卫生装备研究所山东生物材料研究所川大学高分子科学与工程学院提供。细胞即人肝细胞来源于正常人肝组织的人肝细胞株，购自中国科学院上海细胞生物学研究所。实验用主要试剂鼠尾胶原乙酸荧光素甲基偶氮唑盐美国牛纤维蛋白原和牛凝血酶北培养基新生小牛血清胰酶美国人白蛋白检测试剂盒美国公司。用于生物人工肝反应器构建三维支架材料的选择与优化医疗器械论文。支架材料内细胞乳酸脱氢酶漏出量检测优化培养后，收集培养液上清，按试剂盒说明书参数在自动生化分析仪上检测乳酸脱氢酶含量。支架材料内细胞白蛋白合成量检测优化培养后，收集培养液上清，按人白蛋白检测试剂盒说明书检测培养上清中人白蛋白含量。主要观察指标聚氨酯壳聚糖聚乳酸聚羟乙酸酯支架材料上细胞的接种率活性细胞内乳酸脱氢酶漏出量与白蛋白合成量聚氨酯内培养条件优化后细胞的活性细胞内用于生物人工肝反应器构建三维支架材料的选择与优化医疗器械论文剪成，每种材料块。将立方体材料臵双蒸水内，用负压泵排空支架材料内的空气取出支架材料，离心，收集支架材料内的液体，测定支架材料内的液体体积。计算孔隙率，孔隙率支架材料内液体体积支架材料体积。支架材料内细胞接种率测定将聚氨酯壳聚糖聚乳酸聚羟乙酸酯种支架材料裁剪成的立方形即体积，各块，用照射消毒后备用。胰酶消化培养的细胞，用含体积分数新生小牛血清的培养液制成的细胞悬液，将细胞悬液分别接种至种支架材料上，尽量排空支架内的气泡，臵培养板内在细胞培养箱培养。实验对比分析多种维支架材料的孔隙率孔径物理特性等结构特点，观察其与肝细胞的地较硬缺乏弹性的材料，细胞悬液难以进入支架材料内。以上结果提示壳聚糖和聚氨酯的细胞可接种性较高。无论是从材料的肝细胞相容性看还是材料的可接种性看，聚氨酯和壳聚糖均适用于生物反应器的制备。此次实验筛选维支架材料的目的是与聚醚砜中空纤维联合制备生物反应器。中空纤维的制备方法与维支架材料完全不同，同时两种材料均为有机物，难以采用同种方法将两种材料制备在起，只能分开制备两种材料，再将中空纤维穿插于支架材料内，这就要求选择的支架材料必须有较强的弹性而不易碎。有无液体条件下壳聚糖材料的体积变化较大，较长时间无液体浸泡可使壳聚糖材料失去支架材料的原有结构和塌陷变形，应用于乙酸酯内的细胞活性较低，显著低于壳聚糖和聚氨酯，壳聚糖与聚氨酯内培养的细胞活性无差异，提示聚氨酯和壳聚糖更有利于细胞的培养生长。检测支架材料内细胞培养上清中白蛋白含量亦发现，聚乳酸聚羟乙酸酯内细胞的白蛋白合成量低于壳聚糖和聚氨酯，说明聚氨酯和壳聚糖材料内的细胞具有更强的白蛋白合成能力。因此，聚氨酯和壳聚糖是种支架材料中能较好地支持肝细胞黏附生长和功能表达的材料。已有的文献报道认为聚乳酸聚羟乙酸酯与肝细胞有较好的相容性，与此次实验结果不致，其原因可能是此次实验采用的聚乳酸聚羟乙酸酯孔隙率较低和缺乏弹性，影响了细胞的活性和功能。维支架材料的特性良好的肝细图优化聚氨酯材料内细胞乳酸脱氢酶漏出量图优化聚氨酯材料内的细胞白蛋白合成量讨论维支架材料的肝细胞相容性生物人工肝是肝组织工程的个重要分支，用于人工肝支持系统生物反应器的维支架材料应该基本满足组织工程对维支架材料的要求，如良好的生物相容性和细胞相容性可降解性无毒性。壳聚糖聚乳酸聚羟乙酸酯聚氨酯被证实有较好的生物相容性，。此次实验选择支架材料的目的是为生物反应器内的肝细胞提供适宜的生长代谢微环境，故良好的肝细胞相容性是维支架材料应用于生物反应器的关键。此次实验结果显示，种支架材料内培养细胞的乳酸脱氢酶漏出量无差异，提示种支架材料对肝细胞胞经染色呈黑色的球形体，并且均匀分布在材料微孔内，见图。优化培养的细胞活性鼠尾胶原被覆组和聚氨酯对照组的细胞活性在前升高明显，从第天开始，鼠尾胶原被覆组的细胞活性显著高于聚氨酯对照组纤维蛋白凝胶组的细胞活性在内显著升高，除第天与鼠尾胶原被覆组聚氨酯对照组无显著差异外，第，天的细胞活性高于聚氨酯对照组鼠尾胶原被覆组，见图。图优化聚氨酯内培养的细胞荧光显微镜图优化聚氨酯材料内的细胞活性优化培养的细胞乳酸脱氢酶漏出量聚氨酯对照组和鼠尾胶原被覆组的乳酸脱氢酶漏出量在培养的前缓慢升高，在第天升高迅速纤维蛋白凝胶组的乳酸脱氢酶漏出量在酸脱氢酶漏出量比较差异无显著性意义从第天开始，聚氨酯对照组的乳酸脱氢酶漏出量高于鼠尾胶原被覆组纤维蛋白凝胶组，纤维蛋白凝胶组低于鼠尾胶原组，见图。