炎大鼠滑膜组织的表达中国组织工程研究，基金湖北中医药大学研究生创新能力提升项目。材料实验动物级大鼠只，雌性，体质量，动物合格证号鄂，由湖北省实验动物中心提供。饲养条件温度，湿度，自由取食和饮水。实验过程中对大鼠的处臵符合中华人民共和国科技部年颁布的关于善待实验动物的指导性意见。针刀和试剂次性汉章系列无菌针刀由北京健力园医疗器械有限公司生产，牛型胶原蛋白粉末，批号弗氏不完全佐剂，批号购自公司，磷酸盐缓冲液，批号由武汉市皮诺飞生物科技有限公司生产，合成试剂盒批号由美国公司生产。抗批号抗批号购自公司标记山羊抗医药学刊，王凤杰，樊莎莎，陈显兵，等对实验性类风湿关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响免疫学杂志，高薇，冯欣，任立冰，等类风湿关节炎大鼠滑膜组织中凋亡因子和及的表达及意义中国全科医学，王琦在大鼠骨质侵蚀中的作用及药物干预影响南京东南大学，黄英，陈哲，王玉，等中药对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞的影响中华中医药学刊，宋小莉，苏娟，刘重阳，等类风湿关节炎滑膜组织中脯氨酸羟化酶及希佩尔林道肿瘤抑制蛋白的表达及意义中国组织工程研究，肖长虹，顾为望，张嘉宁，等南蛇藤醇提物对类风湿关节炎滑膜增生和软骨侵蚀及降解的抑制作用南方医科大学学报，朱艳媚，祁岗，杨春燕，等藏药十味党参丸抑制大鼠滑膜组织炎性因子表达和细胞凋亡诱导中国高原医学与生物学杂志，党鹏，田杰祥，王钢，等中医药对类风湿关节炎滑膜炎的作用机制中国老年学杂志，贾晓益，魏伟，郑咏秋，等白针刀治疗胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织表达研究风湿免疫科论文加，足趾肿胀程度减轻，关节炎指数评分下降，提示针刀治疗在定程度上改善了大鼠的健康状况，并发挥了减轻足趾肿胀减轻局部组织炎症反应的作用。苏木精伊红染色病理观察显示，针刀治疗组较模型组滑膜层数减少，炎症细胞数量减少，进步说明针刀治疗可以减轻胶原诱导性关节炎大鼠的滑膜增生程度及关节炎症状况，从而对胶原诱导性关节炎大鼠具有较好的治疗作用。检测结果表明，针刀治疗降低了滑膜组织的表达，下调了比值免疫荧光染色检测结果也致性地反映了针刀治疗下调了滑膜组织的比值。但由于实验尚未检测滑膜细胞凋亡情况，故其是否通过途径调节了类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡有待于进步细胞实验验证其调节胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织表达的具体途径，也有待深入研究。图各组大鼠关节滑膜病理形态学观察箭头所指处为滑膜层边缘，苏木精伊红染色，图各组大鼠滑膜组织织，。随着针刀治疗类风湿关节炎的临床观察日益增多，其疗效也逐渐受到认可，但其具体作用机制却未见实验研究报道。过多将阻止其与之间形成同源聚体，而同源聚体的相对减少，使细胞免受凋亡。在类风湿关节炎的发病过程中，呈明显高表达状态，而表达水平升高的幅度远远低于升高的水平，使比值升高，从而造成滑膜细胞增殖凋亡失衡，促进了类风湿关节炎的发生发展，。通过调节比值来发挥对滑膜成纤维细胞的促凋亡作用，从而抑制滑膜细胞增殖，可有效治疗类风湿关节炎。针刀疗法是种融合了中医针刺疗法和西医手术疗法之优点的新疗法。临床研究证实，针刀治疗类风湿关节炎疗效突出，具有抗炎镇痛作用，能有效改善类风湿关节炎患者的疼痛肿胀和功能障碍。在类风湿关节炎发病过程中，关节内炎性反应不断加重，渗出液不断增加，致使关节内承受了巨大的张力，进而导致关节变形甚至功能丧失针刀治疗可以通过针的刺实验过程中监测大鼠般情况，测量大鼠左后足趾厚度，进行关节炎指数评分苏木精伊红染色法观察关节滑膜病理形态应用实时定量法免疫荧光技术分别检测滑膜组织的基因表达水平及免疫荧光强度。实验方案经湖北中医药大学动物实验伦理委员会批准批准号为。结果与结论与正常组相比，模型组左后足趾厚度及关节炎指数评分明显增加与模型组相比，针刀组左后足趾厚度及关节炎指数评分减小病理形态上，模型组较正常组滑膜层数增厚，大量炎症细胞浸润，针刀组较模型组滑膜层数减少，炎症细胞浸润减轻各组间滑膜组织表达水平比较，差异无显著性意义针刀组表达较模型组明显降低与模型组比较，针刀组荧光强度明显降低结果表明，针刀治疗类风湿关节炎的机制可能与下调滑膜组织中表达，降低比值有关。关键词关节炎滑膜类风湿关节炎细胞凋亡针刀滑表引物序列免疫荧光技术检测滑膜组织表达依次将切片放入甲苯甲苯无水乙醇无水乙醇体积分数乙醇乙醇蒸馏水洗。然后组织切片臵于盛满抗原修复缓冲液的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。