犻狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狉狅狔犪犾犼犲犾犾狔犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前言本标准的附录为资料性附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位中华人民共和国浙江出入境检验检疫局本标准主要起草人施伟良张晓峰朱振江程洁苏宗仁本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定方法酶联免疫法范围本标准规定了蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留量的酶联免疫测定方法本标准适用于蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留总量的测定规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注明日期的引用文件其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本凡是不注明日期的引用文件其最新版本适用于本标准分析实验室用水规格和试验方法方法提要本标准以酸性缓冲液来沉淀蜂王浆中蛋白质提取残留的链霉素和双氢链霉素然后以柱净化处理后样品中残留的链霉素和双氢链霉素与酶标进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定方法酶联免疫法.行试验测定空白试验除不加入试样外均按上述步骤进行阳性质控每次测定均应做个添加链霉素和双氢链霉素标准品溶液的样品测定以确定实验过程的操作准确性结果计算从标准品和样品的吸光度值中减去空白孔的平均值标准品和样品的平均值除以零标准的平均值再乘以零标准为最大百分比吸光度值其他值为最大吸光度值的百分数以吸光度的百分比值为纵坐标链霉素标准溶液浓度的对数值为横坐标绘制标准工作曲线从标准工作曲线上得到试样中相应的链霉素浓度后结果按式进行计算式中样品中链霉素和双氢链霉素的残留总量单位为微克每千克从标准工作曲线上得到的样品中链霉素和双氢链霉素浓度单位为纳克每毫升样品溶液的最终定容体积单位为毫升样品溶液所代表的最终试样质量单位为克也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算所得结果表示至位小数确证试验如被测样品中为阳性结果时应用其他方法进行确证本方法测定低限和回收率方法测定低限回收率本方法中链霉素和双氢链霉素添加浓度及回收率的试验数据链霉素添加量为时回收率为添加量为时回收率为装置氮吹仪具塞试管电子天平酸度计试样的制备和保存试样的制备原始样品总量不得少于蜂王浆充分搅拌均匀后将样品分成两等份冻干粉采用分法将样品分成两等份分好的样品装入洁净容器加封并做标识试样的保存试样放置条件下保存分析步骤提取称取蜂王浆样品置于具塞试管中加入庚烷磺酸钠缓冲液充分混匀条件下离心直至清亮取上层液备用小柱依次用甲醇和水活化吸取样品提取液上柱然后水洗甲醇洗柱去除残留的液体氮气吹干燥柱子然后以甲醇洗脱将样品收集于干净塑料试管氮气吹干以缓冲液溶解吹干残留物用于检测最后样品稀释倍数为王浆冻干粉则用水以比例稀释充分浸泡以上后称取按照上述王浆前处理方法进行提取最后以缓冲液溶解吹干残留物最后样品稀释倍数为测定条件操作条件所有操作应在室温下进行链霉素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温后方可使用洗板条件人工洗涤次数次以上每次加入洗涤液量为自动洗板可以预定次酶标仪测定条件酶标仪测定波长为测定加量为时回收率为双氢链霉素添加量为时回收率为添加量为时回收率为添加量为时回收率为附录资料性附录链霉素试剂盒荷兰公司产品试剂盒组成预包被抗体的孔板条孔链霉素标准溶液和链霉素酶标记物冻干粉根据链霉素试剂盒中说明可用稀释缓冲液配制成链霉素酶标记物溶液抗链霉素抗体冻干粉根据链霉素试剂盒中说明可用稀释缓冲液配制成抗链霉素抗体溶液底物溶液稀释缓冲液洗涤浓缩液可用水倍稀释后使用反应终止液试剂盒应在避光条件下保存溶解后的酶标记物和抗体溶液需条件冻存标准校准曲线标准校准曲线见图图链霉素标准曲线给出该信息是为了方便本标准的使用者并不表示对产品的认可如果其他产品具有相同的效果需经实验评估后使用这些等效产品书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定方法酶联免疫法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狊狋狉犲狆狋狅犿狔犮犻狀犪狀犱犱犻犺狔犱狉狅狊狋狉犲狆狋狅犿狔犮犻狀狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狉狅狔犪犾犼犲犾犾狔犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犈狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋犪狊狊犪狔发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前言本标准的附录为资料性附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位中华人民共和国浙江出入境检验检疫局本标准主要起草人施伟良张晓峰朱振江程洁苏宗仁本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准进出口蜂王浆中链霉素和双氢链霉素残留量测定方法酶联免疫法范围本标准规定了蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留量的酶联免疫测定方法本标准适用于蜂王浆和王浆冻干粉中链霉素和双氢链霉素残留总量的测定规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注明日期的引用文件其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本凡是不注明日期的引用文件其最新版本适用于本标准分析实验室用水规格和试验方法方法提要本标准以酸性缓冲液来沉淀蜂王浆中蛋白质提取残留的链霉素和双氢链霉素然后以柱净化处理后样品中残留的链霉素和双氢链霉素与酶标加量为时回收率为双氢链霉素添加量为时回收率为添加量为时回收率为