优化培养的细胞白蛋白合成量鼠尾胶原被覆组和聚氨酯对照组的细胞白蛋白合成量在第天最高，随后呈下降趋势，纤维蛋白凝胶组的白蛋白合成量在内逐渐上升第天时，组间白蛋白合成量比较差异无显著性意义第，天时，鼠尾胶原被覆组白蛋白合成量高于聚氨酯对照组，纤维蛋白凝胶组高于鼠尾胶原被覆组聚氨酯对照组，见图。利益冲突文章的全部作者声明，在课题研究和文章撰写过程中不存在利益冲突。写作指南该研究遵守国际医学期刊编辑委结构的变形。因此，此次实验选择有良好肝细胞相容性合适孔隙率较强弹性等优点的聚氨酯进步探讨用于生物人工肝反应器的可行性。维支架材料的细胞白蛋白合成量种维支架材料内的细胞均能合成大量白蛋白，聚氨酯与壳聚糖内的细胞白蛋白合成量比较差异无显著性意义，但聚乳酸聚羟乙酸酯内的细胞白蛋白合成量低于壳聚糖和聚氨酯，见表。聚氨酯材料内细胞培养条件的优化优化培养的细胞形态观察利用染色聚氨酯内的活细胞，荧光显微镜下可见，鼠尾胶原被覆组的细胞在材料内贴壁生长，其贴壁细胞数量明显高于聚氨酯对照组，见图纤维蛋白凝胶组的细胞经染色呈黑色的球形体，并且均匀分布在工肝生物反应器制备的基础，在维支架材料的物理特性上还需具有较强的可接种性及合理的孔性韧性和维立体性，以适应反应器内肝细胞大量高密度培养的要求。细胞在支架材料内的接种率与材料的亲疏水性韧性或弹性微孔孔径等密切相关。此次实验结果显示，壳聚糖内的细胞接种率最高，这可能是由于壳聚糖为亲水性支架材料，细胞悬液能够迅速吸入支架材料内聚氨酯和聚乳酸聚羟乙酸酯均为疏水性支架材料，细胞悬液不能自动吸入支架材料内，但聚氨酯的细胞接种率高于聚乳酸聚羟乙酸酯，其主要的原因是聚氨酯是弹性较强的支架材料，细胞接种时可反复挤压排空气体，而聚乳酸聚羟乙酸酯为质地较硬缺乏弹性的材料，细胞悬用于生物人工肝反应器构建三维支架材料的选择与优化医疗器械论文前维持稳定，在第天升高明显第天时，组间乳酸脱氢酶漏出量比较差异无显著性意义从第天开始，聚氨酯对照组的乳酸脱氢酶漏出量高于鼠尾胶原被覆组纤维蛋白凝胶组，纤维蛋白凝胶组低于鼠尾胶原组，见图。优化培养的细胞白蛋白合成量鼠尾胶原被覆组和聚氨酯对照组的细胞白蛋白合成量在第天最高，随后呈下降趋势，纤维蛋白凝胶组的白蛋白合成量在内逐渐上升第天时，组间白蛋白合成量比较差异无显著性意义第，天时，鼠尾胶原被覆组白蛋白合成量高于聚氨酯对照组，纤维蛋白凝胶组高于鼠尾胶原被覆组聚氨酯对照组，见图。用于生物人工肝反应器构建三维支架材料的选择与优化医疗器械论文任何合法用途。陈黎，黄蕾，余梦瑶，张国英，张世昌用于生物人工肝反应器构建维支架材料的选择与优化中国组织工程研究，基金国家自然科学基金资助项目，项目负责人张世昌。维支架材料的细胞白蛋白合成量种维支架材料内的细胞均能合成大量白蛋白，聚氨酯与壳聚糖内的细胞白蛋白合成量比较差异无显著性意义，但聚乳酸聚羟乙酸酯内的细胞白蛋白合成量低于壳聚糖和聚氨酯，见表。聚氨酯材料内细胞培养条件的优化优化培养的细胞形态观察利用染色聚氨酯内的活细胞，荧光显微镜下可见，鼠尾胶原被覆组的细胞在材料内贴壁生长，其贴壁细胞数量明显高于聚氨酯对照组，见图纤维蛋白凝胶组的细性，与细胞有较好的相容性。显微镜下观察可见，经染色的聚氨酯和聚乳酸聚羟乙酸酯内可见大量细胞贴壁生长，表明细胞能够在材料内较好地黏附生长经染色的壳聚糖内可见细胞互相聚集呈多细胞球形体生长，这可能是由于壳聚糖的亲水性较强，不能吸附血清或培养液中的大量蛋白质，影响受体介导的细胞黏附过程。其他研究也表明肝细胞在壳聚糖内培养呈多细胞聚集生长。材料的亲水性表面电荷和结构不仅影响细胞的黏附，对在材料上培养细胞的活性高低和功能表达均有重要作用，。是评估支架材料内细胞生长状况的有效方法，此次实验结果发现，细胞在聚乳酸聚羟乙酸酯内的细胞活性较低，显著员会学术研究实验与报告和医学期刊编辑与发表的推荐规范。文章查重文章出版前已经过专业反剽窃文献检测系统进行次查重。文章外审文章经小同行外审专家双盲外审，同行评议认为文章符合期刊发稿宗旨。生物统计学声明该文统计学方法已经通过南京医科大学生物统计学专家审核。文章版权文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相关协议。开放获取声明这是篇开放获取文章，根据知识共享许可协议署名非商业性使用相同方式共享条款，在合理引用的情况下，允许他人以非商业性目的基于原文内容编辑调整和扩展，同时允许任何用户阅读下载拷贝传递打印检索超级链接该文献，并为之建立索引，用作软件的输入数据或其它材料微孔内，见图