，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。恒温水浴锅。扩增仪。电泳仪。紫外凝胶成像仪。灭菌锅。基因测序仪。微量移液器。分析步骤模板的提取按照中规定的方法开启样品称取金枪鱼罐头肌肉组织样品于鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法法范围本标准规定了鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法。本标准适用于鱼类罐头中长鳍金枪鱼大目金枪鱼青干金枪鱼鲣鱼况之，则结果无效，应重新进行实验两份平行测试样品的结果不致空白对照或阴性对照出现条带阳性对照未出现目的条带。结果判断将所得产物利用基因测序仪进行双向测序，并将序列进行拼接，对照测序峰图进行校正，得到准确序列，输入核酸序列数据库如鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法法报批稿.列的为模板。琼脂糖凝胶电泳检测使用缓冲液配制琼脂糖凝胶，加热至沸腾溶解后，采取电泳前染色法，当凝胶温度在时，微量移液器加入溴化乙锭或其他可替代的染料，使其终浓度达到或工作浓度为，趁热将琼脂糖溶液均匀倒入制胶器，室温冷却至凝固琼脂糖凝胶电泳检测使用缓冲液配制琼脂糖凝胶，加热至沸腾溶解后，采取电泳前染色法，当凝胶温度在时，微量移液器加入溴化乙锭或其他可替代的染料，使其终浓度达到或工作浓度为，趁热将琼脂糖溶液均匀倒入制胶器，室温冷却至凝固。在电泳槽中加入个循环，最后在延伸。每个反应均设置个平行实验，并设置空白对照阳性对照和阴性对照，空白对照的反应体系中使用无菌双蒸水代替模板，阳性对照使用阳性样品提取的或金枪鱼为模板，阴性对照采用已知不含金枪鱼，使比值在之间。注也可使用等效试剂盒提取样品。扩增扩增体系引物各，模板，聚合酶，。扩增条件为温育，期间每隔颠倒混匀次温育后，室温离心后移取上清液至新的离心管中，加与上清液等体积的氯仿异戊醇溶液缓慢震荡，室温离心，重复该步骤次吸取上清液于另离心管中，加体积预冷的异丙醇在下静置，个循环，最后在延伸。每个反应均设置个平行实验，并设置空白对照阳性对照和阴性对照，空白对照的反应体系中使用无菌双蒸水代替模板，阳性对照使用阳性样品提取的或金枪鱼为模板，阴性对照采用已知不含金枪鱼序列的为模板无水乙醇。琼脂糖。溴化乙锭或其他可替代的染料。分子量标记。上样液。基因测序仪。微量移液器。分析步骤模板的提取按照中规定的方法开启样品称取金枪鱼罐头肌肉组织样品于无菌离心管中，加放入烧杯中加入约水，充分搅拌，然后加入冰乙酸，用水定容至，配制成缓冲液，室温保存，使用时用水稀释为缓冲液。提取液称取的放入试剂瓶中，再分别加入的溶液，的溶液和果判断当出现下列情况之，则结果无效，应重新进行实验两份平行测试样品的结果不致空白对照或阴性对照出现条带阳性对照未出现目的条带。结果判断将所得产物利用基因测序仪进行双向测序，并将序列进行拼接，对照测序峰图进行校正，得到准确序列，输入核酸序缓冲液，使溶液没过胶面，移取扩增产物与上样液混合均匀后，点样，同时在点样孔中加入分子量标记恒压，电泳。在紫外凝胶成像仪下观察电泳结果，拍照并记录结果。结果判断当出现下列，个循环，最后在延伸。每个反应均设置个平行实验，并设置空白对照阳性对照和阴性对照，空白对照的反应体系中使用无菌双蒸水代替模板，阳性对照使用阳性样品提取的或金枪鱼为模板，阴性对照采用已知不含金枪鱼序列的为模板列的为模板。琼脂糖凝胶电泳检测使用缓冲液配制琼脂糖凝胶，加热至沸腾溶解后，采取电泳前染色法，当凝胶温度在时，微量移液器加入溴化乙锭或其他可替代的染料，使其终浓度达到或工作浓度为，趁热将琼脂糖溶液均匀倒入制胶器，室温冷却至凝固测浓度和纯度，使比值在之间。注也可使用等效试剂盒提取样品。扩增扩增体系引物各，模板，聚合酶，。扩增条件为鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法法报批稿.，用水定容至，灭菌，备用。乙醇量取无水乙醇，用水定容至。琼脂糖凝胶称取琼脂糖于锥形瓶中，加入缓冲液，加热溶解。鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法法报批稿。聚合酶。浓盐酸。氢氧化钠。溴代十烷基甲基铵。异丙列的为模板。