于多聚甲醛中固定后，脱水透明石蜡包埋，相邻切片进行苏木精伊红染色。染色方法甲苯依次洗片，无水乙醇各，及乙醇各后蒸馏水洗，苏木精液染色，洗去染色液，盐酸乙醇，流水冲洗，蒸馏水洗，伊红液染色，蒸小鼠脑缺血后与的表达研究实验医学论文得以恢复，这将减少脑组织的缺血后损伤。表达于细胞的不同部位，包括胞核胞浆质膜细胞外基质血清和脑脊液，。等报道，分布于整个脑内。的染色结果揭示，标志性表达于微血管中，并且表达的细胞显示出与星形胶质细胞有相似的细胞形态学。就目前的发现显示，在小鼠脑缺血模型中，在细胞胞浆的表达占据着主导地位图。不仅表达在脉管系统，也在星形胶质细胞细胞中表达。这个结果与先前的研究结果致。本课题中，图证实的表性颅内出血性以及蛛网膜下腔出血性卒中几种。它是人类致死和致残率的危险因素。卒中后的侧支循环开放和恢复缺血半暗带的血流灌注是保护缺血脑组织的关键。然而，卒中后的血管新生机制仍是目前研究的热点之。等曾报道，相比于正常小鼠的视网膜，在小鼠眼睛视网膜新生血管的重构过程中表达明显增高。研究观察还发现，的表达不仅局限于小鼠视网膜，也在小鼠的脉络膜血管系统中有表达。与数据表示致，研究报道在正常成人视网膜乳腺皮肤和肠血管中低水平表达，。基因子，如和的表达，通过调节通路来促进侧支的形成。至于调节脑缺血后的血管新生具体机制，仍需进步的研究和证实。实验中免疫组化和均显示在小鼠脑缺血模型中的表达变化呈致，变化趋势相似，多次重复试验结果证实这观点。这与之前相关研究指出的在脑缺血后与的表达存在定相关性。但本课题并未继续探讨下游信号转导系统也是弊端之。本课题通过对相关实验结果进行分析证实与的表新生。在缺血模型中，现研究发现蛋白在第相比于对照组明显增高，在第天时达到最高值，并且直至第天开始出现下降趋势图图。的表达增高，同时的表达也明显升高。这提示，在小鼠脑缺血模型中，可能通过上调信号通路来促进血管的再生，从而保护缺血脑组织受损。等证明，在存在的条件下，结合，即信号通路的受体，然后