的形成起重要调控作用，两者之间的相互协调可激活心脏的正常发育过程特异基因的表达。该实验利用种不同部位的心肌组织裂解液构建有差异的微环境，诱导形成心房肌样细胞心室肌样细胞。这种细胞开始具备心室肌细胞和心房肌细胞的形态和功能工作细胞，执行收缩功能，而窦房结细胞是自律性细胞，它组成心内特殊传导系统。心房肌细胞结构与心室肌细胞相似，但也存在差异。心房肌细胞除收缩功能以外，还具有内分泌功能，能够参与细胞的代谢，而心室肌细胞相关的报道较少。这些差异在诱导骨髓间充质干细胞定向分化为不同心肌样细胞模型中是否存在区别，目前尚未有文献报道。如何构建骨髓间充质干细胞体内外诱导条件，使其向所需的细胞组织定向分化是急需解决的难题。若能通过控制诱导条件，有效监控骨髓间充质干细胞在体内的生物学行为，使其向特定种类的心肌细胞分化，就有可能将来在临床上达到特异性和预期诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的不同部位心肌组织裂解液分析急性心肌梗死论文胞高表达，推测骨髓间充质干细胞定向诱导分化为心房肌样细胞已开始具备分泌心房钠尿肽和类似窦房结的功能，所以发生自律性搏动的时间较心室肌裂解液诱导组早。图心肌样细胞超微结构图各组心肌样细胞免疫荧光染色免疫荧光染色检测心肌样细胞的表达各诱导组细胞免疫荧光染色可见细胞核呈蓝色荧光，呈绿色荧光。心房肌组织裂解液组心室肌组织裂解液组全心组织裂解液组的细胞胞质中均有阳性表达，见图，但在骨髓间充质干细胞中不表达。检测和在心肌样细胞的表达以骨髓间充质干成网状，网状的细胞开始端端相接，连接处膨大增厚逐渐形成竹节样结构，最后融合成肌管样结构。虽然表现相似的形态变化规律，但心房肌和心室肌裂解液诱导组未出现细胞大量聚集卷起形成心肌组织样结构的现象，推测与诱导微环境的单性有关，越是接近全心组织的微环境，越有利于构建适宜心肌组织发育的条件，形成的形态结构会更接近正常心肌组织。各诱导组细胞在融合成肌管样结构后都出现自律性搏动，心房肌组织裂解液诱导组出现肌管样结构并发生自律性搏动的时间比心室肌组织裂解液诱导组早搏动频率较低搏动持续时间较短。造成以上现象差异的原因可能与不同部位的心肌的管，液氮保存用预冷的无菌对心脏完成冲洗，去除杂质血水，冰上操作在超净操作台用预冷无菌冲洗心脏中的杂质血块，分离心包脂肪及血管后，再用冲洗数次，使用眼科剪分离出心房肌心室肌，剪成约大小的组织块，全心组织裂解液仅分离脂肪和结缔组织取出分离干净的心脏心房肌心室肌，在装有无菌中再次分离被膜及血管，并用预冷冲洗数次，使用剪刀将心脏心房肌心室肌剪成大小约的组织块分别取少量心脏心房肌心室肌组织块臵于无菌离心管中，以∶的体积比加入无血清的，夹入颗大钢珠颗小钢珠，臵实验试剂与仪器培养基，加拿大胎牛血清，美国多聚甲醛青链霉素混合剂成脂诱导剂成骨诱导剂，中国多克隆抗体，标记的山羊抗兔多克隆抗体北京博奥森，中国提取试剂盒试剂盒，日本，诺唯赞，南京。实验方法骨髓间充质干细胞系的建立及鉴定取新生的乳鼠，麻醉后分离股骨，注射器抽吸骨髓，转移至离心管中，自然沉降，离心收分化为心肌组织样结构心房肌样细胞心室肌样细胞过程中的形态变化规律诱导后各组细胞免疫荧光染色的表达检测各组细胞的相对表达量透射电镜观察心肌样细胞的形态结构。统计学分析采用软件进行数据统计分析。数据均以表示，经方差齐性检验，方差齐采用检验，方差不齐则采用校正检验进行统计处理。为差异有显著性意义。结果骨髓间充质干细胞多向分化潜能及细胞表面标志物鉴定结果成骨诱导培养周，细胞呈多角形，成骨诱导培养周，细胞逐渐聚集，茜素红染色可见橘红色钙盐成脂诱导培养周，细胞内出现及流式细胞术检测细胞表面标志的表达。全心组织裂解液心房肌组织裂解液心室肌组织裂解液及诱导剂的制备取成年大鼠只，体积分数为乙醇进行皮肤消毒处理，戊巴比妥钠经耳缘静脉注射麻醉，大鼠肢展开，腹部朝上固定，使用灭菌后的眼科剪从鼠胸部的剑突处剪开左胸部，做个形切口暴露心脏，之内完成取材，装入高压灭菌含的管，液氮保存用预冷的无菌对心脏完成冲洗，去除杂质血水，冰上操作在超净操作台用预冷无菌冲洗心脏中的杂质血块，分离心包脂肪及血管后，再用冲洗数次，使用眼科剪分离出心房肌激活阳离子电流通道结构蛋白，参与窦房结细胞自发性舒张期膜去极化过程，与心脏起搏的产生和调节密切相关，也参与交感神经对心率的调节。心房肌组织裂解液构建的微环境中，心房肌样细胞高表达，推测骨髓间充质干细胞定向诱导分化为心房肌样细胞已开始具备分泌心房钠尿肽和类似窦房结的功能，所以发生自律性搏动的时间较心室肌裂解液诱导组早。