方法将种病毒液分别感染靶细胞，构建含有目的基因过表达的及含有空载体质粒的，最后通过药物筛选去除未稳定转染成功的，最终得到实验所需的细胞。稳定转染后，得到及继续培养细胞并提取细胞，逆转录成行验证，实验重复次，明确过表达。结果长链非编码在结直肠癌中的表达及意义结直肠癌论文筛查后的种细胞及传代于孔板中，每种细胞个复孔，臵于氧化碳细胞培养箱培养。待细胞生存状态良好，融合度达时，分别提取这种细胞的蛋白，按蛋白免疫印迹法常规操作步骤验证下游蛋白在和的表达水平，实验重复次。长链非编码在结直肠癌中的表达及意义结直肠癌论文。研究方法的提取采用法提取总，紫外分光光度计测定波长处的吸光度，计算，鉴定纯度。并随机抽取几对样品的癌组织及癌旁正常组织增加样本量，寻求多中心多地区合作，进行更具代表性的调查研究。本研究初步验证了对结直肠癌的抑癌作用，为深入研究结直肠癌发病及进展机制提供了理论依据，有望用于指导临床治疗及术后随访，但更深入的作用机制及临床应用尚待进步研究将稳转成功并经药物筛查的种细胞及以个孔接种于孔板中，每种细胞个副孔，臵于氧化碳细胞培养箱培养后，去上清，用磷酸盐缓冲液洗次，多聚甲醛溶液固定，结晶紫溶液染色，染色后对肉眼可见的克隆团进行计数，计算克隆形成率克隆形成率克隆数接种细胞数，实验的独立保护因素。随后的人群预后关联分析提示高表达是结直肠癌患者的独立保护因素，明确了对结直肠癌预后的意义。鉴于此，我们进步行体外实验，平板克隆实验结果显示在中，的细胞克隆形成率低于细胞迁移实验结果显示的迁移能力弱于。以上体外功能实验结果显示，过表达抑制了结直肠癌细胞的增殖和迁移，提示可能对结直肠癌起抑癌作用。本研究为了验证与之间可能存在正相关的关系，对及讨论可参与肿瘤的增殖分化浸润及转移等过程，可发挥促癌或抑癌作用。相关研究表明，是种癌基因，在营养不良和饥饿条件下可促进肿瘤发生和程序性细胞死亡。等报道在大多数癌症例如浸润性乳腺癌胶质母细胞瘤畸胎瘤骨髓瘤和胰腺导管癌中起着潜在的致癌作用。虽然上述研究表明发挥癌基因作用，但也有其他研究表明其在不同类型的癌症中发挥相反的作用。等发现，在结直肠癌中的表达是降低的，与作为潜在的肿瘤抑制因子的功能致。本研究显示，结直肠癌组织选标准接受切除术且术后病理活组织检查活检明确诊断为结直肠癌术前均未进行放射治疗化学治疗或其他抗癌治疗术后随访结果完整，生存复发和转移等情况明确。排除标准非原发性结直肠癌者家族性息肉病恶变者。所有结直肠癌患者的肠癌及癌旁正常组织标本采集以保护液处理并以液氮保存。术后随访以首次诊断之日为起点，总生存以术后死亡为随访终点。术后出现复发转移作为无病生存的随访终点。对结直肠癌细胞增殖的作用平板克隆实验检测对结直肠癌细胞克隆形成的影响。在中，细胞克隆形成数低于在与中的表达多次行蛋白免疫印迹法检测下游蛋白在与中的表达水平，结果提示，在中的表达高于，见图。此外，尚有不编码蛋白质的，称为非编码，在结直肠癌进展过程中起重要的调控作用。长链非编码是类位于胞浆或细胞核部分长度大于个核苷酸的，基本不参与编码蛋白，也属于，可通过参与遗传转录和转录后调控等多个层面调节疾病的发生发展。相关研究表明，广泛参与生理和病理各个过程，特别在癌症关系的研究极少，在结直肠癌中的分子作用机制的研究更为罕见。本研究结果提示了可抑制结直肠癌细胞的增殖与迁移，其在结直肠癌中作为种抑癌分子参与肿瘤发生发展及转移是有可能的。本研究尚存在些不足，与临床病理特征的相关分析数据仅来源于单中心，应增加样本量，寻求多中心多地区合作，进行更具代表性的调查研究。本研究初步验证了对结直肠癌的抑癌作用，为深入研究结直肠癌发病及进展机制提供了理论依据，有望用于指导临床治疗及术后随访，但更深入的作用机制及临床应与其临床病理特征的关系，发现肿瘤部位直径及肿瘤的大体分型与结直肠癌中的表达相关，结直肠癌中的低表达以直肠癌肿瘤直径肿瘤大体分型为肿块型者更为多见，并且的高表达是结直肠癌的独立保护因素，也是结直肠癌患者术后的独立保护因素。随后的人群预后关联分析提示高表达是结直肠癌患者的独立保护因素，明确了对结直肠癌预后的意义。鉴于此，我们进步行体外实验，平板克隆实验结果显示在中，的细长链非编码在结直肠癌中的表达及意义结直肠癌论文，见图。结果提示抑制结直肠癌细胞克隆形成。对结直肠癌细胞的迁移作用使用小室检测体外迁移能力。对过表达后，观察到穿过小室的数量较少，见图。实验结果表明，抑制结直肠癌细胞的体外迁移。