于倒臵显微镜观察细胞形态后，每孔加。糖原检测参考文献并加以改进检测糖原。细胞接种至孔培养板，应用葡萄糖测定试剂盒检测上清液葡萄糖含量，计算葡萄糖消耗量。每孔加，继续培养。仪器紫外分光光度仪上海美谱达仪器有限公司酶标仪公司培养箱上海力申科学仪器有限公司倒臵显微镜公司。，充分混匀溶解结晶后，于酶标仪双波长处测量吸光度值。正交实验优选细胞模型培养条件以及孵育时间作为影响因素，选择对细胞损伤较小浓度较大的个水平，见表。按照正交表进行实验。表因素水平表将细胞以每孔个接种于个孔培养板。每板设个对照组和个孵育时细胞模型的稳定时间各模型组细胞的葡萄糖消耗量在内均显著低于对照组细胞，其中以葡萄糖消耗减少幅度最大，见表图。表明本方法建立的细胞模型最佳，内稳定。模型细胞糖原含量的变化模型建立后，蒽酮法检测细胞糖原含量，并用蛋白质浓度进行校准，结果细实验结果分析验证实验结果表方差分析表作用相近联合诱导条件下葡萄糖消耗量的比较表细胞模型不同时间葡萄糖消耗量的变化依据正交实验结果进步比较和，结果见表。葡萄糖消耗最低，最高，且两组之间比较，差立细胞模型的最佳条件。蒽酮法检测细胞糖原含量，油红染色观察细胞形态变化。结果影响细胞葡萄糖消耗的主次因素顺序为孵育时间联合的高糖培养基孵育细胞，葡萄糖消耗减少了。模型组细胞糖原合成较对照组显著减少，细胞脂肪颗粒明显增加。最高，且两组之间比较，差异有统计学意义。虽然与相近，但差异无统计学意义。考虑低浓度小剂量长时间作用，更接近人体形成的病理生理过程，故选用作为联合诱导的造模条件称为联合诱导组。次验证性实验结果显示，联合诱导组较对照组葡萄糖消耗明显减少，蒽酮法检测细胞糖原含量，并用蛋白质浓度进行校准，结果细胞糖原含量显著低于对照组降低百分比为。模型细胞的形态变化造模后油红染色，倒臵显微镜下观察细胞形态，脂肪滴被染成鲜红色。与对照组比较，模型组细胞体积增大，细胞中胰岛素抵抗细胞模型建立的正交实验研究实验医学论文有统计学意义。虽然与相近，但差异无统计学意义。考虑低浓度小剂量长时间作用，更接近人体形成的病理生理过程，故选用作为联合诱导的造模条件称为联合诱导组。次验证性实验结果显示，联合诱导组较对照组葡萄糖消耗明显减少，分别为和。表明重复性好，稳定可抗是型糖尿病高脂血症高血压病冠心病和脂肪肝等系列代谢相关疾病发生发展的原动力，是其共同的病理生理基础。肝脏是胰岛素的主要效应器官，是摄取储存合成和代谢葡萄糖的主要场所，在维持血糖稳定中起着最直接和最重要的作用。因此，肝细胞糖代谢紊乱对的发生发展具有重要意义。表正度的条件培养液均含。饱和湿度条件下培养和组次日换相同条件培养液次。培养至预定时间，弃培养液，洗涤遍，换含的高糖培养液。培养后，应用葡萄糖测定试剂盒检测上清液葡萄糖含量，计算葡萄糖消耗量。每孔加，继续培型细胞作用可持续存在，但时作用最强。结论高糖培养基联合小剂量和，较长时间作用于细胞建立的模型，稳定可靠，重复性好，接近人体的病理生理状态，为防治药物筛选及发病机制研究奠定基础。关键词细胞棕榈酸正交实验细胞模型胰岛素胰岛素抵抗胰岛素分别为和。表明重复性好，稳定可靠。胰岛素抵抗细胞模型建立的正交实验研究实验医学论文。摘要目的探索联合应用胰岛素棕榈酸和高糖建立细胞胰岛素抵抗模型的最佳实验方法。方法单因素考察浓度及孵育时间对细胞增殖活性的影响正交实验确定鲜红色脂滴显著增多，见图。表正交实验结果分析验证实验结果表方差分析表作用相近联合诱导条件下葡萄糖消耗量的比较表细胞模型不同时间葡萄糖消耗量的变化依据正交实验结果进步比较和，结果见表。葡萄糖消耗最低。胰岛素抵抗细胞模型建立的正交实验研究实验医学论文。细胞模型的稳定时间各模型组细胞的葡萄糖消耗量在内均显著低于对照组细胞，其中以葡萄糖消耗减少幅度最大，见表图。表明本方法建立的细胞模型最佳，内稳定。模型细胞糖原含量的变化模型建立后胰岛素抵抗细胞模型建立的正交实验研究实验医学论文以及孵育时间作为影响因素，选择对细胞损伤较小浓度较大的个水平，见表。按照正交表进行实验。表因素水平表将细胞以每孔个接种于个孔培养板。每板设个对照组和个孵育时间相同的模型组，每组孔。待细胞单层贴壁生长至左右时，对照组加正常培养液，模型组按正交实验表加新配制不同消化，按︰的比例传代。取对数生长期细胞用于实验。对细胞增殖的影响根据参考文献，和预实验结果，将细胞以每孔个接种于孔培养板，分为对照组和模型组，每组孔。待细胞单层贴壁生长至左右，对照组加正常培养液，模型组加新配制的不同浓度的和培养液均含。在饱和湿度温下染色弃去油红染液，洗涤遍，每次。镜下观察各组细胞形态。统计学方法实验数据用均数标准差表示，采用统计软件进行数据分析。两组间计量资料比较采用检验，为差异有统计学意义。仪器紫外分光光度仪上海美谱达仪器有限建立细胞模型后，吸弃培养液，洗涤遍。加入胰酶消化后，小心吸弃胰酶，每孔加吹打混匀。取离心后去上清液，加入细胞裂解液，双蒸水定容至，紫外吸收法测定蛋白浓度。余液取加入碱提取液，蒽酮法测定糖原，重复实验次。计算每克蛋白中的糖原含量。细胞模型法细胞培养细胞复苏后，用含的高糖培养基，于饱和湿度条件下培养。待细胞贴壁长满后，弃去培养液，用清洗次。加适量胰蛋白酶消化，按︰的比例传代。取对数生长期细胞用于实验。对细胞增殖的影响根据参考文献，和预实验结果，将细胞以每孔个接种于孔培养板，相同的模型组，每组孔。待细胞单层贴壁生长至左右时，对照组加正常培养液，模型组按正交实验表加新配制不同浓度的条件培养液均含。饱和湿度条件下培养和组次日换相同条件培养液次。培养至预定时间，弃培养液，洗涤遍，换含的高糖培养液。培养细胞糖原含量显著低于对照组降低百分比为。模型细胞的形态变化造模后油红染色，倒臵显微镜下观察细胞形态，脂肪滴被染成鲜红色。与对照组比较，模型组细胞体积增大，细胞中鲜红色脂滴显著增多，见图。继续培养后，弃培养液。每孔加入