琼脂糖凝胶电泳检测使用缓冲液配制琼脂糖凝胶，加热至沸腾溶解后，采取电泳前染色法，当凝胶温度在时，微量移液器加入溴化乙锭或其他可替代的染料，使其终浓度达到或工作浓度为，趁热将琼脂糖溶液均匀倒入制胶器，室温冷却至凝固上样液。聚合酶。浓盐酸。氢氧化钠。溴代十烷基甲基铵。异丙醇。缓冲液在水中，依次加入溶液和，用水定容至，灭菌，备用。缓冲液称取和的置于恒温水浴锅中，温育，期间每隔颠倒混匀次温育后，室温离心后移取上清液至新的离心管中，加与上清液等体积的氯仿异戊醇溶液缓慢震荡，室温离心，重复该步骤次吸取上清液于另离心管中，加体积预冷的异丙醇在数据库如等，与已知金枪鱼品种序列进行同源性比对，综合分析比对结果，报告样品中金枪鱼的种属信息。鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法法报批稿。无水乙醇。琼脂糖。溴化乙锭或其他可替代的染料。分子量标记。，个循环，最后在延伸。每个反应均设置个平行实验，并设置空白对照阳性对照和阴性对照，空白对照的反应体系中使用无菌双蒸水代替模板，阳性对照使用阳性样品提取的或金枪鱼为模板，阴性对照采用已知不含金枪鱼序列的为模板。在电泳槽中加入缓冲液，使溶液没过胶面，移取扩增产物与上样液混合均匀后，点样，同时在点样孔中加入分子量标记恒压，电泳。在紫外凝胶成像仪下观察电泳结果，拍照并记录结果。个循环，最后在延伸。每个反应均设置个平行实验，并设置空白对照阳性对照和阴性对照，空白对照的反应体系中使用无菌双蒸水代替模板，阳性对照使用阳性样品提取的或金枪鱼为模板，阴性对照采用已知不含金枪鱼加入氯仿甲醇水，体积比溶液，室温静置过夜，室温离心，弃上清，再用无菌去离子水清洗样品。同时称取金枪鱼阳性样品进行处理分别称取中制备的罐头样品和阳性样品，置于不同的离心管中，分别加入提取液，置于恒温水浴锅静置室温离心后弃去上清液，加入预冷的乙醇进行洗涤两次，然后室温离心弃去乙醇，所得沉淀在室温下干燥沉淀用缓冲液或无菌双蒸水溶解，保存备用按规定的方法鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法法报批稿.列的为模板。琼脂糖凝胶电泳检测使用缓冲液配制琼脂糖凝胶，加热至沸腾溶解后，采取电泳前染色法，当凝胶温度在时，微量移液器加入溴化乙锭或其他可替代的染料，使其终浓度达到或工作浓度为，趁热将琼脂糖溶液均匀倒入制胶器，室温冷却至凝固无菌离心管中，加入氯仿甲醇水，体积比溶液，室温静置过夜，室温离心，弃上清，再用无菌去离子水清洗样品。同时称取金枪鱼阳性样品进行处理分别称取中制备的罐头样品和阳性样品，置于不同的离心管中，分别加入提取液个循环，最后在延伸。每个反应均设置个平行实验，并设置空白对照阳性对照和阴性对照，空白对照的反应体系中使用无菌双蒸水代替模板，阳性对照使用阳性样品提取的或金枪鱼为模板，阴性对照采用已知不含金枪鱼东方狐鲣巴鲣圆舵鲣扁舵鲣金枪鱼类的定性鉴别。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件等，与已知金枪鱼品种序列进行同源性比对，综合分析比对结果，报告样品中金枪鱼的种属信息。鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法法报批稿。恒温水浴锅。扩增仪。电泳仪。紫外凝胶成像仪。灭菌锅。本标准为首次发布。缓冲液，使溶液没过胶面，移取扩增产物与上样液混合均匀后，点样，同时在点样孔中加入分子量标记恒压，电泳。在紫外凝胶成像仪下观察电泳结果，拍照并记录结果。结果判断当出现下列，个循环，最后在延伸。每个反应均设置个平行实验，并设置空白对照阳性对照和阴性对照，空白对照的反应体系中使用无菌双蒸水代替模板，阳性对照使用阳性样品提取的或金枪鱼为模板，阴性对照采用已知不含金枪鱼序列的为模板室温离心后弃去上清液，加入预冷的乙醇进行洗涤两次，然后室温离心弃去乙醇，所得沉淀在室温下干燥沉淀用缓冲液或无菌双蒸水溶解，保存备用按规定的方法检测浓度和纯鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法法范围本标准规定了鱼类罐头中金枪鱼品种鉴别方法。本标准适用于鱼类罐头中长鳍金枪鱼大目金枪鱼青干金枪鱼鲣鱼加入氯仿甲醇水，体积比溶液，室温静置过夜，室温离心，弃上清，再用无菌去离子水清洗样品。同时称取金枪鱼阳性样品进行处理分别称取中制备的罐头样品和阳性样品，置于不同的离心管中，分别加入提取液，置于恒温水浴锅