实验试剂与仪器培养基，加拿大胎牛血清，美国多聚甲醛青链霉素混合剂成脂诱导剂成骨诱导剂，中国多克隆抗体解液和心室肌组织裂解液分别构建不同的微环境，探究不同部位组织裂解液对骨髓间充质干细胞定向分化的影响。各诱导组细胞的形态变化规律相似细胞由长梭形变为短杆状，细胞的突起互相连接形成网状，网状的细胞开始端端相接，连接处膨大增厚逐渐形成竹节样结构，最后融合成肌管样结构。虽然表现相似的形态变化规律，但心房肌和心室肌裂解液诱导组未出现细胞大量聚集卷起形成心肌组织样结构的现象，推测与诱导微环境的单性有关，越是接近全心组织的微环境，越有利于构建适宜心肌组织发育的条件，形成的形态结构会更接近正常心肌组织。各诱导组细胞在融合成肌管样结构后诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的不同部位心肌组织裂解液分析急性心肌梗死论文脂滴，随诱导时间增长，脂滴数量增多，油红染色细胞内可见红色脂滴。骨髓间充质干细胞表面抗原标志物的阳性率分别为，造血干细胞表面抗原标志物的阳性率分别为，。材料和方法设计体外细胞培养定向诱导及鉴定。时间及地点实验于年月至年月在广西医科大学组织学与胚胎学实验室完成。材料实验动物健康级龄大鼠乳鼠只，雌雄不拘，体质量成年大鼠只，雌雄不拘，体质量，由广西医科大学实验动物中心提供，动物使用许可证号桂。诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的不同部位心肌组织裂解液分析急性心肌梗死论文心房肌组织裂解液心室肌组织裂解液分别与含体积分数胎牛血清的按配臵。材料和方法设计体外细胞培养定向诱导及鉴定。时间及地点实验于年月至年月在广西医科大学组织学与胚胎学实验室完成。材料实验动物健康级龄大鼠乳鼠只，雌雄不拘，体质量成年大鼠只，雌雄不拘，体质量，由广西医科大学实验动物中心提供，动物使用许可证号桂。诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的不同部位心肌组织裂解液分析急性心肌梗死论文。表引物序列主要观察指标不同部位的心肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞定向织裂解液诱导组中种基因都有表达，但表达量低于正常心肌细胞组。和只在心房肌组织裂解液诱导组中表达，而在心室肌组织裂解液诱导组中几乎不表达只在心室肌组织裂解液诱导组中表达，而在心房肌组织裂解液诱导组中几乎不表达，见表。讨论微环境心脏是结构极为复杂的有腔器官，其心肌组织包括心房肌心室肌。心肌细胞根据分布和功能的不同，分为心室肌细胞心房肌细胞窦房结细胞包括移行细胞起搏细胞和浦肯野纤维。心房肌细胞和心室肌细胞是工作细胞，执行收缩功能，而窦房结细胞是自律性细胞，它组成心内特殊传导系统。心房肌细胞结构与心心室肌，剪成约大小的组织块，全心组织裂解液仅分离脂肪和结缔组织取出分离干净的心脏心房肌心室肌，在装有无菌中再次分离被膜及血管，并用预冷冲洗数次，使用剪刀将心脏心房肌心室肌剪成大小约的组织块分别取少量心脏心房肌心室肌组织块臵于无菌离心管中，以∶的体积比加入无血清的，夹入颗大钢珠颗小钢珠，臵于组织研磨器中研磨次，每次收集心脏心房肌心室肌组织裂解液于无菌塑料离心管中进行高速低温离心用注射器吸取上清，滤器过滤，分装于管中，储存使用前将全心组织裂解液，标记的山羊抗兔多克隆抗体北京博奥森，中国提取试剂盒试剂盒，日本，诺唯赞，南京。实验方法骨髓间充质干细胞系的建立及鉴定取新生的乳鼠，麻醉后分离股骨，注射器抽吸骨髓，转移至离心管中，自然沉降，离心收集细胞沉淀，加入含体积分数为胎牛血清的，制备成单细胞悬液，接种于孔板，于体积分数为恒湿培养箱中原代培养。连续传代后，取生长良好的第代骨髓间充质干细胞，分别加入成脂成骨诱导剂诱导分化都出现自律性搏动，心房肌组织裂解液诱导组出现肌管样结构并发生自律性搏动的时间比心室肌组织裂解液诱导组早搏动频率较低搏动持续时间较短。造成以上现象差异的原因可能与不同部位的心肌组织裂解液构建的微环境有关。该研究检测发现心房肌样细胞高表达，推测细胞周围的分泌颗粒含有。是心房钠尿肽，主要由心房肌细胞合成分泌，可以促进排钠排尿，有较强的舒张血管功能，所以心房肌组织裂解液诱导组出现的肌管样结构可发生节律性的收缩和舒张。在哺乳动物心脏中以窦房结含量最丰富，占总量的以上。可以编码超极化室肌细胞相似，但也存在差异。心房肌细胞除收缩功能以外，还具有内分泌功能，能够参与细胞的代谢，而心室肌细胞相关的报道较少。这些差异在诱导骨髓间充