用组化笔在组织周围画圈，在圈内滴加孵育，在切片上滴加按定比例配好的抗∶，孵育过夜玻片臵于中在脱色摇床上晃动洗涤次，每次。切片稍甩干后在圈内滴加与抗相应种属的标记的抗∶覆盖组织，室温孵育。漂洗次加抗∶，加抗山羊抗兔∶漂洗次后滴加山羊抗兔，避光室温孵育。复染细胞核避光室温孵育。洗次，滴加抗荧光淬灭封片剂封固。切片于荧光显微镜下观察并采集图像。主要观察指标大鼠般情况及体质量大鼠左后足趾厚度及关节炎指数评分大鼠关节滑膜病理形态学观察检测结果免疫荧结果造模后及针刀治疗后，滑膜组织表达未见明显变化，各组间比较差异无显著性意义。与正常对照组比较，模型对照组大鼠滑膜组织表达显著上调与模型对照组比较，针刀治疗组大鼠滑膜组织表达显著下调。与正常对照组比较，模型对照组大鼠滑膜组织表达显著上调与模型对照组比较，针刀治疗组大鼠滑膜组织表达显著下调。见图。免疫荧光检测结果与正常对照组比较，模型对照组大鼠滑膜组织荧光强度显著增加。针刀治疗胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织表达研究风湿免疫科论文。实验动物造模过程的相关问题苏木精伊红染色观察关节滑膜的形态学变化初次免疫后，各组随机选取只大鼠，在戊巴比妥钠麻醉下纵行切开大鼠致炎侧左足膝部皮肤，隔离中央肌肉，暴露膝关节，剥离支持组织。用洗去血迹和残渣，在多聚甲醛中固定周后将组织转移至制却未见实验研究报道。表引物序列免疫荧光技术检测滑膜组织表达依次将切片放入甲苯甲苯无水乙醇无水乙醇体积分数乙醇乙醇蒸馏水洗。然后组织切片臵于盛满抗原修复缓冲液的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。用组化笔在组织周围画圈，在圈内滴加孵育，在切片上滴加按定比例配好的抗∶，孵育过夜玻片臵于中在脱色摇床上晃动洗涤次，每次。切片稍甩干后在圈内滴加与抗相应种属的标记的抗∶覆盖组织，室温孵育。漂洗次加抗∶，加抗山羊抗兔∶漂洗次后滴加山羊抗兔，避光室温孵育。复染细胞核避光室温孵育。洗次，滴加抗荧光淬灭封片剂封固。切片于荧光显微镜下观察并采集图像。主要观察指标大鼠般情况及体质量大鼠左后足趾厚度及关节炎指数评分大鼠关节滑膜病理形态学观察察关节滑膜病理形态应用实时定量法免疫荧光技术分别检测滑膜组织的基因表达水平及免疫荧光强度。实验方案经湖北中医药大学动物实验伦理委员会批准批准号为。结果与结论与正常组相比，模型组左后足趾厚度及关节炎指数评分明显增加与模型组相比，针刀组左后足趾厚度及关节炎指数评分减小病理形态上，模型组较正常组滑膜层数增厚，大量炎症细胞浸润，针刀组较模型组滑膜层数减少，炎症细胞浸润减轻各组间滑膜组织表达水平比较，差异无显著性意义针刀组表达较模型组明显降低与模型组比较，针刀组荧光强度明显降低结果表明，针刀治疗类风湿关节炎的机制可能与下调滑膜组织中表达，降低比值有关。关键词关节炎滑膜类风湿关节炎细胞凋亡针刀滑膜组织表达蛋白家族是参与细胞凋亡的关键调节因子，在蛋白家族中杰祥，王钢，等中医药对类风湿关节炎滑膜炎的作用机制中国老年学杂志，贾晓益，魏伟，郑咏秋，等白芍总苷对胶原性关节炎滑膜组织中表达的影响安徽医科大学学报，赵欣欣，赵丽娟，肖卫国，等反义寡脱氧核苷酸抑制类风湿滑膜细胞增生诱导滑膜细胞凋亡中华风湿病学杂志，任玉伟，宿华威基因家族研究进展大连医科大学学报，江爱娟，王浩，李道卫，等益气活血通络方对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响中华中医药杂志，王娅妮，赵鹏飞，谈文峰，等沉默脂联素受体对脂多糖诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖凋亡的影响南京医科大学学报自然科学版，林昌松，陈秀敏，刘清平，等昆母汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响中药新药与临床药理，张义，郭长青浅析针刀疗法与中医学的关系江苏中医药，胡佳伟，刘维，张博针刀治疗类风湿关节炎临床研究进展天津中医药，吴绪平针刀医学北京中针刀治疗胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织表达研究风湿免疫科论文体积的脱钙液中周，用大头针探刺关节脱钙满意后，臵于常规梯度乙醇中脱水，甲苯透明后进行石蜡包埋，厚连续切片。用苏木精和伊红染色后在倍光镜下观察关节滑膜病理形态。实时定量法检测滑膜组织表达各组所剩另只大鼠在戊巴比妥钠麻醉下用手术刀轻轻刮取左膝关节滑膜组织用于指标检测。切取冰冻滑膜组织，在研钵中加液氮充分研磨，用法提取滑膜组织总，按合成试剂盒说明书操作，将反转录为，运用染料法，在型荧光定量仪上，进行各目的基因的定量检测。引物序列见表由昆泰锐武汉公司合成，以作为内参对照，反应总体系为，反应扩增条件，共个循环。反应结束获得的循环阈值根据采用公式计算目的基因的相对表达