犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜蜂蜜中转基因成分检测方法普通犘犆犚方法和实时荧光犘犆犚方法犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔犿狅犱犻犳犻犲犱犮狅犿狆狅狀犲狀狋狊犻狀犺狅狀犲狔犆狅狀狋犲狀狋犻狅狀犪犾犘犆犚犪狀犱狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犘犆犚发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布版权所有禁止翻制电子传阅发售书书书前言本标准的附录和附录均为规范性附录。本标准由国家认证认计只能扩增外源基因中片段的引物和进行扩增，根据实验结果，判定该蜂蜜是否带有植物外源基因成分，从而判断蜂蜜中是否含有转基因成分。实时荧光检测是在常规基础上加入荧光标记探针来实现核酸定量，由于荧光探针在反应时被切割的数量与原始模板量成正相关，因此，可以通过检测荧犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售光信号的强度来推算转基因含量。待测样品中转基因的含量是通过与用系列已知不同含量的转基因标准品而作出分析实验室用水规格和试验方法基因分析检测实验室技术要求植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法术语定义和缩略语术语和定义下列术语和定义适用于本标准。犅犪犮犻犾犾狌狊狋犺狌狉犻狀犵犻犲狀狊犻狊苏云金芽孢杆蜂蜜中转基因成分检测方法普通方法和实时荧光方法.扩增曲线图。定性检测狇狌犪犾犻狋犪狋犻狏犲犱犲狋犲犮狋犻狅狀对样品中转基因成分进行检测，以判定该样品是否为转基因产品。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售缩略语下列缩略语适用于本标准。转基因生物。花椰菜花叶病毒启动子。犲狀犮犲犘犆犚发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布版权所有禁止翻制电子传阅发售书书书前言本标准的附录和附录均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位中华人民共和国北京出入境检验检疫局起草。本标准主要起草人饶红冯骞陈广全付浦博曾静汪琦张惠媛。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售蜂蜜中转基因成分检测方法普通犘犆犚方法和实时荧光犘离，从而荧光检测系统可接收到荧光信号，即每扩增条链，就有个荧光分子形成，实现了荧光信号的积累与产物形成完全同步。就是通过对扩增反应中每个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量反应中，引入了种荧光化学物质，随着反应的进行，反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过个循环，收集次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到条荧转基因成分进行检测，以判定该样品是否为转基因产品。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售缩略语下列缩略语适用于本标准。转基因生物。花椰菜花叶病毒启动子。犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊来源于农杆应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时检测整个进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定性或定量分析的方法。扩增时在加入对引物的同时加入个特异性的荧光探针，该探针为寡核苷酸，两端分别标记个报告荧光集团和个淬灭荧光集团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收扩增时，犜犪狇酶的外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光集团和淬灭荧光基团分离，从而荧光检测系统可接收到荧光信号，即每扩增条链，就有个荧菌的胭脂碱合成酶基因终止子。莽草酸磷酸合成酶基因。书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜蜂蜜中转基因成分检测方法普通犘犆犚方法和实时荧光犘犆犚方法犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔犿狅犱犻犳犻犲犱犮狅犿狆狅狀犲狀狋狊犻狀犺狅狀犲狔犆狅狀狋犲狀狋犻狅狀犪犾犘犆犚犪狀犱狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊普通离心机或其他等效设备。低温高速离心机或其他等效设备。制冰机。冰箱。恒温磁力搅拌器。计，最小显示单位，。移液器。管。离心管。蜂蜜中转基因成分检测方法普通方法和实时荧光方法。聚合酶链式反应狆狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻缓冲液犜犪狇酶正义引物反义引物模板加双蒸水至犘犆犚扩增程序反应参数为，引物的退火温度个循环，。引物退火温度见表。反应循环参数可根据基因扩增仪型号的不同进行适当调整。犘犆犚产物凝胶电泳用电泳缓冲液配制的琼脂糖凝胶。在电泳槽中加入电泳缓冲液，使液面刚刚没过凝胶。将扩增产物分别与适量加样缓。管。离心管。蜂蜜中转基因成分检测方法普通方法和实时荧光方法。犜犪狇聚合酶。溴化乙锭电泳缓冲液。电泳上样缓冲液。巯基乙醇。实验用水应符合中级水的规格。仪器设备恒温水浴。电子天平最小精度值。样品中核酸的定量蜂蜜样品中所提取的只犚方法范围本标准规定了蜂蜜中转基因成分的定性检测方法。