蛋白免疫印迹法检测下游蛋白在与中的表达多次行蛋白免疫印迹法检测下游蛋白在与中的表达水平，结果提示，在中的表达高于，见，即，其染色体位臵非常靠近，作为上游因子的个反式作用因子与顺式作用元件结合，参与基因表达的调控。目前，关于在结直肠癌中的功能和作用机制报道较少。本研究组旨在分析在结直肠癌中的表达水平及对预后的影响，探究对结直肠癌增殖及转移的影响，以期为结直肠癌治疗提供新的靶标。材料与方法材料收集年月至年月广州医科大学附属第医院胃肠外科的例结直肠癌患者的标本手术切除，标本为配对的癌组织和癌旁正常组织距癌组织的边缘。本组结直肠癌患者的及传代于孔板中，每种细胞个复孔，臵于氧化碳细胞培养箱培养。待细胞生存状态良好，融合度达时，分别提取这种细胞的蛋白，按蛋白免疫印迹法常规操作步骤验证下游蛋白在和的表达水平，实验重复次。长链非编码在结直肠癌中的表达及意义结直肠癌论文。讨论可参与肿瘤的增殖分化浸润及转移等过程，可发挥促癌或抑癌作用。相关研究表明，是种癌基因，在营养不良和饥饿条件下可促进肿瘤发生和程序性细胞死亡。等报道在大多数癌症例具有重要的调节作用。癌基因又名或是个位于至的细胞周期调控基因，在许多癌症中该基因均有异常表达。基因产物是家族的部分，它是种周期蛋白依赖激酶结合蛋白，通过促进复合物的缔合和刺激的活性来对抗对细胞周期进程的抑制活性，。相关研究显示的过表达与头颈癌有关。此外，差异表达还与多种癌症类型相关，例如肺癌乳腺癌结肠癌肾癌白血病和淋巴瘤。通过生物信息学分析序列对比，查找，发现该编码基因附近存在尚待进步研究对结直肠癌细胞增殖的作用平板克隆实验检测对结直肠癌细胞克隆形成的影响。在中，细胞克隆形成数低于，见图。结果提示抑制结直肠癌细胞克隆形成。对结直肠癌细胞的迁移作用使用小室检测体外迁移能力。对过表达后，观察到穿过小室的数量较少，见图。实验结果表明，抑制结直肠癌细胞的体外迁移。蛋白免疫印迹法检测下游蛋白克隆形成率低于细胞迁移实验结果显示的迁移能力弱于。以上体外功能实验结果显示，过表达抑制了结直肠癌细胞的增殖和迁移，提示可能对结直肠癌起抑癌作用。本研究为了验证与之间可能存在正相关的关系，对及进行了转录水平及蛋白水平的检测，结果提示，和下游蛋白在中的表达量均高于，提示质粒成功导入中，且与存在正相关关系。目前，有关与结直肠浸润性乳腺癌胶质母细胞瘤畸胎瘤骨髓瘤和胰腺导管癌中起着潜在的致癌作用。虽然上述研究表明发挥癌基因作用，但也有其他研究表明其在不同类型的癌症中发挥相反的作用。等发现，在结直肠癌中的表达是降低的，与作为潜在的肿瘤抑制因子的功能致。本研究显示，结直肠癌组织中的表达量较相应的癌旁正常组织低，在肠癌细胞中的表达亦低于正常肠黏膜细胞。这与等研究结果致，提示与可能存在正相关关系，调控该基因的表达。分析该组病例中长链非编码在结直肠癌中的表达及意义结直肠癌论文将稳定转染成功并经药物筛查的种细胞及消化并适度稀释，用血细胞计数板计数细胞密度。将个细胞悬液接种于小室上层，将含血清的培养基加至小室下层。臵于氧化碳细胞培养箱培养，取出小室，用洗次，用棉签擦除小室膜上层未穿过膜的细胞，用多聚甲醛溶液固定，室温干燥小室，结晶紫染色，用干净棉签再次擦除未穿过小室的小室上层细胞，用流动水冲洗小室上多余的结晶紫，室温干燥小室。使用倍倒臵显微镜，随机选择个视野拍照，然后计算细胞数，实验重复次。将稳转成功并经药物筛查后的种细胞，下游。结束后用法处理实验数据，其中，中位数及以上为高表达，中位数以下则为低表达。应用慢病毒表达系统按实际说明书进行实验操作，将含有目的基因过表达的质粒及含有空白载体质粒分别与转染试剂混合，得到种试剂混合液，通过转染，制备并收集对应的病毒液。采取稳定转染的方法将种病毒液分别感染靶细胞，构建含有目的基因过表达的及含有空载体质粒在癌组织与癌旁正常组织中的表达水平采用检测的表达水平。在结直肠癌组织中的表达水平低于癌旁正常组织，比较差异有统计学意义见图。的样品检测到在癌组织中的表达低于配对的癌旁正常组织，见图。在与中的表达采用检测在与中的表达水平，结果提示在中的表达高于，见图。长链非编码在结直肠癌中的进行核酸电泳，结果显示的量是相对准确可信的。检测的表达提取总后定量，逆转录为。引物，上游，下游引物，上游，下游。结束后用法处理实验数据，其中，中位数及以上为高表达，中位数以下则为低表达。应用慢病毒表达复次。将稳定转染成功并经药物筛查的种细胞及