本标准中适用于以转基因棉花转基因油菜等作为蜜源植物采集的蜂蜜或受到转基因作物污染的蜂蜜中的转基因成分的检测。规范化引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。菌的胭脂碱合成酶基因终止子。莽草酸磷酸合成酶基因。书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜蜂蜜中转基因成分检测方法普通犘犆犚方法和实时荧光犘犆犚方法犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔犿狅犱犻犳犻犲犱犮狅犿狆狅狀犲狀狋狊犻狀犺狅狀犲狔犆狅狀狋犲狀狋犻狅狀犪犾犘犆犚犪狀犱狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊扩增曲线图。定性检测狇狌犪犾犻狋犪狋犻狏犲犱犲狋犲犮狋犻狅狀对样品中转基因成分进行检测，以判定该样品是否为转基因产品。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售缩略语下列缩略语适用于本标准。转基因生物。花椰菜花叶病毒启动子。光犘犆犚狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲犘犆犚在反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时检测整个进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定性或定量分析的方法。扩增时在加入对引物的同时加入个特异性的荧光探针，该探针为寡核苷酸，两端分别标记个报告荧光集团和个淬灭荧光集团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收扩增时，犜犪狇酶的外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光集团和淬灭荧光基团分蜂蜜中转基因成分检测方法普通方法和实时荧光方法.液混合，点样。恒压，电泳犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售。凝胶成像仪下观察电泳结果，拍照并记录结果。犜犪狇聚合酶。溴化乙锭电泳缓冲液。电泳上样缓冲液。巯基乙醇。实验用水应符合中级水的规格。仪器设备恒温水浴。电子天平最小精度值。蜂蜜中转基因成分检测方法普通方法和实时荧光方扩增曲线图。定性检测狇狌犪犾犻狋犪狋犻狏犲犱犲狋犲犮狋犻狅狀对样品中转基因成分进行检测，以判定该样品是否为转基因产品。犛犖犜版权所有禁止翻制电子传阅发售缩略语下列缩略语适用于本标准。转基因生物。花椰菜花叶病毒启动子。的检测。通过植物内源基因的检测，和等外源基因的检测，确定上述主要成分是否含有植物外源基因，从而判定蜂蜜是否被转基因植物污染，可能被何种转基因植物污染。每次检测须设立相应的阳性对照阴性对照和试剂空白对照。犘犆犚所用引物扩增所用的引物的序列及扩增片段长度见附录。犘犆犚扩增反应体系扩增反应体系见表。表普通犘犆犚检测蜂蜜中内外源基因的反应体系试剂名称贮备液浓度加样量反应体系反应体系化引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和试验方法基因分析检测实验室技术要求植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法术语定义和缩略语术语和定义适合采用紫外分光光度法进行定量，所测得值为核酸总量。紫外分光光度法检测核酸浓度的最佳范围是，值应该在的区间内。将溶液做适当的稀释，放入蛋白核酸定量分析仪或紫外分光光度计的比色皿中，于处测定其吸收峰，双链或单链。级溶液的比值为。定性犘犆犚检测方法概述定性检测包括对蜂蜜中植物蜜源植物和非蜜源植物内源基因和外源基菌的胭脂碱合成酶基因终止子。莽草酸磷酸合成酶基因。书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖犜蜂蜜中转基因成分检测方法普通犘犆犚方法和实时荧光犘犆犚方法犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔犿狅犱犻犳犻犲犱犮狅犿狆狅狀犲狀狋狊犻狀犺狅狀犲狔犆狅狀狋犲狀狋犻狅狀犪犾犘犆犚犪狀犱狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊犃犵狉狅犫犪犮狋犲狉犻狌犿狋狌犿犲犳犪犮犻犲狀狊来源于农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子。莽草酸磷酸合成酶基因。普通离心机或其他等效设备。低温高速离心机或其他等效设备。制冰机。冰箱。恒温磁力搅拌器。计，最小显示单位，。移液器离，从而荧光检测系统可接收到荧光信号，即每扩增条链，就有个荧光分子形成，实现了荧光信号的积累与产物形成完全同步。就是通过对扩增反应中每个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量反应中，引入了种荧光化学物质，随着反应的进行，反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过个循环，收集次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到条荧犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀，犘犆犚体外酶催合成特异片段的方法，模板基因序列先经高温变性成为单链，在聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板两条链上相应的段互补序列发生退火而相互结合，接着在聚合酶的作用下以种脱氧核糖为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性退火